蒲公英飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

摘 要：為了建立蒲公英飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。通過采用高效液相色譜法制定蒲公英飲片含量測定。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，證明《中華人民共和國藥典》2010年版一部收載的含量測定標(biāo)準(zhǔn)可以控制飲片質(zhì)量，回收率好，具有良好的重現(xiàn)性等，經(jīng)對樣品的測定，建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞：蒲公英；飲片；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

蒲公英藥材收載于《中華人民共和國藥典》2010年版一部，藥材含量測定標(biāo)準(zhǔn)為高效液相色譜法，主要測定咖啡酸的含量，沒有蒲公英飲片含量測定的標(biāo)準(zhǔn)，我們是參照藥材標(biāo)準(zhǔn)，采用高效液相色譜法測定蒲公英飲片含量，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，證明藥典收載的含量測定標(biāo)準(zhǔn)可以控制飲片質(zhì)量，且簡便可行，回收率好，具有良好的重現(xiàn)性等，經(jīng)對樣品的測定，制訂了含量限度。

1 儀器與材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀：Agilent1100 安捷倫科技公司。

色譜柱： ODS，5μm， 4.6mm×250mm 迪馬公司生產(chǎn)。

電子天平： MS105DU 梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司。

1.2 材料

試驗(yàn)材料

試劑：甲醇 色譜純，磷酸二氫鈉、磷酸、甲酸、三乙胺 分析純，水 純化水。

對照品：咖啡酸 中國藥品生物制品檢定所。

1.3 色譜條件

1.3.1 供試品的處理及檢測條件均按照《中華人民共和國藥典》2010年版一部所收載方法建立的。

1.3.2 含量測定方法：照高效液相色譜法（附錄Ⅵ D）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鈉1.56g，加水使溶解成1000ml，再加1%的磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3.8～4.0，即得）（23：77）為流動相；檢測波長為323nm；柱溫40℃。理論板數(shù)按咖啡酸計(jì)算應(yīng)不低于3000。

色譜分離情況良好，見圖1與圖2。

2 對照品溶液的制備 取咖啡酸對照品適量，加甲醇制成每1ml中含咖啡酸30μg的溶液，即得。

3 供試品溶液的制備 取本品粗粉約1g，精密稱定，置50ml具塞錐形瓶中，精密加5%甲酸的甲醇溶液10ml，密塞，搖勻，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用5%甲酸的甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心，取上清液，置棕色量瓶中，即得。

4 測定法分別精密吸取對照品溶液10μl與供試品溶液5～20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

本品按干燥品計(jì)算，含咖啡酸（C9H8O4）不得少于0.020%。

5 檢測波長的測定

取對照品溶液和供試品溶液在200～400nm 紫外波長下掃描，結(jié)果在323nm處有最大吸收，故選擇323nm為檢測波長。

6 準(zhǔn)確度

取4號蒲公英粉末6份（含量0.026%），每份約1g ， 精密稱定，分別精密加入一定量的對照品，按供試品溶液的制備進(jìn)行測定，結(jié)果見表1。平均回收率為99.99% （n=6）， RSD為0.17% （n=6），表明回收率良好。

回收率=（測得回收率樣含量-所取樣品含量）/對照品加入量

7 精密度

7.1 儀器精密度

取34.56μg/ml的咖啡酸對照品溶液，精密吸取10μl進(jìn)樣，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算。咖啡酸峰面積的RSD為0.87%（n=6）。表明重復(fù)性良好，結(jié)果見表2。

7.2 重復(fù)性

取4號蒲公英粉末6份各約1g，精密稱定，按供試品溶液制備項(xiàng)下的方法制備，按正文方法進(jìn)行測定，測得的結(jié)果見表，RSD為1.8%（n=6）。表明重復(fù)性良好，結(jié)果見表3。

8 線性關(guān)系考察

精密稱取咖啡酸對照品0.01080g，加甲醇稀釋置25ml（即為0.432mg/ml）為對照液，精密量取對照液0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5 ml分別置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣20μl，按上述條件測定，結(jié)果見表4與圖3。

9 耐用性

9.1 提取方法的選擇

以咖啡酸含量為檢測指標(biāo)，考察了超聲和回流提取兩種提取方法，結(jié)果表明，無顯著差異，因此選擇超聲30分鐘提取。

9.2 溶液穩(wěn)定性

取咖啡酸對照品適量，精密稱定，按上述方法制備成0.035mg/ml的溶液，室溫放置，分別在0、2、4、8、16、24小時(shí)進(jìn)樣測定，計(jì)算，結(jié)果見表5，咖啡酸峰面積RSD為0.2% （n=6）。結(jié)果表明，樣品中的咖啡酸在24小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定。

9.3 不同色譜柱

實(shí)驗(yàn)中考察了迪馬色譜柱Diamonsil C18 （250×4.6mm，5μl）對咖啡酸的分離情況，其他條件不變，結(jié)果表明飲片中的咖啡酸得到較好分離。以上結(jié)果表明系統(tǒng)耐用性良好。

10 限度的確定

測定結(jié)果，按所建立的方法，對7個產(chǎn)地的防己藥材進(jìn)行炮制加工形成飲片后進(jìn)行了含量測定，見表6。結(jié)果表明，各地蒲公英飲片的咖啡酸含量有一定的差別，含量范圍在0.017～0.065%之間，《中華人民共和國藥典》2010年版一部中蒲公英生品的含量要求（不少于0.020%），故據(jù)此情況把蒲公英飲片的含量限度暫定為不少于0.015%。根據(jù)測定結(jié)果確定，本品按干燥品計(jì)算，含咖啡酸（C9H8O4）不得少于0.015%。

11 討論：

11.1 供試品的處理及檢測條件均按照《中華人民共和國藥典》2010年版一部所收載方法建立的。

11.2 平均回收率為99.99% （n=6）， RSD為0.17%（n=6），表明回收率良好。

11.3 儀器精密度：連續(xù)進(jìn)樣6次，咖啡酸峰面積的RSD為0.87%（n=6）。

11.4 重復(fù)性試驗(yàn)：RSD為1.8%（n=6）。表明重復(fù)性良好。

11.5 線性關(guān)系考察：線性范圍：8.64μg/ml～86.4μg/ml。

回歸方程：Area=104.7798707+2.82497392×CONC γ=0.998727

11.6 限度的確定：按正文條件分別測定樣品7批，含量范圍在0.017～0.065%之間，根據(jù)測定結(jié)果確定，本品按干燥品計(jì)算，含咖啡酸（C9H8O4）不得少于0.015%。

參考文獻(xiàn)

[1]《中華人民共和國藥典》2010年版一部：331