氣相色譜法測定聯苯乙酸原料藥中5種有機溶劑殘留量

曹翠，盧潔，閻君，林子琦（.吉林修正藥業新藥開發有限公司，長春300；.長春師范學院初等教育學院，長春 3003）

聯苯乙酸（Felbinac）是一種新型的非甾體抗炎藥，也是合成聯苯乙酸乙酯、聯苯乙酰吡啶等中間體的原料[1]。其是非甾體抗炎藥芬布芬的活性代謝物，具有很強的抗炎、鎮痛作用和良好的透皮性能；用于治療關節炎和肌肉疼痛，具有速效和安全等特點，如3%聯苯乙酸凝膠軟膏外用對于變形性關節痛病、肩周炎、腱鞘炎、肌肉痛及外傷后腫脹等疾病具有良好的鎮痛和消炎作用[2]。在本公司聯苯乙酸原料藥的合成工藝中使用了甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸和嗎啉等5種有機溶劑，2010年版《中國藥典》（二部）對上述溶劑均規定了殘留限度[3]。為此，本文建立了直接進樣法[4]測定聯苯乙酸原料藥中5種有機溶劑殘留量的氣相色譜法，結果表明建立的方法具有簡便、準確等特點，可滿足聯苯乙酸原料藥中有機溶劑檢測的要求。

1 材料

GC-2010氣相色譜儀、氫火焰離子化檢測器（FID）、GC工作站（日本島津公司）；GHL-300氫氣發生器（北京匯佳精儀工貿有限公司）；雙量程分析天平[梅特勒-托利多（上海）儀器有限公司]。

聯苯乙酸原料藥（吉林修正藥業新藥開發有限公司藥物研究室合成，批號：20120501、20120502、20120503，純度：99.2%、99.6%、99.5%）；甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸、嗎啉、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）均為分析純（含量：均≥99.0%）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent DB-624毛細管柱（30 m×0.53 mm×1.5 μm），6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷為固定液；柱溫：程序升溫，初始溫度40℃，以4℃/min升溫至100℃，再以20℃/min升溫至180℃，保持2 min；進樣口溫度：200℃；FID檢測器溫度：250℃；分流比：30∶1；載氣：高純氮氣；壓力：100 kPa；進樣量：2 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液。精密稱取甲醇0.6800 g、乙酸乙酯0.4832 g、冰醋酸0.2853 g、嗎啉0.4081 g，分別置于50 ml量瓶中；另取三氯甲烷0.1624 g，置于25 ml量瓶中。分別加入適量DMF溶解并稀釋至刻度，充分搖勻，作為對照品貯備液；精密移取甲醇貯備液1.0 ml、乙酸乙酯貯備液2.5 ml、三氯甲烷貯備液0.5 ml、冰醋酸貯備液4.5 ml和嗎啉貯備液2 ml，置于同一50 ml量瓶中，以DMF稀釋至刻度，充分搖勻，作為混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液。精密稱取聯苯乙酸原料藥1.0 g，置于10ml量瓶中，加DMF溶解并稀釋至刻度，充分搖勻，即得。

2.3 系統適用性試驗

移取混合對照品溶液進樣測定，記錄色譜圖。結果，甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸和嗎啉的保留時間分別為1.296、3.689、3.962、8.670和9.872 min，各相鄰色譜峰的分離度除乙酸乙酯和三氯甲烷為1.1外，其余均大于1.5，理論板數均不低于10000，系統適用性較好，詳見圖1。

圖1 氣相色譜圖A.對照品；B.供試品；1.甲醇；2.乙酸乙酯；3.三氯甲烷；4.冰醋酸；5.嗎啉Fig 1 GC chromatogramsA.substance control；B.test sample；1.methanol；2.acetic ether；3.chloroform；4.glacial acetic acid；5.morpholine

2.4 線性關系試驗

精密移取上述對照品貯備液適量，置于同一50 ml量瓶中，加入DMF溶解并稀釋至刻度，各對照品的取樣量見表1（表中溶劑均指其對照品貯備液）。

表1 線性試驗中各對照品溶液的制備Tab 1 Preparation of substance control in linear tests

取表1中制備好的對照品溶液Ⅰ～Ⅴ各2 μl進樣，測得峰面積，分別以峰面積（y）對質量濃度（x）進行線性回歸，各溶劑的線性方程及相關結果見表2。

表2 各溶劑線性關系試驗結果Tab 2 Linear ranges of solvents

2.5 精密度試驗

取混合對照品溶液2 μl，連續進樣5次，計算各混合對照品溶液中甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸、嗎啉的峰面積的RSD分別為0.6%、4.9%、4.3%、4.3%、4.6%（n＝5）。結果表明，各溶劑峰面積的RSD均小于5%（n＝5），精密度較好。

2.6 重復性試驗

精密稱取同一批號的樣品，分別制備成1.0 g/ml的供試品溶液6份，進樣分析，記錄色譜圖，按外標法計算殘留溶劑的含量。結果甲醇含量的RSD＝1.6%（n＝6），其他溶劑均未檢出，表明方法重復性良好。

2.7 檢測限和定量限試驗

取各對照品貯備液，逐級進行稀釋進樣，記錄色譜圖。以信噪比為3計算檢測限，以信噪比為10計算定量限。結果，甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸、嗎啉的檢測限分別為0.816、1.598、0.773、12.855、1.712 μg/ml，定量限分別為 2.72、5.25、3.09、36.73、5.71 μg/ml。

2.8 回收率考察

精密稱取樣品1.0 g，置于10 ml量瓶中，精密移取對照品貯備液，制得相當于各溶劑限度80%、100%、120%的溶液。根據峰面積計算回收率，測得5種溶劑的平均回收率為97.5%～100.2%，RSD為0.25%～1.39%，均小于5%（n＝3），結果見表3。

表3 回收率試驗結果（n＝3）Tab 3Results of recovery tests（n＝3）

2.9 穩定性試驗

取混合對照品溶液，于室溫下放置0、2、4、8、12 h后分別進樣，結果甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸、嗎啉在12 h內測得的峰面積的RSD分別為3.8%、2.2%、3.4%、1.5%、0.6%（n＝5），表明本溶液在室溫放置12 h內穩定。

2.10 樣品中有機溶劑殘留量的測定

量取混合對照品溶液和3批供試品溶液各2 μl進樣，記錄氣相色譜圖。按外標法以峰面積計算樣品中殘留溶劑的含量。結果表明，樣品中只檢出甲醇，且殘留量均＜0.3%，其他溶劑均未檢出。

3 討論

3.1 溶劑的選擇

氣相色譜的常用溶劑有水、乙醇、DMF、二甲基亞砜（DMSO）等，因聯苯乙酸不溶于水，因此選擇DMF作為溶劑。結果證明，DMF不但可以很好地溶解聯苯乙酸，且對5種待測溶劑無干擾。

3.2 色譜柱的選擇

考慮到冰醋酸的殘留，本試驗初期選擇了極性柱HPFFAP[5]，但由于甲醇和乙酸乙酯的極性相近，經改變柱溫、分流比、載氣流速等條件仍很難分開。按2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅧP[3]方法，采用氣相色譜法分離甲醇和乙酸乙酯，在極性色譜柱中二者的保留時間也僅相差0.2 min。因此嘗試用中等極性的色譜柱Agilent DB-624[6]，結果在本文設定的色譜條件下，采用該色譜柱能將5種有機溶劑較好地分離。

3.3 5種殘留溶劑限度的確定

甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸和嗎啉均是生產過程中引入的對人體有害的有機溶劑。《中國藥典》[3]規定，甲醇、三氯甲烷均為第二類毒性試劑，其限度分別為0.3%和0.06%；乙酸乙酯、冰醋酸均為第三類毒性試劑，其限度為0.5%；而嗎啉尚未收入《中國藥典》中，故本試驗參考文獻[4]中甲醇的限度，將其限度定為0.3%。

[1]陳芬兒.有機藥物合成法[M].北京：中國醫藥科技出版社，1999：365-367.

[2]沙靜姝.解熱消炎鎮痛藥研究進展[J].國外醫藥合成藥、生化藥、制劑分冊，1989，10（3）：143.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：63.

[4]李子靜.頂空氣相色譜法測定托伐普坦原料藥中的4種殘留溶劑[J].中國藥房，2012，23（41）：3916.

[5]范毅穎，于海龍，崔振輝.頭孢唑肟鈉殘留溶劑的氣相色譜測定[J].黑龍江醫藥，2007，20（2）：105.

[6]陳汝紅，楊春巧，張軼華.頂空氣相色譜法檢測芐星青霉素原料藥中的5種殘留溶劑[J].中國藥房，2012，23（45）：4287.