Survivin和PTEN在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義

[摘要] 目的 探討Survivin和PTEN在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）中的表達(dá)及臨床意義。 方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)EnVision法檢測80例NSCLC組織和30例癌旁肺組織中Survivin及PTEN的表達(dá)，并分析其與臨床病理因素之間的關(guān)系。 結(jié)果 肺癌組織中，Survivin和 PTEN的陽性表達(dá)率分別為72.5%和33.8%，癌旁組織中Survivin和 PTEN的陽性表達(dá)率分別為 0和83.3%，Survivin隨著腫瘤惡性程度增高，陽性表達(dá)率逐漸升高，而PTEN的表達(dá)則相反，二者在腫瘤中的表述呈負(fù)相關(guān)（r = -0.235，P < 0.01）。 結(jié)論 Survivin和PTEN的異常表達(dá)與NSCLC的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，可作為判斷肺癌生物學(xué)行為和預(yù)后的參考指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] Survivin；PTEN；非小細(xì)胞肺癌；免疫組織化學(xué)

[中圖分類號] R734.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）22-0050-03

肺癌是世界上發(fā)病率和病死率均居首位的惡性腫瘤，其中非小細(xì)胞肺癌（non-small-cell lung cancer，NSCLC）所占比例約為肺癌總數(shù)的80%～85%[1]，成為嚴(yán)重危害人類健康的疾病之一。肺癌的發(fā)生發(fā)展是多個癌基因和抑癌基因共同參與的過程，另外還與細(xì)胞增殖和凋亡調(diào)控異常有關(guān)。Survivin是凋亡抑制基因，具有抑制細(xì)胞凋亡、調(diào)控細(xì)胞周期及參與血管形成的作用，在腫瘤形成中起著重要作用。PTEN基因是一個具有酪氨酸磷酸酶活性的抑癌基因，在腫瘤細(xì)胞浸潤、血管發(fā)生及腫瘤轉(zhuǎn)移中起作用。本研究通過檢測Survivin和PTEN在NSCLC和癌旁肺組織中的表達(dá)并分析其與臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系，研究二者在非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展中的作用及相關(guān)性，為判斷NSCLC的生物學(xué)行為及患者預(yù)后提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

隨機(jī)選取2005年1月～2012年12月濮陽市人民醫(yī)院胸外科手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的肺癌標(biāo)本80例和相應(yīng)的癌旁組織30例，所有患者術(shù)前均未行化療、放療和其他抗腫瘤治療。患者年齡38～80歲，平均年齡（62±3.2）歲；男46例，女34例；其中鱗癌45例，腺癌35例；高、中分化52例，低分化28例。TNM分期：I期18例，Ⅱ期25例，Ⅲ期22例，IV期15例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者48例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者32例。所有標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μm厚切片，分別進(jìn)行HE染色及免疫組化染色。

1.2 方法

采用免疫組化EnVision法，多克隆兔抗人Survivin抗體、鼠抗人PTEN抗體和EnVisionTM檢測試劑盒均購自DAKO公司。將已知陽性切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。結(jié)果判定參考Falleni等[2]的半定量計數(shù)方法。每張切片選10個高倍視野，計數(shù)至少500個腫瘤細(xì)胞，取其平均值計算陽性細(xì)胞百分率。腫瘤細(xì)胞陽性率≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。根據(jù)染色強(qiáng)度分為4級：0分：無染色；1分：淡黃色；2分：黃色；3分：棕黃色或棕褐色。陽性細(xì)胞率與染色強(qiáng)度得分相乘為每例積分。規(guī)定0～1分為陰性（-），積分≥2為陽性。其中2～4分為弱陽性（+），5～8分為中度陽性（++），9～12分為強(qiáng)陽性（+++）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，陽性率比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用校正χ2檢驗(yàn)、Spearman等級相關(guān)分析，以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 Survivin和PTEN在NSCLC和癌旁肺組織中的表達(dá)

Survivin的陽性表達(dá)信號位于胞漿，呈棕黃色細(xì)顆粒。在肺癌組織與癌旁組織Survivin的陽性表達(dá)率分別為72.5%和0。PTEN的陽性表達(dá)信號大部分位于胞質(zhì)內(nèi)，少數(shù)病例位于胞核，呈不同染色程度的棕黃色細(xì)顆粒。肺癌組織中PTEN的陽性表達(dá)率為33.8%，明顯低于癌旁組織 （83.3%）（P < 0.01）。見表1。

2.2 Survivin和PTEN在NSCLC中的表達(dá)與肺癌臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系

Survivin和PTEN的表達(dá)與腫瘤的分化程度、臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P均< 0.05），Survivin的表達(dá)隨著腫瘤組織分化程度的降低、臨床分期的增高和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織而逐漸增高。PTEN的表達(dá)則與之相反。二者的表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤類型差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P > 0.05）。見表2。

2.3 NSCLC中Survivin的表達(dá)和PTEN表達(dá)的相關(guān)性分析

Survivin、PTEN兩者經(jīng)相關(guān)性檢驗(yàn)得出，Spearman相關(guān)系數(shù)r = -0.235，P < 0.01，表明Survivin與PTEN之間存在負(fù)相關(guān)關(guān)系。見表3。

3 討論

Survivin基因定位于人染色體17q25，全長1476nt，長度范圍在75～130 kb，包含4個外顯子和3個內(nèi)含子，由1.9 kb的mRNA轉(zhuǎn)錄和編碼，編碼142個氨基酸組成相對分子質(zhì)量約16 200的胞漿蛋白，并被證實(shí)是一種結(jié)構(gòu)和功能獨(dú)特的IAP家族成員，是IAP家族中分子結(jié)構(gòu)最簡單、最獨(dú)特的，也是迄今發(fā)現(xiàn)最強(qiáng)的IAP。Survivin主要通過直接作用于凋亡末端通路，抑制Caspase-3、Caspase-7活性，阻斷細(xì)胞的凋亡過程[3]，參與腫瘤的發(fā)生。Survivin 主要在胚胎組織及分化未成熟的組織和大多數(shù)腫瘤組織中表達(dá)，在成人體內(nèi)所有分化成熟的組織內(nèi)均無表達(dá)。Akyurek等[4]研究表明，在正常的支氣管上皮細(xì)胞中、低分化的非典型腺瘤樣增生以及癌旁肺組織中，Survivin的表達(dá)為陰性；而在鱗狀化生和發(fā)育異常的非典型腺瘤樣增生組織中Survivin的表達(dá)為陽性。說明Survivin陽性表達(dá)是腫瘤發(fā)生的早期分子事件，提示組織學(xué)尚正常的組織存在癌變的可能[5]。為NSCLC的早期診斷提供了可靠依據(jù)。朱叢中等[6]研究發(fā)現(xiàn)Survivin的表達(dá)與組織學(xué)分級、臨床分期和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，我們的研究結(jié)果顯示Survivin在NSCLC組織中表達(dá)的陽性率為72.5%，而在癌旁正常肺組織不表達(dá)，Survivin蛋白的表達(dá)與腫瘤的分化程度、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P < 0.01），而與其他臨床病理特征均無相關(guān)（P >0.05），提示Survivin蛋白表達(dá)與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)， 同時也對預(yù)后評估提供了參考。

PTEN是一種具有雙重特異性磷酸酶活性的抑癌基因，定位于染色體10q23.3，全長200 kb，由9個外顯子和8個內(nèi)含子組成，編碼403個氨基酸組成的蛋白質(zhì)。參與細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期調(diào)控，與細(xì)胞黏附和腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)。PTEN突變使細(xì)胞生長失去了負(fù)調(diào)控，可導(dǎo)致腫瘤進(jìn)行性生長[7]。研究表明PTEN表達(dá)缺失是非小細(xì)胞肺癌發(fā)生發(fā)展過程中的晚期事件之一，可成為判斷肺癌分化程度、轉(zhuǎn)移及判斷病人病情預(yù)后的指標(biāo)。Goncharuk VN等[8]用免疫組化方法對51例肺腺癌和53例肺鱗狀細(xì)胞癌檢測了PTEN的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)PTEN缺失與腫瘤臨床分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和患者的預(yù)后顯著相關(guān)，并且是獨(dú)立的預(yù)后因子。Wang C等[9]檢測了172例肺腺癌組織中PTEN的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)PTEN與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)，對肺癌患者預(yù)后有著高度預(yù)測作用。本研究結(jié)果顯示，PTEN的表達(dá)隨著腫瘤組織分化程度的降低、臨床分期的增高和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織而逐漸降低，為判斷肺癌細(xì)胞生物學(xué)行為和患者預(yù)后提供了重要參考。

蔣暉等[10]報道，Survivin與PTEN均與細(xì)胞周期調(diào)控和細(xì)胞凋亡有關(guān)，但二者作用相反，當(dāng)組織發(fā)生惡變時Survivin的表達(dá)上調(diào)，而PTEN表達(dá)下降或缺失，進(jìn)而抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖以及腫瘤血管的生成。本研究結(jié)果與文獻(xiàn)報道一致。因此，研究Survivin和PTEN在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其與臨床病理因素之間的關(guān)系，將對非小細(xì)胞肺癌的早期診斷、臨床治療和預(yù)后判斷具有重要的指導(dǎo)意義。

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（收稿日期：2013-05-03）