二陳湯對嗎啡依賴小鼠位置偏愛效應的影響*

康潔 張凌媛 丁珊珊 沈建英

中醫(yī)痰病學術，是具有重要的探索價值和廣泛的應用前景的學術寶庫，是中醫(yī)藥治療多種疑難雜病的優(yōu)勢、特色所在。目前關于痰證的研究多扎根于臨床，缺乏必要的動物實驗研究，關于痰證的本質研究還比較少。因此，研制出合理的痰證動物模型可以為揭示痰證的本質提供一個基礎平臺。本課題組從中醫(yī)體質角度探討毒品復吸的發(fā)病機制，先期調查發(fā)現(xiàn)（國家自然基金項目，課題編號30973718），當機體存在痰病理產物和陽虛、血熱等病理變化時，易引起“毒癮”復發(fā)，而其中又以痰最為突出，筆者認為，“毒癮”的纏綿難除特性可能與“痰”有關，而此痰有其特異性，是“ 頑痰”，“頑痰”是吸毒人群“毒癮”纏綿難除的特性[1]。由此，筆者思考：毒品成癮動物模型是否也具有痰證纏綿難除病理特點呢？因此，筆者采用國際公認的條件性位置偏愛（CPP）小鼠模型[2-6]，以經典燥濕化痰方反證治療，驗證我們這一假想，從而進一步探索研制痰證動物模型。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 昆明種小鼠，雄性，體重18～22 g，由福建中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。所有小鼠飼養(yǎng)條件：清潔級動物房、單籠、照明12 h/d，室溫（22±2）℃，相對濕度為30%～40%，喂常規(guī)飼料，自由進食飲水。

1.1.2 藥品 鹽酸嗎啡粉，購自青海制藥廠有限公司，規(guī)格：1 g，批號：20111101，用生理鹽水配成所需要的濃度。

1.1.3 藥物準備 二陳湯按重量比加8倍量水浸泡半小時，文火煎煮2次，第1次30 min，第2次30 min，合并2次水煎液，3000 r/m離心15 min，倒出上清液，70 ℃恒溫水浴，濃縮至每毫升藥液含生藥0.27 g，高壓滅菌后4 ℃冰箱儲存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.4 設備 條件性位置偏愛箱根據(jù)文獻制作：箱子由兩個正方體組成，中間有一可活動的隔板，將隔板抽起后，小鼠可在兩個箱子之間自由活動。箱子的一側用油漆涂成黑色，用柔軟毛毯將底板底面制成粗糙面，另一側用油漆涂成白色，用玻璃底板制成光滑面，使整個偏愛箱具有明顯不同的視覺和觸覺[7]。

1.2 方法

1.2.1 建立嗎啡依賴CPP小鼠模型及其消退和誘導復發(fā) 在安靜環(huán)境的條件下，采用條件位置偏愛箱建立嗎啡依賴 CPP及其消退和誘導復發(fā)。在實驗開始之前，將小鼠放入條件位置偏愛箱中適應環(huán)境，小鼠可在箱內自由活動，上下午各1 h，共7 d[8]。

1.2.2 預測試階段 在條件位置偏愛箱內，測定每只小鼠在白箱的停留時間，1次/d，連續(xù)3 d，最后取平均值，以小鼠偏愛的白箱作為伴藥箱進行實驗，檢測白箱停留時間：測試小鼠60 min內在白箱中的停留時間。

1.2.3 訓練階段 建立嗎啡精神依賴模型，每天9AM時給予嗎啡（9 mg/kg，sc），連續(xù)7 d，注射嗎啡后將小鼠立即放入白箱（伴藥箱），在箱內停留60 min，每天5PM皮下注射等容積生理鹽水后放入黑箱（非伴藥箱），亦在箱內停留60 min。7 d之后停用嗎啡，測定停用嗎啡后的第1、2、3天小鼠在白箱停留時間[9]。

1.2.4 停藥期 從停用嗎啡算起連續(xù)15 d，每天將小鼠放入條件位置偏愛箱中自由活動，每天60 min。

1.2.5 動物分組及給藥 檢測二陳湯位置偏愛效應時，將正常小鼠隨機分成正常對照組、二陳湯低劑量、中劑量、高劑量共四組，每組10只，正常對照組皮下注射生理鹽水，二陳湯組按4 mL/kg的劑量分別灌胃給藥，各組用藥5 d，每天2次（9AM，5PM）第6天測定各組小鼠在白箱中的停留時間；檢測二陳湯對CPP小鼠影響時，將小鼠隨機分為嗎啡組、正常對照組、二陳湯低劑量、中劑量、高劑量共5組，每組10只，嗎啡組皮下注射嗎啡，正常對照組給予皮下注射氯化鈉注射液，二陳湯組則按4 mL/kg的劑量分別灌胃給藥，各組用藥5 d，每天2次（9AM，5PM），灌胃后30 min注射嗎啡，第6天開始停用嗎啡，將小鼠放入條件位置偏愛箱中自由活動，第20天給予嗎啡組及二陳湯組皮下注射氫化可的松5 mg/kg，15 min后將小鼠放入條件位置偏愛箱，測定其在白箱中停留的時間。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 15.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料用（±s）表示，比較采用t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 二陳湯位置偏愛效應檢測結果 各組小鼠分別測得在白箱中停留時間，二陳湯各劑量組與對照組比較差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；與其各自給藥前比較差異也無統(tǒng)計學意義（P>0.05），說明二陳湯無獎賞效應或厭惡效應，見表1。

表1 二陳湯的自身條件性位置偏愛效應（±s） s

表1 二陳湯的自身條件性位置偏愛效應（±s） s

組別 小鼠在白箱停留時間給藥前 給藥后正常對照組（n=10） 504±27 511±31二陳湯低劑量組（n=10） 515±19 524±46二陳湯中劑量組（n=10） 498±42 526±28二陳湯高劑量組（n=10） 533±14 509±35

2.2 二陳湯對嗎啡引起的位置偏愛效應的影響 正常對照組小鼠在白箱停留時間為（522±38）s，嗎啡組為（683±47）s，嗎啡組小鼠在白箱停留時間明顯長于正常對照組，比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），說明嗎啡使小鼠產生了明顯的位置偏愛效應；二陳湯低劑量組+嗎啡組的小鼠在白箱停留時間為（642±16）s，二陳湯中劑量組+嗎啡組的小鼠在白箱停留時間為（577±41）s，二陳湯高劑量組+嗎啡組的小鼠在白箱停留時間為（554±30）s，二陳湯低劑量組在白箱中停留時間明顯長于正常對照組，而二陳湯中、高劑量組在白箱中停留時間明顯短于嗎啡組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），表明二陳湯中、高劑量組能夠消除嗎啡所致小鼠的條件性位置偏愛。

2.3 二陳湯對嗎啡點燃誘導CPP重建的影響 正常對照組小鼠在白箱停留時間為（514±24）s，嗎啡組為（675±15）s，嗎啡組小鼠在白箱停留時間明顯長于正常對照組，比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），提示CPP小鼠重建模型建立；二陳湯低劑量組+嗎啡組的小鼠在白箱停留時間為（649±38）s，二陳湯中劑量組+嗎啡組的小鼠在白箱停留時間為（584±32）s，二陳湯高劑量組+嗎啡組的小鼠在白箱停留時間為（545±49）s，二陳湯低劑量組在白箱中停留時間明顯長于正常對照組，而二陳湯中、高劑量組在白箱中停留時間明顯短于嗎啡組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），表示二陳湯中、高劑量組可以抑制嗎啡點燃誘導的CPP重建。

3 討論

痰證是因體內水液代謝失常而產生一些列證候的一類病證。“百病皆有痰作祟”說明痰的致病廣泛。痰飲停留臟腑，影響臟腑功能，流注肢體，變生怪病。如停積于肺、痰鳴如吼、氣息喘促。痰常與濕邪共同致病，因此具有纏綿難愈的病理特點。本課題先期調查發(fā)現(xiàn)，吸毒人員有纏綿難愈的特點，在發(fā)作期表現(xiàn)多見痰證，如呵欠淚出，痰涌嘔逆等，證明“毒癮”的纏綿難除的痰特性始終存在[10]。

條件位置偏愛實驗（CPP）是目前評價藥物精神依賴性的經典實驗模型，也是廣泛應用于尋找抗覓藥行為的有效工具。本研究意在探討CPP小鼠模型是否也具有痰證特點，在小鼠連續(xù)使用嗎啡后，能迅速形成對用藥相關環(huán)境的CPP，當小鼠暴露于以往用藥有關的環(huán)境或者接觸到其他相關線索時，常引發(fā)繼發(fā)性的覓藥行為，即人類中的復吸現(xiàn)象。二陳湯源于宋代《太平惠民和劑局方》，由法半夏、陳皮、茯苓、甘草組成，是一種能燥濕化痰、理氣和中的中醫(yī)經典藥方，臨床上經常用于治療濕痰證，如咳嗽痰多、色白易咳、惡心嘔吐、胸膈痞悶、肢體困重或頭眩心悸等。因此，本實驗采用經典方二陳湯進行反證治療，結果表明二陳湯中、高劑量組在一定程度上能能夠消除嗎啡所致小鼠的條件性位置偏愛，可以抑制嗎啡點燃誘導的CPP重建。因此，從某種角度看，CPP小鼠動物模型可以作為中醫(yī)痰證模型，為進一步探索研制痰證動物模型提供實驗基礎。

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