白花蛇舌草提取液對家兔離體小腸收縮活動的影響

摘要：目的 觀察不同劑量白花蛇舌草提取液對家兔離體小腸收縮活動的影響，并分析其作用機(jī)制與量效關(guān)系。 方法 采用離體腸段實(shí)驗(yàn)法，給予0.15ml、0.25ml、0.35ml三種不同劑量的2g/ml的白花蛇舌草提取液，觀察其對離體小腸收縮活動的影響和0.5ml濃度為 2g/ml的白花蛇舌草提取液拮抗乙酰膽堿的作用。 結(jié)果 不同劑量的白花蛇舌草提取液均能使小腸收縮張力下降，收縮曲線與基線構(gòu)成的面積減小，劑量為0.35ml時(shí)作用最明顯（P<0.01），但對收縮頻率無明顯影響。且0.5ml濃度為 2g/ml的白花蛇舌草提取液能使乙酰膽堿作用下的小腸收縮張力降低。 結(jié)論 白花蛇舌草提取液能抑制家兔離體小腸收縮活動，并對乙酰膽堿有一定的拮抗作用。

關(guān)鍵詞：白花蛇舌草；離體小腸；收縮活動；乙酰膽堿

中圖分類號：R322.4+5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B 文章編號：1005-0515（2013）7-003-02

白花蛇舌草（Hedyotis diffusa）是茜草科耳草屬一年生的草本植物，別名蛇舌草、鶴蛇草等，廣泛分布于亞熱帶地區(qū)，我國云南、廣東、廣西、福建、浙江、江蘇、安徽等地均有生長。民間常用于咽喉腫痛、蛇傷疔瘡、癌腫等的治療[1]，其化學(xué)成分有蒽醌類、黃酮類、甾醇類、生物堿等[2]。臨床上常用于呼吸道感染[3]、胃腸炎[4]、肝炎[5]、腎炎[6]等炎癥性疾病的治療及抗腫瘤[7]，但對消化道平滑肌運(yùn)動有何作用目前國內(nèi)未見報(bào)道。為此，本次實(shí)驗(yàn)研究旨在觀察該藥對消化道平滑肌運(yùn)動的影響，為進(jìn)一步開發(fā)利用白花蛇舌草提供資料。

1材料與方法

1.1對象

健康家兔4只，體重1.5～2.0kg，雌雄不限。（由右江民族醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號：syxk桂2011-0010）

1.2 藥品

白花蛇舌草，在市面上購買（廠址：廣西貴港市綠之源種養(yǎng)發(fā)展有限公司中藥飲片廠）。乙酰膽堿（Ach，上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），Tyrode’s 溶液所用試劑均為蒸餾水，臨時(shí)現(xiàn)配。

1.2.1白花蛇舌草提取液的制備

取藥材100g加水沒過藥面浸泡30min，沸水煎煮20min后過濾，取濾渣再加適量水煎煮20min，過濾后合并兩次濾液，濃縮為50ml，即提取液生藥濃度為2g/ml。

1.3 儀器

BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司），HW-400E恒溫平滑肌槽（成都泰盟科技有限公司）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

家兔禁食24h，自由飲水，實(shí)驗(yàn)前1h喂食。實(shí)驗(yàn)時(shí)用棒擊法使家兔昏迷后剖腹，在劍突下做縱行切口，取賁門下十二指腸20cm放于臺氏液中剪去腸系膜，剪成2～3cm腸段，洗去內(nèi)容物，放于新鮮臺氏液中通入空氣備用。實(shí)驗(yàn)分低、中、高劑量3組（0.15ml組、0.25ml組、0.35ml組）進(jìn)行，每組11段腸管。取一段腸管一端固定在玻璃通氣鉤上，置于盛有80ml Tyrode溶液的浴槽中，另一端固定于張力換能器上與BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)相連。打開HW-400E恒溫平滑肌槽，使浴槽內(nèi)溫度保持為38℃，并持續(xù)勻速通入空氣（約60個/min氣泡）。打開BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，調(diào)零，定標(biāo)。輸入信號為“通道1，張力”。增益調(diào)節(jié)G=100，時(shí)間常數(shù)T=DC，濾波調(diào)節(jié)F=30Hz，掃描速度S=4.00s/div。標(biāo)本負(fù)荷2g，平衡30min，待基線穩(wěn)定后記錄正常小腸平滑肌活動曲線，然后依次滴加濃度為2g/ml不同劑量的白花蛇舌草提取液，記錄給藥后收縮曲線。每滴加一次藥物結(jié)果記錄完畢后，用38℃臺氏液沖洗3次，待腸管恢復(fù)至用藥前水平后進(jìn)行下一次實(shí)驗(yàn)。計(jì)算給藥前后腸肌收縮頻率、張力及面積的變化值。

1.5 對抗乙酰膽堿的作用

待離體腸段平穩(wěn)，同時(shí)滴加1：10000乙酰膽堿0.1ml和2g/ml的白花蛇舌草提取液0.5ml，觀察每次用藥前后離體小腸收縮曲線的變化。另取離體小腸段以單純加入1：10000的乙酰膽堿0.1ml作對照。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ ±S）表示，采用Spss17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組內(nèi)給藥前、給藥后數(shù)據(jù)采用配對t檢驗(yàn)。各組給藥后的數(shù)據(jù)采用單因素方差分析（One Way Anova ）進(jìn)行組間比較，并以最小顯著法（LSP法）進(jìn)行兩兩比較。

2結(jié)果

2.1 白花蛇舌草提取液對小腸收縮活動的影響

與給藥前比較，白花蛇舌草提取液可使十二指腸平滑肌收縮張力降低（P<0.01），收縮曲線與基線的面積減小（P<0.01），說明白花蛇舌草提取液對小腸收縮活動有抑制作用，但對頻率影響較小，統(tǒng)計(jì)學(xué)無顯著性差異。在收縮張力方面，0.15ml組與0.35ml組比較，差異有顯著性（P<0.05），其中以0.35ml組變化最為顯著，如表1，圖1-3所示。

圖1 低劑量組白花蛇舌草提取液對十二指腸的影響

注：與給藥前比較*P<0.01，**P<0.05。實(shí)驗(yàn)后單因素方差分析結(jié)果：F=3.464，P<0.05，與0.35ml組比較：q=2.61，△P<0.05

花蛇舌草提取液對抗乙酰膽堿的作用

2g/ml的白花蛇舌草提取液0.5ml能拮抗乙酰膽堿增強(qiáng)小腸平滑肌運(yùn)動的作用，表現(xiàn)為與單純滴加乙酰膽堿對比收縮曲線面積的下降。如圖4。

3、討論

白花蛇舌草作為一種民間常用中草藥，其主要化學(xué)成分有黃酮類、揮發(fā)油、蒽醌類、萜類化合物、生物堿、甾醇和白花蛇舌草素（香豆精類化合物）等，具有清熱解毒、消炎止痛、利尿消腫、抗癌腫等功效[8]。本實(shí)驗(yàn)采用小腸收縮頻率、收縮張力、收縮曲線與基線構(gòu)成的面積作為觀察指標(biāo)，其中面積與張力能較敏感地反映小腸收縮活動的變化。結(jié)果顯示，滴加白花蛇舌草提取液后可使離體小腸收縮面積減小，張力降低，但收縮頻率無明顯變化，表明不同劑量白花蛇舌草提取液對小腸收縮運(yùn)動有不同程度的抑制作用，但作用時(shí)間比較短暫。而且，隨著劑量的增加，抑制作用越明顯，說明該藥抑制小腸的活動有明顯的量效關(guān)系。

消化道平滑肌有膽堿能M受體分布，乙酰膽堿與細(xì)胞膜M受體結(jié)合后，經(jīng)G蛋白耦聯(lián)受體-磷脂酶C途徑生成三磷酸肌醇（IP3），IP3作為第二信使作用于平滑肌細(xì)胞肌質(zhì)網(wǎng)上的IP3受體，引發(fā)肌質(zhì)網(wǎng)內(nèi)Ca2+釋放和胞內(nèi)游離Ca2+增高[9]，興奮胃腸平滑肌并產(chǎn)生強(qiáng)烈的收縮活動。當(dāng)同時(shí)滴加乙酰膽堿和白花蛇舌草提取液后，發(fā)現(xiàn)能使乙酰膽堿所致的小腸劇烈收縮活動減弱，由此可以推測水提液中的有效成分爭奪占據(jù)了部分乙酰膽堿受體，使乙酰膽堿與受體結(jié)合量減少而導(dǎo)致其作用減弱，具有類似阿托品樣作用。表明白花蛇舌草提取液對腸平滑肌的抑制作用可能與阻斷M受體有關(guān)，通過阻斷藥物-機(jī)械耦聯(lián)，使細(xì)胞內(nèi)貯存Ca2+釋放減少，導(dǎo)致腸平滑肌活動減弱。

從提取液成分分析，提取液可能含有抑制腸平滑肌活動的物質(zhì)，而且不止一種。可能是該藥中黃酮類物質(zhì)槲皮素[10]起作用，槲皮素能夠拮抗Ca2+通道，減少Ca2+進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，使胞內(nèi)Ca2+濃度降低，從而抑制腸平滑肌收縮。也可能是白花蛇舌草中的揮發(fā)油起作用，與檀香揮發(fā)油[11]的作用相似，通過拮抗腸平滑肌上膽堿能受體和對離子通道的作用，使腸平滑肌的活動減弱。此外，還有可能是白花蛇舌草素（香豆精類化合物[12]）對Ca2+的拮抗而發(fā)揮抑制作用。具體是否是白花蛇舌草中的黃酮類、揮發(fā)油以及白花蛇舌草素發(fā)揮作用，還是其他成分起作用，及其對小腸平滑肌抑制作用機(jī)制等問題還有待進(jìn)一步深入研究。

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通訊作者：趙善民（1951-），男，教授，研究方向：心血管病理生理

基金項(xiàng)目：右江民族醫(yī)學(xué)院2013年度自治區(qū)級大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃立項(xiàng)項(xiàng)目 （項(xiàng)目編號：QJCX201324）