毛細管氣相色譜法測定米鉑原料藥中5種有機溶劑殘留量

馮光玲，馮愛國，丁文娟，孔祥雨，劉憲華（1.山東省醫藥工業研究所，濟南250101；2.山東省化學藥物重點實驗室，濟南 250101；.山東臨沂動植物園，山東臨沂 27607）

米鉑（Miriplatin）是日本住友公司開發的一種新型脂溶性鉑類抗腫瘤藥物，于2009年在日本獲批準上市，臨床上用于治療肝細胞癌。該原料藥國內正處于在研狀態。米鉑分子式為C34H68N2O4Pt·H2O，相對分子質量為782.01。其在制備工藝中使用了乙醇、丙酮、異丙醇、乙腈與二氯甲烷等有機溶劑（所用溶劑由本單位合成室依據合成路線提供證實），為保證用藥安全，應對上述有機溶劑的殘留量進行控制。由于毛細管氣相色譜（GC）法[1]具有分析速度快、分離效率高、靈敏度高的優點，被廣泛用于藥物有機溶劑殘留量測定。為此，筆者建立了毛細管氣相色譜法測定5種有機溶劑殘留量的方法。由于米鉑極微溶于水，故以N，N-二甲基甲酰胺（DMF）為溶劑。結果表明，建立的方法快速、靈敏，可用于米鉑原料藥中有機溶劑殘留量的測定。

1 材料

6890氣相色譜儀、7694E自動頂空進樣器（美國Agilent公司）。

米鉑原料藥（本所合成室提供，批號：120901、120902、120903，純度：99.71%、99.82%、99.78%）；乙醇、丙酮、異丙醇、乙腈、二氯甲烷和DMF均為分析純（含量：＞99.0%）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent毛細管柱（6%氰丙基苯基-94%二甲基硅氧烷為固定液）（30 m×0.32 mm，0.25 μm）；柱溫采用程序升溫：40℃保持6 min，再以50℃/min的速率升溫至180℃，保持10 min；氫火焰離子化檢測器溫度：250℃；載氣：高純N2，流速：10 ml/min；進樣口溫度：200 ℃；分流比：20∶1；采用頂空進樣法測定，頂空進樣條件：加熱溫度：90℃；加熱時間：30 min；進樣瓶裝量：3 ml（頂空氣體進樣）。

2.2 溶液制備

空白溶液：精密量取DMF 3 ml，置于頂空進樣瓶中，作為空白溶液。

標準溶液貯備液：稱取乙醇約500 mg、丙酮約500 mg、異丙醇約500 mg、乙腈約41 mg、二氯甲烷約60 mg，置于有適量DMF的100 ml量瓶中，充分振搖使溶解，加DMF稀釋至刻度，搖勻，作為標準溶液貯備液。

標準溶液：精密量取上述溶液5 ml，置于50 ml量瓶中，加DMF至刻度，搖勻，作為標準溶液。

供試品溶液：精密稱取米鉑0.3 g，置于頂空進樣瓶中，分別加DMF 3 ml，作為供試品溶液。

取上述標準溶液和供試品溶液進樣，可見各溶劑分離良好，空白溶劑無干擾，詳見圖1。

圖1 氣相色譜圖A.標準溶液；B.供試品溶液；1.乙醇；2.丙酮；3.異丙醇；4.乙腈；5.二氯甲烷；6.DMFFig 1 GC chromatogramsA.standard solution；B.test sample；1.alcohol；2.acetone；3.isopropanol；4.acetonitrile；5.dichlormethane；6.DMF

2.3 標準曲線的制備

分別精密量取標準溶液貯備液0.50、0.75、1.00、1.25、1.50 ml，置于10 ml量瓶中，加DMF稀釋至刻度，搖勻。各取上述溶液3 ml，置于頂空進樣瓶中，按“2.1”項下色譜條件分別進樣。分別以各有機溶劑質量濃度（c）為橫坐標、峰面積（A）為縱坐標繪制標準曲線，5種有機溶劑均在相應的檢測質量濃度范圍內線性關系良好，結果詳見表1。

表1 5種有機溶劑的線性關系試驗結果Tab 1 Linear range results of 5 kinds of organic solvents

2.4 精密度試驗

取標準溶液，連續進樣6次，記錄色譜圖，計算含量的RSD。結果，無水乙醇RSD為0.21%，丙酮RSD為0.22%，異丙醇RSD為0.31%，乙腈RSD為0.26%，二氯甲烷RSD為0.36%（n均為6），表明方法精密度符合要求。

2.5 回收率試驗

精密稱取樣品（批號：120901）0.3 g，共10份，其中1份加入3 ml DMF，作為空白溶液。分別制備低（80%）、中（100%）、高（120%）3種質量濃度的標準溶液，分別取上述不同濃度的標準溶液3 ml，加入盛有樣品的頂空進樣瓶中；以“2.2”項下的標準溶液作為對照，分別進樣。計算其回收率，結果見表2。

由表2可知，乙醇、丙酮、異丙醇、乙腈與二氯甲烷的回收率（99.1%～102.9%）結果均符合要求。

2.6 定量限、檢測限試驗

將標準溶液逐級稀釋，分別取3 ml，置于頂空進樣瓶中，進樣，記錄色譜圖，直至信噪比為10∶1和3∶1，即為定量限和檢測限。結果，乙醇、丙酮、異丙醇、乙腈與二氯甲烷的定量限分別為0.1、0.3、0.6、0.16、0.15 ng；檢測限分別為0.03、0.1、0.2、0.05、0.05 ng。

表2 5種有機溶劑的回收率試驗結果（%%，n＝3）Tab 2 Recovery test results of 5 kinds of organic solvents（%%，n＝3）

2.7 樣品中有機溶劑殘留量測定

精密量取標準溶液和供試品溶液，分別進樣測定，以外標法計算得3批樣品中乙醇殘留量平均值分別為0.074%、0.067%和0.068%，其余4種有機溶劑均未檢出。

3 討論

毛細管氣相色譜法具有分析速度快、分離良好、靈敏度高的優點[2]，因此廣泛應用于痕量物質的分析。

目前頂空毛細管氣相色譜是藥物中殘留溶劑測定的理想方法，筆者采用擴大分流比（20∶1）、增加進樣量（進樣瓶裝量3 ml）的方法以盡量提高頂部空氣中待測組分的質量濃度。筆者以DMF為溶劑，因該溶劑對待測組分具有良好溶解性且具有熱穩定性、低蒸氣壓的性質，對待測組分具有較小活度系數；另DMF可以與5種有機溶劑達到有效分離，且無干擾，經方法學驗證得到滿意的結果，精密度符合要求[3]（RSD＜5%，n＝6），從而能更好地檢測出米鉑原料藥中有機溶劑的殘留量。

本試驗測定的5種有機溶劑沸點有差異，選用中等極性毛細管柱可以進行分離，但一般的填充柱達不到檢測要求，故應選用毛細管柱。

本試驗采用程序升溫的方法，先在40℃保持6 min，使低沸點的溶劑有效分離，然后以50℃/min的速率升溫至180℃，保持10 min，使DMF加快出峰，以改善峰形，且縮短了分析時間，提高了工作效率。

筆者根據2010年版《中國藥典》[3]的要求，將米鉑中無水乙醇、丙酮、異丙醇、乙腈與二氯甲烷的限度確定為0.5%、0.5%、0.5%、0.041%、和0.06%。

經過上述驗證，表明本文建立的方法線性、精密度、回收率、定量限、檢測限以及系統適用性試驗結果均較好，能夠準確、迅速地檢測出米鉑原料藥中殘留的乙醇、丙酮、異丙醇、乙腈與二氯甲烷，從而保證用藥的安全性。

[1]郭曉玲，錢蔚，楊昌金，等.毛細管氣相色譜法測定速效傷風膠囊中對乙酰氨基酚、咖啡因、馬來酸氯苯那敏的含量[J].色譜，1998，16（2）：164.

[2]欒成章，祝波，王尊文.頂空氣相色譜法測定夫西地酸中有機溶劑殘留量[J].中國藥房，2006，17（7）：535.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄63.