安徽省不同產區不同栽培品種銀杏葉總內酯含量的研究

周正華 杜安全 王先榮 王德群 劉守金 梁益敏

(1安徽省醫學科學研究院，合肥，230061;2安徽中醫學院，合肥，230038)

銀杏Ginkgo biloba L.屬裸子植物，是銀杏科銀杏屬唯一生存種，是我國特有的古樹種之一。銀杏葉主要有效成分是黃酮類化合物和萜類內酯，能有效改善心腦血管和末梢循環，用于治療動脈硬化、高血壓、腦卒中等心腦血管疾病。其中銀杏內酯主要有銀杏內酯A、B、C(Ginkgolide A、B、C)和白果內酯(Bilobalide)等。我們于1997年至1999年間，研究了安徽省不同產區、不同栽培品種和不同生長年限銀杏葉總黃酮苷和總內酯的含量［1－5］。本文是研究安徽省不同產區不同栽培品種銀杏葉中萜內酯的含量，現報道如下。

1 儀器和試藥

美國Waters公司高效液相色譜儀(600型泵，410示差折光檢測器)，Perkin－Elmer天平，C18萃取小柱(Waters公司)。對照品 Ginkgolide A、B、C和 Bilobalide由本組自制，經四譜鑒定，純度經HPLC分析，含量大于99%。銀杏葉樣品由安徽中醫學院王德群教授采集并鑒定。試劑:甲醇為色譜純，水為重蒸水，其他試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 高效液相色譜條件 色譜柱:大連依利特Hyper ODS2 C18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm)，柱溫30 ℃。流動相:甲醇 － 水(33∶67)，流速 1.0 mL/min。

2.2 對照品溶液的制備 分別取內酯對照品Ginkgolide A、B、C 和Bilobalide 1.5 mg，精密稱定，以流動相溶解定容至10 mL，搖勻，即得。

表1 安徽省不同產區不同栽培品種銀杏葉總內酯的含量(n=3)

2.3 供試品溶液的制備 取干燥的銀杏葉細粉0.5 g，精密稱定，放入25 mL圓底燒瓶中，加入10%甲醇5mL，于150℃油浴中回流提取15 min，趁熱抽濾，殘渣用2%甲醇2 mL洗滌，抽干，繼續用10%甲醇4 mL同法提取，過濾，合并提取液待上柱。稱取0.5 g聚酰胺裝入小層析柱，下口接C18小柱，先用甲醇10 mL洗脫，再用2%甲醇10 mL洗脫，然后在聚酰胺柱上緩慢加入銀杏葉提取液，瓶用2%甲醇5 mL洗3次，洗液一并加入聚酰胺柱，待快干時，用5%甲醇5mL洗脫，減壓抽干，棄去聚酰胺小柱，C18小柱先用蒸餾水1 mL洗滌，再用正己烷6 mL洗滌，棄去洗滌液，最后用乙酸甲酯－正己烷(4∶6)10 mL洗脫，并收集于20 mL圓底燒瓶中，于旋轉蒸發器上減壓蒸干，殘留物準確加入流動相2 mL使溶解，即得。

2.4 樣品測定 根據安徽省緯度分布，分別采集8、9月份安徽省6個產區不同栽培品種的銀杏葉制備供試品溶液，精密吸取對照品溶液和供試品溶液各100 μL，分別注入液相色譜儀，在上述色譜條件下測定峰面積，用外標法計算，即得總內酯含量，結果見表1。

2.5 方法學考察 參見我們已發表銀杏內酯含量測定的論文［1］標準曲線分別為:Bilobalide回歸方程Y=－215+1 413X;相關系數為 0.999 7;線性范圍:4.3758～20.879 μg。Ginkgolide A 回歸方程 Y=97+1377X;相關系數為 0.998 4;線性范圍:5.0760～25.380 μg。Ginkgolide B 回歸方程 Y= －260+1 278X;相關系數為 0.999 3;線性范圍:5.973 0～29.865 μg。Ginkgolide C回歸方程Y= －48+1 334X;相關系數為0.999 1;線性范圍:5.026 2～25.131 μg。

加樣回收實驗結果:Bilobalide為97.9%，Ginkgolide A為97.2%，Ginkgolide B為98.9%，Ginkgolide C為98.2%。

3 結論

根據安徽省緯度分布，選取6個代表性的地區，用HPLC法測定了不同地區不同栽培品種銀杏葉總內酯含量。由實驗結果可知，不同產區不同栽培品種銀杏葉總內酯的含量差別較大。本研究可為安徽省不同地區合理栽培銀杏提供參考。

［1］王先榮，周正華，杜安全，等.不同生長季節及生長年限銀杏葉總萜內酯含量的相關性研究［J］.中國藥科大學學報，2000，31(2):88－90.

［2］杜安全，王先榮，周正華，等.銀杏葉提取物中銀杏內酯A、B、C和白果內酯的提取、分離和結構鑒定［J］.江蘇藥學與臨床研究，2001，9(3):1－3.

［3］杜安全，王先榮，周正華，等.不同生長季節及生長年限銀杏葉總黃酮甙含量的相關性研究［J］.天然產物研究與開，2000，12(2):49.

［4］杜安全，王先榮，周正華，等.銀杏葉總黃酮苷的HPLC法分析水解條件［J］.安徽醫藥，2001，5(3):164 －165.

［5］杜安全，周正華，王先榮，等.安徽省不同產區和不同栽培品種銀杏葉總黃酮苷含量的研究［J］.現代中藥研究與實踐，2007，21(1):35－36.