新晶型恩諾沙星注射液在豬體內的藥物動力學研究

李朋朋，周德剛，付旭東，張曉會

（1.國家獸用藥品工程技術研究中心，河南 洛陽471003；2.石家莊市動物疫病預防控制中心，河北 石家莊050000）

恩諾沙星的化學名稱是1－環丙基－6－氟－4－氧代－1，4－二氫－7－（4－乙基－1－哌嗪基）－3－喹啉羧酸，分子式為C19H22FN3O3，外觀為微黃色或淡橙黃色結晶性粉末；無臭，味微苦；遇光色漸變為橙紅色，化學結構如圖1所示［1］。它是第一個動物專用的氟喹諾酮類藥物，1987年由德國拜耳公司研制成功并投入使用。

圖1 恩諾沙星的化學結構

恩諾沙星具有較強的抗菌能力，且抗菌譜廣，近年來在歐洲、美國等多個國家得到廣泛應用。市售普通恩諾沙星在顯微鏡下無定形，呈不規則排列，而新晶型恩諾沙星呈現出規則的柱狀結晶排布，溶解速率基本一致。本文研究了新晶型恩諾沙星注射液肌肉注射給藥后在豬體內的藥代動力學特征，并與市售普通恩諾沙星注射液比較，對恩諾沙星注射液做出藥物動力學評價，考察晶型的改變是否會影響恩諾沙星的吸收、分布及代謝，為臨床用藥提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 豬，杜洛克－大約克－長白雜交，16頭，雌雄各半，體重30kg±2kg，普萊柯生物工程股份有限公司動物房提供。試驗前1個月飼喂不含抗菌藥物的全價日糧，自由飲水。

1.1.2 藥品與試劑 恩諾沙星對照品：含量為99.5%，批號：H0110807，中國獸醫藥品監察所；拜有利5%，批號：KP05H7K，含量99.6%，拜耳醫藥保健股份有限公司生產；新晶型恩諾沙星注射液，5%，批號：20100514，含量102%，洛陽惠中獸藥有限公司；乙腈，色譜純，天津市鑫源化工有限公司；磷酸，分析純，成都市科龍化工試劑廠；二氯甲烷，分析純，煙臺市雙雙化工有限公司；甲醇，分析純，成都市科龍化工試劑廠。

1.1.3 儀器 Waters ACQU IIY超高效液相色譜儀，Empower II軟件；分析天平；超聲波清洗機；TCL－16G臺式離心機，上海安亭科技儀器廠；振蕩器。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準儲備液配制 精密稱取恩諾沙星標準品25.0 mg置于250 mL容量瓶中，加入適量0.1 mol/L氫氧化鈉溶液溶解并加三蒸水定容，得100 μg/mL的恩諾沙星標準儲備液，臨用前稀釋到所需濃度。

1.2.2 試驗動物分組 16頭豬隨機分為兩組，每組8頭，分別肌肉注射恩諾沙星注射液和拜有利。

1.2.3 血樣采集 豬耳后肌肉注射2.5 mg/kg體重注射液，單點注射不高于2.5 mL，給藥前每頭豬分別采集空白血樣，給藥后5 min、10 min、15 min、30 min、1、2、4、8、12、24、48、56、72 h分別對每頭豬進行前腔靜脈采血3 mL，采集完畢后立即置于肝素鈉抗凝管中，3 500 r/min離心10 min，分離血漿，－20℃冰箱保存，待測。

1.2.4 樣品前處理 取出血漿，自然解凍后搖勻，準確吸取500μL，加入50μL磷酸，震蕩5 s，再加入1 mL乙腈，震蕩10 s，4 000 r/min（4℃）離心5 min，取上清液，加入1.5 mL二氯甲烷，劇烈震蕩10 s，4 000 r/min（4℃）離心5 min，取上層水溶液層進高效液相色譜分析。

色譜條件：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，ACQUIIY UPLC BEH C18（1.7μm，2.1 mm×50 mm）；流動相為乙腈：甲醇：水溶液（含0.4%三乙胺和0.4%磷酸，p H值2.5）＝17∶3∶80；流速為0.6 mL/min，紫外檢測波長為278 nm。

1.3 方法學驗證

1.3.1 提取回收率及精密度測定 通過回收率和變異系數的考察，將高、中、低3個濃度的恩諾沙星標準品溶液添加到空白豬血漿中，充分混勻，以獲得恩諾沙星藥物濃度分別為20μg/mL、2μg/mL和0.5μg/mL的血漿，按1.2.4進行處理分析，每個濃度于同一天內制備5份樣品以考察日內變異系數，連續重復測定3天以考察日間變異系數。

1.3.2 標準曲線及線性范圍 取空白血漿500μL，加入一定量各濃度的恩諾沙星標準液，得2μg/mL、1μg/mL、0.5μg/mL、0.2μg/mL、0.1μg/mL、0.05 μg/mL血漿，每個對照物質濃度做5個重復。血漿藥物提取方法同樣品前處理方法，進樣測定血藥濃度。

1.3.3 數據處理 Winnonlin6.1中 WNL經典模型中藥物代謝動力學模擬藥時曲線，計算參數，SPSS12 11LSD法對主要參數進行方差分析。

2 結果

2.1 提取回收率及精密度測定結果 血漿中恩諾沙星空白添加濃度分別在20、2μg/mL和0.5μg/mL時，提取回收率在63.6%～98.4%之間，高濃度血漿精密性測定結果小于10%，中濃度、低濃度小于15%。

2.2 標準曲線及線性范圍 該方法在0.05μg/mL～5 μg/mL范圍內的線性方程為：C＝1.89×105A＋864，R2＝0.9992，血藥濃度與峰面積線性關系良好，可用于血漿藥物濃度測定。

2.3 藥代動力學特征 兩種恩諾沙星注射液給豬肌肉注射后的藥時曲線如圖2所示。各藥動參數如表1所示。

圖2 各組恩諾沙星注射液的藥時曲線

表1 各組恩諾沙星注射液藥代動力學參數

3 結果與分析

從表1中數據看出，該研究中所用新晶型恩諾沙星注射液的達峰時間較短對照藥物拜有利，而達峰濃度卻高于后者，說明新晶型恩諾沙星注射液在豬體內吸收速度較快。其次，新晶型恩諾沙星注射液與拜有利的t1/2Ka分別為0.38±0.17 h、0.21±0.06 h，表觀分別容積分別為5.60±0.98 L/kg、7.58±1.54 L/kg，說明這兩種注射液在豬體內分布迅速其廣泛。從二者藥時曲線圖可以看出，二者在豬體內的存留時間基本相當，從藥動參數也可看出新晶型恩諾沙星注射液的AUC稍高于拜有利，其生物利用度是拜有利的105.72%，這表明新晶型恩諾沙星注射液在豬體內生物利用度更高。

試驗測得新晶型恩諾沙星注射液的消除半衰期為5.43±1.30 h，該結果與周云波［2］等報道5.0831±1.121 h相似，且略偏高，高于曾振靈等［3］報道的3.45±0.85 h，說明它的消除較緩慢，在體內存留時間較長。分析原因可能是晶型改變使藥物在吸收與消除時間上有所改變。

與張曉會、周洋等［4］的研究成果相比較，該試驗中所用恩諾沙星注射液的達峰濃度、AUC及體內存留時間顯著提高，說明藥物的晶型與制備工藝對藥物注射液的影響很大，優勢晶型的開發應用使其注射液的血液濃度峰值有所提高，生物利用度更高。另外，由于達峰時間減少，因此其起效更快。從藥動學參數值上看，新晶型恩諾沙星注射液與普通恩諾沙星注射液相比，具有較大的優越性。

最后，根據曾振靈等［5］報道的恩諾沙星對大腸桿菌的 MIC為0.05μg/mL，而我們試驗所用的新晶型恩諾沙星按2.5 mg/kg體重，肌肉注射后24 h血藥濃度為0.06μg/mL±0.02μg/mL，高于曾五和、陳杖榴［6］測得的血藥濃度，所以我們建議按以下給藥方案給藥：2.5 mg/kg體重，肌肉注射，1次/d，重癥加倍。因此建議從臨床應用方面再加以驗證。

［1］ 中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典二〇〇五版一部［S］.

［2］ 周云波，吳海燕，鞠曉峰，等.長效恩諾沙星注射液在健康豬體內的藥動學［J］.黑龍江八一農墾大學學報，2005，17（3）：70－72.

［3］ 曾振靈，馮淇輝.恩諾沙星在豬體內的生物利用度及藥物動力學研究［J］.中國獸醫學報，1996，16（6）：606－612.

［4］ 張曉會，周洋，周德剛，等.三種恩諾沙星注射液在豬體內的藥物代謝動力學研究［J］.中國獸藥雜志，2010，44（5）：9－13.

［5］ 曾振靈，馮淇輝.恩諾沙星對大腸桿菌感染豬的藥動學及藥效學研究［J］.中國農業科學，1997，6（30）：10－15.

［6］ 曾五和，陳杖榴.恩諾沙星混懸液在豬體內的藥動學及生物利用度［J］.畜牧獸醫學報，2001，33（1）：63－67.