子癇前期患者胎盤組織中DLX3和Syncytin的表達

趙先蘭,劉 彩,劉 傳

鄭州大學第一附屬醫院婦產科 鄭州 450052

子癇前期是妊娠期高血壓疾病中的一種，該病嚴重影響母嬰健康，是孕產婦和圍產兒病死的主要原因。近年來，隨著胎盤滋養細胞缺血缺氧及“胎盤淺著床”學說日益受到關注，探索有關影響胎盤滋養細胞生長分化能力的因素已成為研究子癇前期發病機制的熱點之一[1-3]。DLX3基因是DLX基因家族中的一員，含有高度保守的轉錄序列，在調控胚胎生長發育的許多方面起重要作用。研究[4]顯示DLX3基因可能參與胎盤滋養細胞的生長分化，但其與子癇前期的關系尚未見報道。Syncytin是人內源性逆轉錄缺陷病毒(HERV)系列中HERV-W 編碼的糖包膜蛋白，Mi 等[2]首次報道Syncytin可介導胎盤滋養細胞的生長分化。作者通過檢測DLX3和Syncytin mRNA和蛋白在子癇前期胎盤組織中的表達，探索2者在子癇前期發病中的可能作用及相互關系。

1 對象與方法

1.1研究對象選擇2011年3月至12月在鄭州大學第一附屬醫院產科分娩的子癇前期患者60例，診斷標準及分類參照文獻[4]，其中輕度子癇前期30例，年齡和孕周分別為(31.69±3.61)歲、(35.81±2.16)周，重度子癇前期30例，年齡及孕周分別為(32.16±4.82)歲、(34.73±2.92)周。同時選擇同期正常孕婦30例作為對照，年齡及孕周分別為(28.62±2.81)歲、(37.91±2.51)周。研究對象均無其他妊娠期合并癥及并發癥，各組年齡、孕周等一般情況均衡。

1.2標本的采集、處理及保存胎盤娩出15 min內，取近臍帶根部胎盤母面約1 cm2的組織2塊，沖洗干凈，即刻分裝于經焦炭酸二乙酯(diethylpyrocarbonate, DEPC)水處理過的2 mL凍存管，置于-80 ℃冰箱中保存。1份用于RT-PCR，另1份用于ELISA。

1.3胎盤組織中DLX3和SyncytinmRNA的檢測

按Trizol總RNA提取試劑盒(美國Invitrogen公司)說明書提取胎盤組織總RNA。紫外分光光度計鑒定RNA的純度，15 g/L瓊脂糖凝膠電泳鑒定RNA的完整性。每個標本分別取8 μL總RNA逆轉錄得cDNA，操作嚴格按逆轉錄試劑盒說明書進行。PCR反應體系為50 μL，其中DNA聚合酶(5 kU/L)1 μL，上下游引物各1 μL，2.5 mmol/L dNTPs 4 μL，cDNA 2 μL，10×Easy Tap Buffer 5 μL，DEPC水 36 μL。反應條件為94 ℃ 2 min；94 ℃ 30 s，55 ℃ 35 s，72 ℃ 2 min，循環35次；72 ℃ 6 min。引物序列見表1。

表1 引物序列

取3 μL PCR產物用15 g/L瓊脂糖凝膠電泳，電泳條件90 V電壓下20 min，70 V電壓下20 min。凝膠成像系統拍攝圖像，用D-140圖像記錄分析系統進行分析。以目的基因與內參條帶灰度值的比值作為目的基因mRNA的相對表達量。

1.4胎盤組織中DLX3和Syncytin蛋白的檢測采用固相夾心ELISA法測定，具體步驟嚴格按照試劑盒(武漢博士德生物工程公司)說明書進行。

1.5胎兒臍動脈血流S/D值及胎頭雙頂徑測定終止妊娠前3天內分別用彩色多普勒超聲測定胎兒臍動脈血流S/D值及胎頭雙頂徑。

1.6統計學處理采用SPSS 17.0進行數據分析，3組胎盤組織中DLX3和Syncytin 表達、胎兒臍動脈血流S/D值及胎頭雙頂徑的比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢測；輕(重)度子癇前期組DLX3與Syncytin表達相關性，輕(重)度子癇前期組DLX3或Syncytin蛋白的表達與胎兒臍動脈血流S/D值和胎頭雙頂徑的關系均采用Pearson相關分析進行評估，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 3組胎盤組織中DLX3、SyncytinmRNA和蛋白的表達以及胎兒臍動脈血流S/D值、胎頭雙頂徑測量結果見圖1、表2。

2.2子癇前期患者胎盤組織中DLX3與Syncytin表達的相關關系輕、重度子癇前期組胎盤組織中DLX3與Syncytin的表達均呈正相關(mRNA：r=0.429、0.513，蛋白：r=0.579、0.677，P<0.05)。

2.3子癇前期患者胎盤組織中DLX3、Syncytin蛋白的表達與胎兒臍動脈血流S/D值及胎頭雙頂徑的關系輕度子癇前期組DLX3和Syncytin蛋白的表達與胎兒臍動脈血流S/D值均呈負相關(r=-0.324和-0.352，P<0.05)，與胎頭雙頂徑均呈正相關(r= 0.431和0.510，P<0.05)。重度子癇前期組DLX3和Syncytin蛋白的表達與胎兒臍動脈血流S/D值均呈負相關(r=-0.624和-0.637，P<0.05)，與胎頭雙頂徑均呈正相關(r=0.536和0.617，P<0.05)。

表2 3組胎盤組織中DLX3、Syncytin mRNA和蛋白的表達及胎兒臍動脈血流S/D值、胎頭雙頂徑的測量結果比較

*與對照組比較，P<0.05; #與輕度子癇前期組比較，P<0.05。

3 討論

3.1DLX3與子癇前期DLX3含有高度保守的轉錄序列，能夠編碼一種通過同源域結合DNA并對下游靶基因表達進行調節的特殊轉錄因子。DLX3在許多細胞的功能發育過程中發揮重要的轉錄調控作用，如牙胚、頜面部、毛囊以及成骨細胞等的發育過程均有DLX3基因的參與[5]。

人DLX3基因與鼠DLX3基因高度同源。在小鼠模型中，當敲除DLX3基因后會因胎盤發育障礙導致小鼠胚胎死亡，DLX3主要在小鼠胎盤滋養細胞中表達，缺失DLX3可能會影響胎盤迷路的擴建[3]。Chui 等[1]研究發現，在人類早期妊娠和足月妊娠的胎盤組織中，DLX3廣泛分布于絨毛細胞滋養細胞、合體滋養細胞、微血管內皮細胞以及一些胎盤間葉組織的基質細胞。因此，推測DLX3參與滋養細胞的增殖分化以及胎盤血管床的構建。DLX3表達失調，可能引起胎盤形態異常及功能障礙，進而導致病理妊娠的發生。

作者利用RT-PCR和ELISA方法在子癇前期患者的胎盤組織中檢測到DLX3 mRNA和蛋白的表達均低于對照組，且重度組低于輕度組，提示子癇前期的發病與胎盤組織中DLX3的表達下調有關，且其表達程度與疾病嚴重程度有關。

3.2Syncytin與子癇前期Syncytin只在胎盤組織中特異性高表達，通過介導滋養細胞的分化融合，從而在胎盤發育發揮重要作用[6-7]。

近年來研究[8-9]表明，Syncytin表達減少可能導致合體滋養細胞形成減少，浸潤能力下降，影響胎盤滋養層的血管構建和功能完善，導致胎盤低灌注，絨毛缺血缺氧，此病理生理變化過程符合子癇前期形成的“胎盤淺著床”學說。胡蓉等[10]研究發現子癇前期滋養細胞發育異常可能與缺氧導致Syncytin表達下降有關。而Syncytin表達下降又進一步影響合體滋養細胞形成，加重胎盤缺血缺氧。

該研究結果顯示，子癇前期組胎盤組織中的Syncytin mRNA和蛋白表達均顯著低于對照組，且重度組低于輕度組，提示Syncytin低表達不利于絨毛細胞滋養細胞的增殖分化及浸潤，可導致胎盤滋養層和血管功能紊亂，其表達與子癇前期的發病及疾病進展有關。

3.3子癇前期胎盤組織中DLX3與Syncytin表達的關系研究[11]發現在誘導BeWo細胞分化過程中，DLX3和Syncytin的表達均較對照組顯著升高；通過cDNA質粒轉染技術使BeWo細胞中DLX3過度表達，檢測到Syncytin表達隨之顯著升高。Chui等[11]利用siRNA技術使BeWo細胞中DLX3低表達，檢測到Syncytin的表達隨之顯著下降。

該研究結果顯示，在輕度子癇前期和重度子癇前期的胎盤組織中，DLX3與Syncytin mRNA 和蛋白的表達水平均呈正相關，提示DLX3可能是Syncytin的上游調控因子之一，2者共同參與指導絨毛細胞滋養細胞向合體滋養細胞分化，在維持胎盤正常形態和功能方面發揮重要作用。

3.4子癇前期患者胎盤組織DLX3與Syncytin蛋白的表達與臨床指標的關系臍動脈血流S/D值隨孕周增大而逐漸降低，這表明胎盤逐漸成熟，胎兒胎盤循環阻力下降使臍動脈在舒張期仍有足夠的血流來滿足胎兒生長發育。 該研究結果顯示子癇前期組DLX3與Syncytin的蛋白表達與臍動脈血流S/D值均呈負相關，與胎頭雙頂徑均呈正相關，進一步提示子癇前期患者胎盤組織中DLX3、Syncytin的表達水平降低影響胎盤血管床的構建及功能，導致胎盤缺血缺氧及血管阻力增大，從而影響胎兒血供及其生長發育。

綜上所述，DLX3、Syncytin低表達與子癇前期的發病有關，對DLX3與Syncytin 的研究有助于進一步了解子癇前期的發病機制。

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