初步探討口腔鱗狀細胞癌中的p33／ING1表達的意義

王曉峰，張天夫，王 偉，劉 新

（吉林大學中日聯誼醫院 口腔科，吉林 長春130033）

通過人們長期對癌基因和抑癌基因的研究結果表明，從本質上來說，腫瘤是一種多基因病，其中抑癌基因可能是阻止腫瘤發生的一種保護機制。近年在對口腔鱗癌的研究中發現一種新抑癌基因ING1，它與p53關系密切，有協同作用。為了探討ING1與口腔鱗狀細胞癌發生發展的關系，本研究采用體外細胞培養，間接免疫熒光等技術觀察p33／ING1的表達情況，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

30例正常組織取自智齒拔除術和唇裂手術切除等新鮮標本，均經病理證實無異常增生改變；30例異常增生組織取自吉林大學中日聯誼醫院口腔科口腔鱗癌手術切除新鮮標本，原發灶，患者未經放、化療治療，取材范圍參考口腔腫瘤常規手術標準，距肉眼可見癌組織0.5－1.0cm之間，并經病理切片證實有異常增生而沒有癌變的組織；口腔鱗狀細胞癌組織取自我院收治的30例口腔鱗狀細胞癌患者，經病理證實有癌變。

1.2 實驗方法

1.2.1 口腔黏膜上皮細胞原代培養 無菌條件下所取的口腔黏膜組織立即保存于無菌液中，經過處理后制成細胞懸液，接種于12孔培養靜置培養，當細胞長至培養板的80%時開始傳代，以1∶2或1∶3的比例接種于培養板中繼續培養。傳代后培養12h，待細胞長至80∶90%進行細胞鋪片，用于免疫熒光。

1.2.2 免疫細胞化學檢測方法 取第二代細胞制細胞爬片，PBS洗滌3次后，4%的多聚甲醛溶液固定30min，0.1%Trtion－100（pH＝7.2）室溫下處理10min。用廣譜單克隆角蛋白抗體及SP免疫組化試劑盒按試劑盒說明書進行操作。

1.3 觀察指標

激光共聚焦熒光顯微鏡下觀察，p33／ING1陽性細胞為胞核及胞膜上出現翠綠色的顆粒，密度均勻、致密。隨機選擇10個視野，對p33／ING1陽性細胞數進行計數，由此得出陽性細胞的百分比。熒光染色結果做如下分類：＞50%為“＋＋”，10%－50%為“＋”，＜10%為“－”。分析時 “＋”、“＋＋”歸為陽性表達；“－”歸為低表達或不表達。

1.4 統計學方法

檢測結果用SPSS11.00軟件進行統計學分析，各組的p33／ING1陽性細胞百分率進行計數資料的χ2檢驗，P＜0.05有統計學意義。

2 結果

30例NOK和30例DOK中p33／ING1蛋白表達多為陽性表達且多為“＋＋”（見圖1，圖2），陽性率為100%及93.3%；30例OSCC中p33／ING1蛋白多為低表達或不表達（“＋”或“－”）（見圖3），陽性率26.7%，兩者存在顯著性差異，有統計學意義（P＜0.05），見表1。

圖1 NOK中P33／ING1強陽性表達（×200）

圖2 DOK中P33／ING1陽性表達（×200）

圖3 OSCC中P33／ING1低表達（×200）

表1 p33／ING1在NOK、DOK和OSCC中表達的情況

3 討論

Garkavtsev等在1996年研究發現了一個新的抑癌基因ING1，命名為p33／ING1。該蛋白與多種惡性腫瘤的發生和發展關系密切，近年來已在人體多種腫瘤（乳腺癌、胃癌和頭頸部鱗癌等）中發現p33／ING1的突變。口腔鱗狀細胞癌是最常見的口腔惡性腫瘤，發病率高，生存質量差。目前研究表明，口腔鱗癌的發生發展是一個多基因多因素相互作用的過程，其中抑癌基因的失活、缺失在導致腫瘤發生發展過程中發揮著舉足輕重的作用。在口腔鱗癌中，多數研究發現p33／ING1與p53之間有協同作用[1－3]。

本研究應用細胞原代培養方法及間接免疫熒光技術檢測p33／ING1在口腔鱗癌發生發展中的表達。研究發現，NOK和DOK細胞中均可檢測到p33／ING1蛋白的表達，其表達主要定位于胞核及胞膜上，其中NOK細胞中p33／ING1染色尤以胞核中更強，偶見于胞漿；OSCC細胞中p33／ING1抗體染色微弱，主要分布于胞漿。ING在NOK細胞中p33／ING1基因的表達要遠遠高于在OSCC細胞中的表達，有顯著差異，有統計學意義（P＜0.05），因此我們推測p33／ING1的低表達或不表達可能與口腔鱗癌的發生發展有關，可作為口腔鱗癌早期發現和診斷的一種生物學指標。另有學者研究發現[4，5]，p33／ING1蛋白的陽性表達和胃癌分化程度具有相關性，分化越低，其陽性表達率越低。p33／ING1蛋白與口腔鱗狀細胞癌之間是否也有這種相關性，仍需進一步的研究。此外，p33／ING1蛋白在OSCC細胞中的低表達是否是由于其它抑癌基因的啟動而抑制了p33／ING1基因的表達，也需要進一步的研究證明。

總之，p33／ING1在口腔鱗癌的發生發展中可能起著一定的作用，為判斷口腔黏膜上皮癌變過程及阻斷、治療提供新思路。但是腫瘤的發生是多基因多因素共同作用的結果，p33／ING1基因的表達是否與其他抑癌基因、癌基因和凋亡相關基因等有關系[6]，還有待進一步研究。

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[6]Aasia OR.CXCL12／SDF－1αActivates NF－κB and Promotes Oral Cancer Invasion through the Carma3／Bcl10／Malt1Complex[J].International Journal of Oral Science，2009，03：105.