中藥養生方劑水提取物抗氧化能力測定

摘要：試驗采用羅丹明B作顯色劑測定了古代養生方劑中常見的紅棗、當歸、黃芩、五味子等4種中藥水提取物的抗氧化能力。結果表明，這些中藥水提取物對·OH都具有較強的清除作用，呈量效關系，其中紅棗的清除能力最強。據此評價其水提取物的抗氧化能力大小順序為：紅棗>當歸>黃芩>五味子。

關鍵詞：中藥養生方劑；水提取物；·OH；抗氧化能力

中圖分類號：TQ461 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）18-4484-02

在中國古代，人們都很重視養生，出現了很多養生中藥方劑。這些方劑可以調節人體機體狀態，增進健康，延緩衰老。中醫認為，人體健康長壽很重要的條件是先天稟賦強盛，后天營養充足。脾胃為后天之本，氣血生化之源，機體生命活動需要的營養，都要靠脾胃供給[1]。正因為如此，眾多的養生方劑中護脾養胃類的中藥使用較多，本研究采用分光光度法測定了常見的4種護脾養胃中藥養生方劑水提取物對羥基自由基的清除能力，據此評價其抗氧化能力，操作簡便，測定快速。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器：TU-1800PC型紫外-可見分光光度計（北京普析公司）；PXS-270型精密離子計（上海精密儀器公司）；HH-1型恒溫水浴鍋（上海比朗儀器公司）。

試劑：H2O2（分析純）；羅丹明B（分析純）；FeSO4·7H2O（分析純）；鄰苯二甲酸氫鉀（分析純）；鹽酸（分析純）；去離子水。

樣品：紅棗、當歸、黃芩、五味子均購于中藥房。

1.2 試驗方法

樣品抗氧化能力的測定以H2O2和FeSO2·7H2O體系產生的·OH為檢測對象，通過在554 nm處檢測捕獲劑羅丹明B的吸光度進行評價。由于·OH氧化能力強，可以快速地使羅丹明B標準溶液吸光度降低為A0，通過試驗證明其降低的程度與·OH的含量有一定量效關系，因此可以通過這種降低程度實現對·OH的測定。中藥的水提取物可以有效清除體系產生的·OH，加入這些水提取物于羅丹明B體系中，使體系溶液吸光度下降的程度降低，其吸光度為AS，羅丹明B標準溶液吸光度為A，則清除率D按以下公式計算：

D=（AS-A0）/（A-A0）×100%[2]

從清除率的計算結果大小即可評價其抗氧化能力。

1.3 ·OH生成量的測定

準確移取羅丹明B標準溶液7.00 mL（2×10-4 mol/L）和鄰苯二甲酸氫鉀-HCl溶液10.0 mL（pH 2.5）2份于兩支50 mL容量瓶中，向其中一容量瓶再加入FeSO4標準溶液5.0 mL（5×10-3 mol/L）和H2O2標準溶液5.0 mL（2×10-2 mol/L），另一容量瓶不加，以去離子水定容至50 mL，靜置5 min待反應充分后，在554 nm處分別測定這兩種溶液的吸光度A0和A，間接測定體系中的·OH。

1.4 樣品的測定

1.4.1 樣品的提取 取4種中藥樣品若干，經過烘干粉碎后，分別準確稱取1.00 g于4個錐形瓶中，各加去離子水100 mL，用文火煮沸40 min后，趁熱過濾，濾液轉移至250 mL容量瓶中，并將濾渣用熱水沖洗3次，與濾液合并，待溶液冷卻后以去離子水定容[3]。

1.4.2 樣品測定 將提取好的樣品溶液進行適當稀釋測定即：紅棗（0.10 g/L）、當歸（0.20 g/L）、黃芩（0.40 g/L）、五味子（0.40 g/L）。在測定·OH生成量體系中分別加入稀釋后的樣品溶液各0.20、0.50 、1.00、2.00 mL，在554 nm處測定其吸光度。

2 結果與分析

2.1 最佳檢測波長的確定

分別測定羅丹明B溶液和羅丹明B-Fe2+-2H2O2體系溶液的紫外可見吸收光譜圖，結果發現兩個光譜圖的最大吸收波長均出現在554 nm處，而且羅丹明B-Fe2+-2H2O2體系的譜圖中的吸光度比羅丹明B溶液體系小，說明由Fe2+和H2O2作用產生的·OH與羅丹明B發生氧化反應，導致吸光度下降，因此在554 nm處即可對·OH進行測定。

2.2 酸度的選擇

用配制好的緩沖溶液調節羅丹明B-Fe2+-2H2O2體系的pH分別為2.0、2.5、3.0、4.0、5.0。

測定在不同pH環境下體系的ΔA，結果發現在pH=2.5時ΔA值最大，確定試驗在pH 2.5條件下進行效果最佳。

2.3 FeSO4加入量的選擇

在其他測定條件不變情況下分別加入1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL的FeSO4標準溶液（5×10-3 mol/L），隨著體積的增加，體系ΔA值也不斷增大，但加入FeSO4體積達到5.0 mL時，ΔA的值趨于穩定。故本試驗中FeSO4溶液最佳用量為5.0 mL。

2.4 H2O2加入量的選擇

在最佳其他條件下，考察了H2O2加入量對檢測結果的影響，試驗表明當H2O2加入量達到5.00 mL后，繼續再增大加入體積，體系ΔA值基本不變，因此試驗采用H2O2溶液最佳加入量為5.00 mL。

2.5 羅丹明B加入量的選擇

在以上最佳條件下分別加入不同體積的羅丹明B溶液，根據試驗確定的檢測方法測定空白參比溶液和·OH反應體系的吸光度。結果表明，ΔA值隨羅丹明B用量的增大而增大，但當羅丹明B用量超過7.00 mL時，空白參比溶液的吸光度太大，超出正常讀數范圍，影響檢測結果，因此選擇羅丹明B最佳用量為7.00 mL。

2.6 試劑加入順序試驗

由于·OH存在時間非常短，試驗中各種試劑加入的先后順序對測定結果有很大的影響，因此必須考慮加入試劑的順序。在該方法中羅丹明B是作為顯色劑來測定體系產生的·OH，試驗中必須保證

·OH能與顯色劑羅丹明B充分發生反應，所以顯色劑羅丹明B的加入應該先于·OH產生之前加入，因此試驗最后一步再加入H2O2以產生羥基自由基。

2.7 檢測時間確定

在上面所選定的最佳條件下對體系吸光度進行測定，每隔1 min讀一次數值，觀察測定結果與時間的變化情況。試驗結果表明，在1～5 min內，體系的吸光度迅速下降，在5～10 min范圍內，吸光度基本無變化即反應完全，所以選擇最佳的反應時間為5 min。

2.8 測定結果

在試驗所確定的最佳試驗條件下分別測定了古代養生方劑中常見4種中藥水提取物對·OH的清除能力，其測定結果見表1。由表1可以看出，紅棗、當歸、黃芩、五味子水提取物對·OH清除作用均呈量效關系，有較強的抗氧化能力，其中紅棗提取物的清除能力表現為最強，當歸、黃芩次之，五味子最弱，據此評價了其抗氧化能力。

3 結論

本試驗以Fenton反應產生·OH，并與顯色劑羅丹明B發生反應，使其吸光度降低。養生方劑中常見4種中藥水提取物可以清除體系產生的·OH，使體系吸光度下降程度減弱，減弱程度與樣品抗氧化能力有關。試驗測定結果表明，4種中藥水提取物對·OH都具有較強的清除作用，而且所有樣品提取物清除率均隨其濃度的增大而增大呈現一定量效關系，具有很好的抗氧化能力，其中紅棗抗氧化能力最強。本試驗選取了常用古代養生方劑中常見4種中藥，得到了其提取物的抗氧化能力大小順序，對養生方劑的養生機理的解釋有一定的幫助。該試驗方法評價樣品抗氧化能力，操作簡便，測定快速，對尋找和篩選天然抗氧化劑資源很有實際意義。

參考文獻：

[1] 張苗海.未病與漢方研究[J].國外醫學（中醫中藥分冊），2005， 26（4）：207-211.

[2] 王征帆.11種中草藥水提物抗氧化活性研究[J].應用化工，2011，40（9）：1563-1568.

[3] 張愛梅，劉妮娜.羅丹明B-Mn2+-H2O2體系同步熒光分光光度法測定中藥的抗氧化活性[J].理化檢驗-化學分冊，2007，43（4）：280-282.