抗原負載的DC及CIK對結腸癌細胞SW1116殺傷活性的比較研究

王 斌，劉玉俠，何春瑩，陳佳祺

（1.吉林省腫瘤醫院 腹外科，吉林 長春130012；2.吉林省腫瘤防治研究所，吉林 長春130012）

腫瘤的治療除了傳統的手術、化療、放療外，近年來生物治療在腫瘤的治療中發揮著重要作用。由于生物治療對人體沒有毒副作用，對腫瘤的轉移和復發具有預防和治療作用，所以近年來在腫瘤治療領域得到了較廣泛的重視。本實驗通過體外培養DC，CIK細胞并與人結腸癌細胞SW1116共同培養，檢測兩種細胞對結腸癌細胞SW1116的體外殺傷效果，為結腸癌的生物治療提供實驗數據以及理論支持。

1 材料和方法

1.1 材料 淋巴細胞分離液（比重1.078）：中國醫學科學院血研所科技公司；GM－CSF，TNF－α，IL－4，IL－1α：Peprotech 公司；IMDM培養基：GIBCO 公司；CD3單抗：RD公司；IL－2：北京四環生物公司；IFN－γ，上海凱茂生物醫藥有限公司；胎牛血清：天津TBD生物技術發展中心；MTT：Sigma公司。

1.2 結腸癌細胞株SW1116 購于中國科學院上海生命科學研究院

1.3 方法

1.3.1 DC的誘導、培養、鑒定 參見文獻［1］。

1.3.2 CIK的誘導、培養 首先用淋巴細胞分離液分離人外周血單核細胞，計數細胞數為1×106／ml，加入細胞培養瓶，放入37℃，5%CO2培養箱培養，然后將培養的外周血單核細胞加入IFN－r 1 000U／ml，CD3Ab 100ng／ml，IL－1a1000U／ml，IL－2 1000 U／ml，每3天換液，同時補加IL－2。

1.3.3 CIK細胞表型的測定 將誘導培養的CIK細胞用FITC標記的CD3Ab、PE標記的CD16、CD56Ab標記CIK細胞，用流式細胞儀檢測CD3＋CD16＋CD56＋細胞的表達。

1.3.4 培養結腸癌細胞SW1116 將SW1116用含10%IMDM的培養基培養至對數生長期，用0.25%胰酶消化后離心洗滌，調細胞數為5×104／ml，接種到96孔細胞培養板。

1.3.5 SW1116抗原的提取方法 參見文獻［1］。

1.3.6 負載抗原的 DC（DCAg），CIK 對結腸癌細胞SW1116殺傷活性測定 將培養的DCAg，CIK調細胞數為2.5×106／ml，按以下設計加入到已接種SW1116的細胞培養板內，每組設6復孔。

第1組 DCAg，第2組 CIK，第3組 DCAg＋SW1116，第4組CIK＋SW1116，第5組SW1116。將以上加入細胞的培養板放入37℃，5%CO2培養箱培養24小時。培養結束前4小時加入MTT，培養結束，吸去上清，加150μl DMSO，振蕩混勻，用酶標儀在292nm處測OD值。

1.4 統計學處理

應用SPSS V16.0軟件，采用t檢驗對數據進行處理。

2 結果

2.1 CIK細胞表型測定結果 見圖1。從圖中可以看出CD3＋CD16＋CD56＋表達為74.3%，證明CIK的比例很高。

圖1 CIK細胞表型測定

2.2 DCAg，CIK對SW1116細胞殺傷活性，見表1。

表1 DCAg，CIK細胞對SW1116細胞殺傷活性

從以上結果可以看出，負載抗原的DC和CIK對SW1116均有較強的殺傷效果，兩者之間在統計學上沒有差別。

3 討論

結腸癌（colorectal cancer，CRC）是常見的消化道惡性腫瘤之一，它嚴重威脅著人類的健康。世界范圍內結腸癌的發病率占所有惡性腫瘤的第3位，每年約有120萬例新增患者，其中40%－50%的患者發現時已有轉移［2］，近80%的患者就診時已屬于晚期。病變發現早期進行手術，患者5年生存率可以達到90%，而發生轉移的結腸癌（metastatic colorectal cancer，mCRC）患者5年生存率僅為10%［3］。結直腸癌引起的死亡也是全世界惡性腫瘤導致死亡的主要原因之一，目前，結腸癌在我國發病率呈現上升趨勢［4］，而其常規的治療手段包括手術、化療、放療，這些方法雖然對結腸癌的治療起到很好效果，但是對一些微小轉移灶還不能達到徹底根除的目的。生物治療是近年來發展起來的有效治療腫瘤的一種方法，它對腫瘤的直接殺傷作用以及通過活化機體免疫功能主動攻擊腫瘤作用，使其對腫瘤治療效果的提高發揮了獨特的效果，已成為腫瘤治療的又一種有效治療方法。

生物治療細胞有很多種，本實驗選擇了DC和CIK針對結腸癌進行體外實驗，以證明它們的抗結腸癌效果，為臨床應用提供實驗數據。

DC是人體內功能最強的，唯一能激活初始型T淋巴細胞的抗原遞呈細胞［5］，它能夠攝取、加工、遞呈抗原［6］，促進CTL細胞和Th細胞的生成，啟動T細胞介導的免疫反應，發揮抗腫瘤作用。

CIK細胞又被稱為NK細胞樣T淋巴細胞，它同時表達CD3和CD56兩種膜蛋白分子，所以兼具有T淋巴細胞強大的抗瘤活性和NK細胞的非MHC限制性殺瘤優點。

本實驗通過負載抗原的DC和CIK對結腸癌細胞SW1116的體外殺傷實驗結果證明，DC和CIK對SW1116均具有較強的抗腫瘤活性，對其殺傷率分別達到64.10%和67.70%。根據它們不同的抗腫瘤特性，在臨床應用時可以選擇聯合應用，以達到最佳的抗腫瘤效果。

［1］劉玉俠，于 鴻，張振武，等.熱休克蛋白70激發樹突狀細胞抗肝癌作用的實驗研究［J］.中國實驗診斷學，2010，14（12）：1969.

［2］Jemal A，Bray F，Center MM，et al.Global Cancer Statistics［J］.CA Cancer J Clin，2011，61（2）：69.

［3］Meyerhardt JA，Mayer RJ.Systemic therapy for colorectal cancer［J］.N Engl J Med，2005，352（5）：476.

［4］于世英.臨床腫瘤學［M］.北京：科學出版社，2006：197.

［5］Nair SK，Synder D，Rous BT，et al.Regression of tumors in mice vaccinated with professional antigen－pregenting cells pulsed with tumor extracts［J］.Int J Cancer，1997，70：706.

［6］Gilboa E.DC－based cancer vaccines［J］.J Chin Invest，2007，117：1195.