膠質瘤組織中CPEB4和Bcl-xL的表達及預后影響因素分析*

梁 博，王新軍，周少龍

鄭州大學第五附屬醫院神經外科 鄭州 450052

研究[1]表明胞質多聚腺苷酸化成分結合蛋白4(cytoplasmic polyadenylation element-binding protein 4, CPEB4)對于基因轉錄后調節起關鍵作用，CPEB4的過表達存在于多種腫瘤中。Bcl-xL蛋白在細胞的凋亡過程中發揮重要作用，在多種腫瘤組織中有過表達現象，它的過表達可使腫瘤細胞逃避凋亡, 與腫瘤的發生、發展、侵襲、轉移甚至耐藥性有關[2]。作者應用免疫組化技術檢測了不同級別膠質瘤組織中CPEB4和Bcl-xL的表達，并探討二者及多種臨床因素與膠質瘤患者預后的關系。

1 材料與方法

1.1材料2008至2009年在鄭州大學第五附屬醫院神經外科接受手術、資料完整的膠質瘤患者165例，其中男89例，女76例，年齡3～82(47.2±3.1)歲。按WHO中樞神經系統腫瘤分類，其中低級別膠質瘤69例，包括毛細胞型星形細胞瘤(Ⅰ級)27例和彌漫型星形細胞瘤(Ⅱ級)42例；高級別膠質瘤96例，包括間變性星型細胞瘤(Ⅲ級)61例和膠質母細胞瘤(Ⅳ級)35例。其他評估因素包括患者年齡、性別、術前KPS評分、腫瘤直徑、腫瘤切除范圍、術后是否放療或化療、腫瘤位置、病理級別、是否復發及術后3 a生存率等。術后隨訪情況包括是否死亡及死亡時間、癥狀是否有進展及進展發生的時間。隨訪資料的取得來源于患者本人或家屬的門診或電話隨訪，隨訪期2010至2012年。

1.2膠質瘤組織中CPEB4和Bcl-xL的免疫組化染色檢測CPEB4、Bcl-xL兔抗人多克隆抗體分別購自美國Sigma公司和武漢博士德生物工程有限公司，即用型SP超敏免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒購自福州邁新生物技術有限公司。CPEB4和Bcl-xL一抗均按1200稀釋，標本經脫蠟、抗原修復后進行免疫組化染色，蘇木素復染，脫水、封片后顯微鏡下觀察。以PBS液代替一抗作陰性對照，已知陽性的胰腺癌組織切片作陽性對照。

1.3結果判定由兩位病理科醫師采用雙盲法觀察切片。CPEB4、Bcl-xL蛋白表達均以腫瘤細胞胞質棕黃色著色為染色陽性。每個切片選取5個高倍視野，每個視野計數100個細胞，計算陽性細胞百分比。采用Ortiz-Zapater等[1]提出的染色標準評定CPEB4的檢測結果：陽性細胞百分比≤10%為 1分，～50%為2分，>50%為3分；無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分。兩項得分相加為最后得分，0分為陰性，≥1分為陽性。采用Karczmarek-Borowska等[2]提出的標準評定Bcl-xL蛋白檢測結果：陽性細胞百分比≤10%為陰性，>10%為陽性。

1.4統計學處理應用SPSS 17.0處理數據。不同級別膠質瘤組織中CPEB4和Bcl-xL蛋白陽性表達率的比較采用χ2檢驗，多種因素與膠質瘤患者3 a生存率的關系采用logistic回歸模型進行分析，選擇其中有意義的變量進行多因素分析，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1膠質瘤組織中CPEB4和Bcl-xL蛋白的表達

見圖1、表1。

圖1 膠質瘤組織中CPEB4(A)和Bcl-xL(B)蛋白的表達(SP，×400)

表1 不同級別的膠質瘤組織中CPEB4和Bcl-xL蛋白的表達 例(%)

2.2影響膠質瘤患者預后指標的單因素和多因素分析主要變量賦值見表2。

表2 主要變量賦值表

利用logistic回歸分析篩選出術前KPS評分、腫瘤直徑、腫瘤切除范圍、術后放療、術后化療、病理級別、CPEB4和Bcl-xL表達8個有意義的變量。對單因素分析有意義的因素進行logistic回歸分析，最終能進入回歸模型的變量有6個，病理級別、CPEB4和Bcl-xL的表達是膠質瘤預后的危險因素，而術前KPS評分>80分、腫瘤全切、術后化療則為保護因素，見表3。影響膠質瘤預后的全部指標同時進入判別方程進行分析，將判別分類與原分類對照，判別符合率90.9%；用前進法篩選出6個影響膠質瘤預后的指標，判別函數Y=-0.644+1.386X3+1.052X5+1.248X6-2.679X10-1.042X11-2.659X12。將判別分類與原分類對照，判別符合率為88.3%，與全部指標進入判別方程得到的判別符合率接近。

表3 膠質瘤預后危險因素的多因素分析

3 討論

腫瘤的發生發展是一個多基因參與的復雜過程，其中包括原癌基因的激活、抑癌基因的失活[3]以及凋亡基因的異常表達等。CPEB4是CPEBs家族中的一員，這個家族的成員主要通過控制靶基因的多聚腺苷酸化來調節其翻譯過程[4]。已有報道[5-6]認為CPEB4是神經細胞中的一種存活蛋白，可以調控減數分裂的細胞。Ortiz-Zapater等[1]研究發現CPEB4在胰腺癌及膠質母細胞瘤組織中呈過表達，并認為過表達的CPEB4與腫瘤的生長和血管生成相關；通過對小鼠腫瘤模型的研究發現敲除CPEB4基因的腫瘤細胞其侵襲性和惡性轉移能力明顯減弱，且腫瘤的生長和增殖能力也顯著減弱，腫瘤血管生成減少，小鼠存活率升高。CPEB4的過表達還存在于許多其他種類的腫瘤中，如皮膚癌、結直腸癌、腎癌及子宮內膜癌等[7]。然而Tian等[8]在最近的研究中發現，在肝癌組織中，CPEB4的蛋白及mRNA表達水平下調，CPEB4的高表達預示著肝癌患者有一個較好的預后。這種矛盾的現象可能與腫瘤組織的特異性有關，不同的細胞中，CPEB4通過結合不同基因3’-UTR區的CPE序列來調節靶基因的下游目標，以完成對基因翻譯過程的控制。Bcl-xL蛋白是Bcl-2蛋白家族中的重要成員，是一種抑制凋亡的蛋白，在多種惡性腫瘤中表達上調[9]，與腫瘤的生長分化關系密切。該研究結果提示，CPEB4和Bcl-xL的陽性表達率與膠質瘤的惡性程度密切相關，CPEB4和Bcl-xL表達水平的不同可能是膠質瘤分化程度存在差異的原因之一。

影響膠質瘤患者預后的因素較多。多因素分析篩選出影響預后的因素有6個：術前KPS評分、腫瘤切除范圍、病理級別、術后化療、CPEB4和Bcl-xL表達。判別分析顯示影響膠質瘤預后各項因素對預后的判別符合率(90.9%)與以上6因素對預后的判別符合率(88.3%)非常接近，提示這6個因素是預測膠質瘤預后比較敏感的指標，有一定的臨床應用價值。

該研究結果表明術前KPS評分是影響患者生存率的主要因素，與Valduvieco等[10]的研究結果一致。術前KPS評分高說明腫瘤發展處于初級階段且患者身體條件較好，對手術的耐受能力較強，因此術后具有較高的生存率。

目前膠質瘤的治療多采用手術、放療或化療聯合的綜合治療，但手術仍是最主要的治療方法且仍是影響存活率的最主要因素。美國兒童腫瘤聯合調查組大宗病例分析[11]證實，在膠質母細胞瘤患者中，根治性切除和部分切除的5 a無瘤生存率分別為(29±6)%和(4±3)%；在間變性星形細胞瘤患者中，5 a無瘤生存率分別為(44±11)%和(22±6)%。Allahdini等[12]研究發現最大程度地切除腫瘤對延長患者生存期有重要意義，不僅如此，Bloch等[13]還發現對于首次手術行次全切的膠質瘤復發患者，二次手術行腫瘤全切仍能最大程度延長患者生存期。該研究結果顯示腫瘤全切對患者預后有重要意義，與上述研究結論一致，因此對膠質瘤患者，手術應當爭取全切，這是提高手術效果、減少復發的根本措施。

研究[14]顯示膠質瘤的病理級別與患者預后有關，病理級別越高，患者預后越差。該研究結果亦表明膠質瘤病理級別與患者3 a生存率有關，與上述研究結論一致，這也符合膠質瘤本身所固有的生物學特性。

放、化療是膠質瘤治療的輔助手段，但是目前針對放療和化療對預后的影響仍有爭議。對于毛細胞型星形細胞瘤，有文獻[11]認為，未能全切者可給予一定劑量的放療，不主張化療。良性星形細胞瘤術后實性殘余腫瘤行放射治療對延長生存期有肯定效果。但歐洲癌癥治療研究組織和英國醫學研究理事會[15]的研究結果認為低級別膠質瘤患者術后放療可以提高無進展生存期，但對生存率無影響。針對放療不敏感的膠質瘤患者，化療是一種必要的治療方式，但目前化療方案較多，不同化療方案的預后也不盡相同。一項由歐洲癌癥研究治療組織和加拿大國立癌癥研究院[16]聯合進行的Ⅲ期臨床試驗認為在放療基礎上聯合應用替莫唑胺化療后再給予6個周期的替莫唑胺輔助化療可明顯延長患者生存期。該組數據分析結果表明術后化療對預后影響較大，是一項獨立影響因素。

綜上所述，CPEB4和Bcl-xL陽性表達與膠質瘤惡性程度有關；術前KPS評分、腫瘤切除范圍、術后化療、病理級別、CPEB4和Bcl-xL的表達可作為考察膠質瘤患者預后情況的重要指標。

[1]Ortiz-Zapater E, Pineda D, Martínez-Bosch N, et al. Key contribution of CPEB4-mediated translational control to cancer progression[J]. Nat Med，2011,18(1):83

[2]Karczmarek-Borowska B, Filip A, Wojcierowski J, et al. Estimation of prognostic value of Bcl-xL gene expression in non-small cell lung cancer[J]. Lung Cancer, 2006,51(1):61

[3]馬林,徐國本,宋來君,等. 人腦星形細胞瘤組織中Survivin與 P53的表達[J]. 鄭州大學學報：醫學版，2006, 41(1):142

[4]梁博，王新軍.胞質多聚腺苷酸化成分結合蛋白與腫瘤相關研究進展[J]. 腫瘤防治研究, 2013, 40(4):33

[5]Kan MC, Oruganty-Das A, Cooper-Morgan A, et al. CPEB4 is a cell survival protein retained in the nucleus upon ischemia or endoplasmic reticulum calcium depletion[J]. Mol Cell Biol, 2010, 30(24): 5658

[6]Igea A, Mendez R. Meiosis requires a translational positive loop where CPEB1 ensues its replacement by CPEB4[J]. EMBO J,2010, 29(13): 2182

[7]Fernández-Miranda G, Méndez R. The CPEB-family of proteins, translational control in senescence and cancer[J]. Ageing Res Rev，2012,11(4):460

[8]Tian Q, Liang L, Ding J, et al. MicroRNA-550a acts as a pro-metastatic gene and directly targets cytoplasmic polyadenylation element-binding protein 4 in hepatocellular carcinoma[J]. PLoS One, 2012, 7(11):e48958

[9]王新軍, 趙忠偉, 壽紀新, 等. 髓母細胞瘤組織Bcl-xL mRNA和蛋白表達及臨床意義[J]. 實用兒科臨床雜志, 2006, 21(23):1615

[10]Valduvieco I, Verger E, Bruna J,et al. Impact of radiotherapy delay on survival in glioblastoma[J]. Clin Transl Oncol,2013,15(4):278

[11]王忠誠.王忠誠神經外科學[M].武漢: 湖北科學技術出版社,2005.

[12]Allahdini F, Amirjamshidi A, Reza-Zarei M，et al. Evaluating the prognostic factors effective on the outcome of patients with glioblastoma multiformis: does maximal resection of the tumor lengthen the median survival?[J]. World Neurosurg,2010,73(2):128

[13]Bloch O, Han SJ, Cha S, et al. Impact of extent of resection for recurrent glioblastoma on overall survival[J]. J Neurosurg,2012,117(6):1032

[14]Combs SE, Steck I, Schulz-Ertner D,et al. Long-term outcome of high-precision radiotherapy in patients with brain stem gliomas: results from a difficult-to-treat patient population using fractionated stereotactic radiotherapy[J]. Radiother Oncol,2009,91(1):60

[15]van den Bent MJ, Afra D, de Witte O,et al. Long-term efficacy of early versus delayed radiotherapy for low-grade astrocytoma and oligodendroglioma in adults:the EORTC 22845 randomised trial[J]. Lancet,2005,366(9490):985

[16]Stupp R, Hegi ME, Mason WP, et al. Effects of radiotherapy with concomitant and adjuvant temozolomide versus radiotherapy alone on survival in glioblastoma in a randomised phase Ⅲ study: 5-year analysis of the EORTC-NCIC trial[J]. Lancet Oncol,2009,10(5):459