奧拉西坦注射液的含量測定方法學(xué)研究

摘 要：為了建立高效液相色譜法（HPLC）檢查奧拉西坦注射液含量的方法。采用氨基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，以乙腈-水（90：10）為流動性，檢測波長為210nm。證明了專屬性較好，系統(tǒng)適用性符合規(guī)定。平均回收率為100.63%，RSD%為0.71%；在0.06mg/ml～0.14mg/ml濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。重復(fù)性、進(jìn)樣精密度、中間精密度、溶液穩(wěn)定性等均符合方法學(xué)驗證要求。可見本方法操作簡便、快捷，可準(zhǔn)確測定奧拉西坦注射液的含量。

關(guān)鍵詞：奧拉西坦；含量；HPLC

奧拉西坦（oxiracetam，ORC）是一種合成的羥基氨基丁酸（GABOB）環(huán)狀衍生物，又稱奧拉酰胺、羥氧吡醋胺，商品名有neuromet、neupan、健朗星等，由意大利史克比切姆公司于1974年首次合成，并于1987年首先在意大利上市。于1990年在美國及日本上市，是治療老年癡呆的藥物之一。本研究擬采用高效液相色譜法建立奧拉西坦注射液的含量測定方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀；奧拉西坦注射液（規(guī)格：5ml：1.0g，小試樣品批號：120217，中試樣品批號：120801、120802、120803，哈爾濱譽(yù)衡藥業(yè)股份有限公司自制）；奧拉西坦注射液市售：批號：100427B，哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；批號：1109008，廣東世信藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；奧拉西坦對照品：批號：101032-200901，純度：99.7%，中國藥品生物制品檢定所。依地酸鈣鈉：批號：100306，四川新元制藥有限公司生產(chǎn)。

2 方法與結(jié)果

本品的含量測定方法參照奧拉西坦注射液試行標(biāo)準(zhǔn)YBH01692006（哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司）及原料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測定項下的色譜條件進(jìn)行。

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：以氨基鍵合硅膠為填充劑。以乙腈：水=90：10為流動相，檢測波長為210nm，理論塔板數(shù)按奧拉西坦峰計算，應(yīng)不低于2500。

2.2 測定法

精密量取本品適量，用流動相稀釋定容制成每1ml含0.1mg的溶液，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取奧拉西坦對照品適量，用流動相溶解并稀釋定容制成每1ml含0.1mg的溶液，作為對照品溶液。分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法進(jìn)行計算，即得。

2.3 方法學(xué)驗證

2.3.1輔料干擾試驗

按處方比例加流動相制成不含奧拉西坦的輔料空白溶液、供試品溶液、對照品溶液，分別按“2.2”項下含量測定方法進(jìn)行試驗。結(jié)果表明：所用輔料對本含量測定方法沒有干擾。

2.3.2系統(tǒng)適用性試驗

精密量取本品，加流動相稀釋定容制成0.1mg/ml的溶液，作為供試品溶液。共配制6份溶液，分別進(jìn)樣20μl，注入液相色譜儀。

結(jié)果表明：6份系統(tǒng)適用性溶液主峰峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)差RSD%為0.44（<2.0%），主峰保留時間RSD%為0.09%（<1.0%），主峰對稱因子均小于2.0，理論塔板數(shù)均大于2500，系統(tǒng)適用性符合規(guī)定。

2.3.3 準(zhǔn)確度

采用供試品溶液中加入2倍濃度對照品貯備液的方法，分別制備擬定測定濃度80%、100%、120%的三組供試品溶液，每個濃度各制備3份溶液，共9份溶液。

精密量取上述供試品溶液及對照品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算回收率。結(jié)果見表1。

結(jié)果表明：平均回收率為100.63%，RSD%為0.71%，本方法準(zhǔn)確度符合規(guī)定。

2.3.4線性關(guān)系

精密稱取奧拉西坦對照品，加流動相超聲溶解并稀釋定容，制成濃度為0.2mg/ml的對照品貯備液。

精密量取對照品貯備液，分別加流動相稀釋定容，制成含量測定方法擬定測定濃度60%、80%、100%、120%、140%的溶液，分別測定其峰面積，以溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸分析。

結(jié)果表明：線性回歸方程為Y=20749X+38.294，相關(guān)系數(shù)r=0.9999（>0.999）；Y軸截距=100%響應(yīng)值×1.82%（<2%）；響應(yīng)因子RSD%=1.05%（<2%）。當(dāng)進(jìn)樣量為20μl時，奧拉西坦在0.06mg/ml～0.14mg/ml濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.3.5 重復(fù)性

照“2.2”項下含量測定方法進(jìn)行試驗，重復(fù)制備6份供試品溶液進(jìn)行含量測定。

結(jié)果表明：重復(fù)性試驗6份供試品溶液平均含量為100.23%，RSD%為0.48%（<1%），本方法重復(fù)性較好。

2.3.6 進(jìn)樣精密度

取制成濃度為0.1mg/ml的供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，考察方法進(jìn)樣精密度。

結(jié)果表明：6次測定供試品溶液主峰面積RSD%為0.04%（<2.0%），該檢測方法進(jìn)樣精密度良好。

2.3.7 中間精密度

按照“2.2”項下含量測定方法進(jìn)行試驗，共進(jìn)行6次試驗，變動條件為不同日期、不同分析人員、不同高效液相檢驗設(shè)備。

結(jié)果表明：設(shè)計6次試驗的平均含量為100.57%，RSD%為0.63%，本方法中間精密度符合要求。

2.3.8 溶液穩(wěn)定性試驗

精密量取本品，加流動相稀釋定容制成濃度為0.1mg/ml的供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12小時取樣，按“2.2”項下含量方法測定。

結(jié)果表明：各時間點(diǎn)供試品溶液主峰面積平均值為2868.735，RSD%為0.48%，供試品溶液在室溫條件放置12小時內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.9 三批供試品測定

取三批中試樣品（批號：120801、120802、120803），分別精密量取1ml，置100ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。精密量取該溶液5ml，置100ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密稱取奧拉西坦對照品，加流動相溶解并稀釋定容制成0.1mg/ml的溶液，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計算，結(jié)果見表2

3 結(jié)束語

本文按照擬定含量測定方法試驗，經(jīng)方法學(xué)驗證結(jié)果表明，該方法專屬性較好、系統(tǒng)適用性符合規(guī)定。準(zhǔn)確度良好，線性關(guān)系、重復(fù)性、進(jìn)樣精密度、中間精密度、溶液穩(wěn)定性等試驗結(jié)果均符合方法學(xué)驗證要求。本方法操作簡便、快捷，可準(zhǔn)確測定奧拉西坦注射液的含量。