p53和Ki67在結直腸癌中的表達及其臨床意義

葉 斌 王西川 雷 蕾 游莉斯

結直腸癌是常見的惡性腫瘤之一。近年來，大腸癌的發病率在我國呈逐年上升趨勢，在上海已超過胃癌成為第二常見的惡性腫瘤［1］。

結直腸癌患者的生存率取決于腫瘤的檢出時間，晚期大腸癌患者5年生存率為7%，而早期患者5年生存率則可高達92%。然而超過57%的患者確診時癌細胞已轉移［2］。結直腸癌標志物的檢測可反映腫瘤的生物學特性，對診斷、治療及預后具有重要意義。p53基因是重要的抑瘤基因，分為野生和突變2種亞型，是細胞增生的主要負調控子，該基因的突變或缺失是導致許多腫瘤發生的原因。Ki67是1種細胞增殖核抗原，是1種周期相關基因，其表達與多種腫瘤的發生、發展、浸潤、分期、轉移有關。本研究采用免疫組化方法檢測結直腸管狀腺瘤和結直腸癌組織中p53蛋白和Ki67的表達情況，以探討其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集我院普外科2007年4月～2010年7月的71例結直腸癌手術標本，其中男性40例，女性31例，年齡32～86歲，中位年齡68歲;同時收集結直腸管狀腺瘤手術標本16例用于對照，其中男性9例，女性7例，年齡37～78歲，中位年齡64歲。標本均經組織病理檢查確診;患者術前均未接受過放化療。結直腸癌患者臨床分期按2007版AJCC頒布的結直腸癌TNM分期標準:Ⅰ期12例，Ⅱ期23例，Ⅲ期32例，Ⅳ期4例。結直腸癌分化程度:高分化腺癌24例，中分化腺癌35例，低分化腺癌12例。結直腸癌浸潤深度:浸潤達漿膜層者31例，浸潤未達漿膜層者40例。周圍淋巴結轉移情況:發生淋巴結轉移者35例，未發生淋巴結轉移者36例。

1.2 方法

采用免疫組化PV-9000法。所有抗體均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。石蠟包埋，制成4 μm厚的切片。脫蠟、水化組織切片;高壓鍋抗原熱修復;3%H2O2去離子水孵育以阻斷內源性過氧化物酶;滴加一抗，4℃過夜;PBS沖洗，滴加聚合酶輔助劑，37℃孵育20 min;PBS沖洗后滴加辣根酶標記山羊抗小鼠IgG多聚體，37℃孵育30 min;應用DAB溶液顯色;自來水沖洗、復染、脫水、透明、封片。

1.3 結果判斷

于顯微鏡下觀察，每例觀察2張切片，每張切片隨機選擇10個高倍視野，每個視野計數100個腫瘤細胞，取其平均值為細胞的陽性率。p53及Ki67的結果判斷:細胞核呈現清晰的棕黃色顆粒為陽性，按陽性細胞所占的比例及顯色深度分為，陽性細胞數所占比例＜10%為陰性(－);10%～25%為弱陽性(+)，顯色淺，顆粒細;26%～50%為中度陽性(++)，顯色較深;＞50%為強陽性(+++)，顯色深，顆粒粗。

1.4 統計處理

采用SPSS 13.0統計軟件進行χ2檢驗和相關性分析。

2 結果

2.1 癌組織與腺瘤組織中p53和Ki67的表達及比較

免疫組化結果顯示，p53蛋白和Ki67主要表達于細胞核。71例結直腸癌標本中p53蛋白和Ki67表達陽性率分別為40.85%(29/71)和77.46%(55/71);16例結直腸管狀腺瘤標本中p53蛋白和Ki67表達陽性率分別為6.25%(1/16)和25.00%(4/16);兩者比較，差異有統計學意義(表1)。

2.2 結直腸癌組織中p53和Ki67蛋白表達與臨床病理特征的關系

71例結直腸癌中，p53蛋白的陽性表達與臨床分期、浸潤深度、組織學分化程度和淋巴結轉移有關(P＜0.05)。Ki67的陽性表達與組織學分化程度和淋巴結轉移無關(P＞0.05);但與臨床分期和浸潤深度有關(P＜0.05)(表2)。

表1 結直腸癌組織和腺瘤組織中p53和Ki67蛋白的表達(例，%)

表2 結直腸癌組織中p53和Ki67蛋白表達與臨床病理特征的關系(例，%)

2.3 結直腸癌組織中p53和Ki67蛋白表達之間的關系

71例結直腸癌中，p53和Ki67蛋白同為陽性者26例，同為陰性者13例，兩者之間呈顯著相關(γ=0.508，P=0.000)，見表3。

表3 p53和Ki67在結直腸癌組織中表達的相關性分析(例)

3 討論

p53基因是1個非常重要的抑癌基因。它與細胞周期蛋白(cyclins)結合形成復合體，抑制依賴細胞周期蛋白的相關激酶(CDKs)活性，使細胞停滯在G1期或引起細胞程序性死亡［3］。p53基因大約有50%［4］的突變率，當p53基因發生突變時，可導致穩定的蛋白質不能完成抑制細胞增殖的作用，并且促進細胞惡性轉化，侵襲力增強，使p53基因由抑癌基因轉為原癌基因［5］。本研究結果顯示，p53蛋白在結直腸癌組織中的陽性表達率明顯高于腺瘤組織，結果基本與李靜等［6］相符。袁家賓等［7］報道，p53 蛋白與 Dukes分期相關，C期的陽性表達顯著高于A期和B期(P＜0.05)。本研究中，蛋白p53在Ⅲ、Ⅳ期的陽性表達顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期(P＜0.05)，與上述報道相符。而且p53蛋白表達在有淋巴結轉移組明顯高于無淋巴結轉移組，差異有統計學意義(P＜0.05)。上述結果提示p53突變與腫瘤的發生、發展，惡性細胞的侵襲、轉移密切相關。

Ki67是應用廣泛的增殖細胞標志之一，在細胞凋亡中S、G2、M期均有表達，主要定位于細胞核，在有絲分裂中起著維持DNA結構的重要作用［8］。有研究顯示Ki67參與腫瘤的發生、發展［9］，可作為診斷、預測療效和預后等方面的標志物。

本組病例中，結直腸腺癌Ki67的陽性表達率高于腺瘤(P＜0.05)。Ki67的陽性表達在不同臨床分期和浸潤深度的結直腸癌標本中差異有統計學意義(P＜0.05)。而在結直腸腺癌的不同組織學類型組、有無淋巴結轉移組，差異無統計學意義(P＞0.05)。提示Ki67對鑒別診斷腺癌和腺瘤有重大意義。國外有學者研究指出:癌細胞分化程度越低，以及伴有淋巴結轉移者Ki67表達越強［8，10］。本結果似有不同，有待進一步研究。

綜上所述，結直腸癌中p53及Ki67基因表達上調，與結直腸癌的發生、發展密切相關，將兩者作為生物標志物進行聯合檢測，有利于對結直腸癌患者惡性程度及預后的評估。

［1］廉 朋，蔡國響，徐 燁，等.PRL-3基因在結直腸癌原發灶中的表達及其臨床意義〔J〕.中國癌癥雜志，2006，16(10):823.

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［4］Vikhanskaya FD，Incalci M，Broggini M.P73 competes with p53 and attenuates its response in human ovarian cancer cell line〔J〕.Nucleic Acids Res，2000，28(2):513.

［5］于永亮，尚亞非.p53蛋白表達對結腸癌術后腫瘤復發轉移預后的關系〔J〕.實用醫技雜志，2007，14(36):5014.

［6］李 靜，劉文清，范麗萍，等.結腸癌p53蛋白表達與臨床病理的意義〔J〕.韶關學院學報(自然科學)，2006，27(3):87.

［7］袁家賓，張 雷，劉啟龍，等.大腸腫瘤p53蛋白表達及其臨床意義〔J〕.濟南醫學院學報，2001，24(4):14.

［8］劉衛梅，劉建民，封 琳，等.bcl-2和Ki-67蛋白在結腸癌及癌前病變中的表達及臨床意義〔J〕.中國實用醫藥，2009，4(2):52.

［9］Iolota V ，Batistatou A ，Tsamandas AC ，et al.Immunohistochemiocal expression of TGF-betal，p21WAF1，p53，Ki67，and angiogenesis in gastric carcinomas:a clinicopathologic study〔J〕.Int J Gastrointest Cancer，2002，32(2～3):83.

［10］Saleh HA，Jackson H，Banerjee M，et al.Immumohistochemical expression of bcl-2 and p53 oncoproteins correlation with Ki67 proliferation index and prognostic histopathologic in colorectal neoplasia〔J〕.Appl Immunohistochem Mol Morphol，2000，8(3):175.