喉癌患者血清HMGB1水平檢測及臨床意義

湯夏冰，李 蕾，沈曉輝，陳國千＊

（1.南京醫科大學附屬無錫人民醫院 耳鼻咽喉科，江蘇 無錫214023；2.南京醫科大學附屬無錫人民醫院 醫學檢驗科，江蘇 無錫214023；3.南京醫科大學附屬鼓樓醫院 耳鼻咽喉科，江蘇 南京210008）

研究表明，高遷移率族蛋白B1（HMGB1）作為一種核內非組蛋白，在腫瘤的發生、發展及轉移中起著重要的作用。HMGB1在結腸癌、乳腺癌、前列腺癌、非小細胞肺癌、胰腺癌等人類惡性腫瘤組織中，均出現過度表達，并與腫瘤發生、發展以及患者預后等密切相關［1］。新近有研究顯示，血清HMGB1水平在胃癌、肝癌、非小細胞肺癌、宮頸癌中升高，可以作為血清標志物，為評估腫瘤的進展和預后提供重要價值［2－5］，但在喉癌中尚未見報道。本研究通過檢測喉癌患者血清HMGB1水平，探討HMGB1在喉癌發生、發展中的作用，為喉癌的臨床診斷、治療提供實驗室檢測標志物及理論依據。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2011－01—2011－11南京市鼓樓醫院耳鼻咽喉科31例喉癌患者血清標本，患者術前未經任何治療。術后病理證實為鱗狀上皮細胞癌。其中男30例，女1例，平均年齡61.6±7.2歲；聲門上型16例，聲門型13例，聲門下型2例；TNM分期（UICC 2002）T1－2期為12例，T3－4期為19例；臨床分期：Ⅰ＋Ⅱ期7例，Ⅲ＋Ⅳ期24例；頸部淋巴結轉移15例；病理學分級：低分化4例，中分化19例，高分化8例。同時選取15例喉部癌前病變聲帶白斑患者血清標本，其中男12例，女3例，平均年齡58.9±6.2歲；30例健康志愿者血清標本作為對照組，其中男27例，女3例，平均年齡59.7±5.7歲。

1.2 檢測方法

血清HMGB1濃度測定：采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測［6］，血液標本采集后＜3h分離血清，并于－80℃ 冰箱保存，人HMGB1ELISA試劑盒為日本Shino－Test公司產品，按產品使用說明書進行分析定量。

1.3 統計學處理

應用SPSS18.0統計軟件進行數據分析。兩組間比較采用雙側t檢驗分析，多組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 喉癌患者等血清HMGB1水平的分析

31例喉癌患者、15例聲帶白斑患者、30例健康對照者血清HMGB1水平比較，差異具有統計學意義；喉癌患者、聲帶白斑患者血清HMGB1水平明顯高于健康對照者（P＜0.01）；喉癌患者血清HMGB1水平明顯高于聲帶白斑患者（P＜0.01）。見表1。

表1 喉癌、聲帶白斑患者血清HMGB1水平（±s）

表1 喉癌、聲帶白斑患者血清HMGB1水平（±s）

注：與健康對照組比較，＊P＜0.01；與聲帶白斑組比較，ΔP＜0.01

組別 n HMGB1（ng／ml）30 1.67±0.48聲帶白斑組 15 2.61±0.50＊喉癌組 31 4.79±1.10＊Δ健康對照組

2.2 喉癌患者血清HMGB1水平與臨床病理特征的關系

喉癌患者血清HMGB1水平與臨床病理特征的關系，見表2。血清HMGB1水平在T3和T4期明顯高于T1和T2期（P＜0.01）；血清HMGB1水平在Ⅲ和Ⅳ期明顯高于Ⅰ和Ⅱ期（P＜0.01）；血清HMGB1水平在淋巴結轉移組明顯高于無淋巴結轉移組（P＜0.01）。但血清HMGB1水平與腫瘤的原發部位、分化程度均無關（P值均＞0.05）。

3 討論

高遷移率族蛋白（HMG）為一類核內非組蛋白，因其在聚丙烯酰胺凝膠電泳中遷移速度快而得名，HMGB1是其中重要的成員之一。HMGB1最初被認為是染色質的結構成分，功能局限在核內，主要參與穩定核小體結構、調節基因轉錄、參與DNA修復、DNA重組及調控類固醇激素等生命活動。1999年，Wang等［7］首先發現HMGB1可以釋放到胞外并介導炎癥反應，是一種重要的晚期炎癥介質。近年胞外HMGB1測定的臨床應用研究已引起廣泛關注，HMGB1在結腸癌、乳腺癌、前列腺癌、非小細胞肺癌、胰腺癌等人類惡性腫瘤中，均出現過度表達，并與腫瘤發生、發展以及患者預后等密切相關。腫瘤標志物的測定往往可提供一種低成本、非侵入的手段，用于腫瘤患者的療效監測及預后評估，也常用于高危人群的篩查。在某些腫瘤中，通過檢測患者血清中腫瘤標志物的含量及其變化可以反映腫瘤的發生、發展和增殖情況。新近有研究顯示，血清HMGB1水平在胃癌、肝癌、非小細胞肺癌、宮頸癌中升高，為評估腫瘤的進展和預后提供重要價值，但血清HMGB1水平在喉癌中的變化目前未見報道。

表2 喉癌患者血清HMGB1水平與臨床病理特征的關系（±s）

表2 喉癌患者血清HMGB1水平與臨床病理特征的關系（±s）

臨床病理特征 例數 HMGB1（ng／ml） P值原發部位聲門 13 4.54±1.20 0.347聲門上 16 4.86±0.96聲門下 2 5.81±1.42分化程度高分化 8 4.42±1.22 0.453中分化 19 4.84±1.05低分化 4 5.25±1.14浸潤深度T1＋T2 12 3.92±1.07 0.001 T3＋T4 19 5.33±0.71臨床分期Ⅰ＋Ⅱ 7 3.18±0.60 0.000Ⅲ＋Ⅳ 24 5.25±0.69淋巴結轉移有15 5.34±0.62 0.005無16 4.27±1.17

在我們前期的研究中顯示，HMGB1在喉癌組織及癌旁正常組織中陽性表達率分別為78.7%和18.0%。本研究通過檢測血清HMGB1水平發現，喉癌患者、聲帶白斑患者血清HMGB1水平明顯高于健康對照者，喉癌患者血清HMGB1水平明顯高于聲帶白斑患者，血清HMGB1水平升高可能由于壞死的腫瘤細胞被動釋放或免疫細胞主動分泌到胞外或血漿。說明HMGB1在喉癌的發生中起重要作用，且有利于區分喉癌前病變、喉癌患者。研究結果表明，喉癌患者血清HMGB1水平與臨床病理特征的關系密切，血清HMGB1水平在T3和T4期明顯高于T1和T2期；血清HMGB1水平在Ⅲ和Ⅳ期明顯高于Ⅰ和Ⅱ期；血清HMGB1水平在淋巴結轉移組明顯高于無淋巴結轉移組。提示HMGB1在喉癌的發展、浸潤及轉移中起著重要的作用。Taguchi等［8］報道，HMGB1可通過與糖基化終末產物受體RAGE結合，激活p38、JNK及ERK1／2等絲裂原活化蛋白激酶信號通路，繼而激活MMP－2、MMP－9，后二者是纖維蛋白溶酶激活級聯的下游目標，能引起細胞外基質降解，從而促進腫瘤的浸潤及轉移，HMGB1在喉癌中作用的具體機制有待進一步研究。本研究未發現血清HMGB1水平與腫瘤的原發部位、分化程度有關。由于本研究中研究樣本量相對較少，可能與真實分布情況有一定的誤差，對于其臨床應用價值需要通過擴大樣本量進一步研究。

本實驗研究結果表明，喉癌患者血清HMGB1水平升高，血清HMGB1水平檢測可作為評價喉癌前病變、喉癌患者病情變化的生物學指標，有望成為喉癌診斷和治療的一個新靶點。

［1］Sims GP，Rowe DC，Rietdijk ST，et al.HMGB1and RAGE in inflammation and cancer［J］.Annu Rev Immunol，2010，28：367.

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［3］Cheng BQ，Jia CQ，Liu CT，et al.Serum high mobility group box chromosomal protein 1is associated with clinicopathologic features in patients with hepatocellular carcinoma［J］.Digestive and Liver Disease，2008，40（6）：446.

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［6］Yamada S，Inoue K，Yakabe K，et al.High mobility group protein 1（HMGB1）quantified by ELISA with a monoclonal antibody that does not cross－react with HMGB2［J］.Clin Chem，2003，49（9）：1535.

［7］Wang H，Bloom O，Zhang M，et al.HMG－1as a late mediator of endotoxin lethality in mice［J］.Science，1999，285（5425）：248.

［8］Taguchi A，Blood DC，del Toro G，et al.Blockade of RAGE－amphoterin signaling suppresses tumour growth and metastases［J］.Nature，2000，405（6784）：354.