骨髓血小板相關抗體檢測在ITP診斷中的價值

張宗新，高 敏，汪 艷，陳葉龍

(湖州市中心醫院檢驗科，浙江湖州313000)

特發性血小板減少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP)為一組自身免疫性疾病，系由于機體免疫調節機制紊亂，抗血小板抗體(platelet associated antibody，PAIg)產生，血小板數量破壞增加而出血的疾病。血液及骨髓中均存在血小板[1]，該類患者由于機體中存在 PAIg[2]。目前一般只檢測血液中的血小板表面PAIg，極少見檢測骨髓標本。然而部分ITP患者血液中血小板表面PAIg檢測，結果為陰性，為診斷帶來困難。為此，故我們檢測了ITP患者骨髓中血小板表面PAIg，探討對其ITP的臨床價值。

材料和方法

一、對象

選取湖州市中心醫院2012年7月至2013年6月血液科初次就診未治療的ITP患者50例，其中男19例，女31例，年齡22～66歲。患者均按診斷標準[3](均符合以下條件:多次實驗室檢查血小板計數減少;脾臟不增大或僅輕度增大;骨髓檢查巨核細胞數量增多或正常，有成熟障礙;潑尼松治療有效;排除繼發性血小板減少癥)確診為ITP。20例對照者為湖州市中心醫院內科住院發熱待查的患者，經骨髓穿刺涂片檢查(排除血液病)屬正常骨髓象，均無出血性疾病和內分泌系統疾病，其中男9例，女11例，年齡19～59歲。

二、儀器與抗體

FACS Calibur流式細胞儀由美國BD公司提供。Gt F(ab')2 Anti-Human IgG-FITC、Gt F(ab')2 Anti-Human IgM-FITC、Gt F(ab')2 Anti-Human IgA-FITC、CD41-PE及同型對照 Goat F(ab')2 IgG-FITC均由美國Beckman-Coulter公司提供。

三、實驗方法

1.標本采集 所有對象在行骨髓穿刺涂片時抽取骨髓液 1.5 mL，用乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na2)抗凝處理，同時采集外周血1.0 mL。

2.血小板的富集 將抗凝的新鮮骨髓液1.5 mL及抗凝血1.0 mL 400×g離心15 min，分離富血小板血漿(RPR)，取 RPR 50～200μL(根據血小板多少取適量，調整細胞濃度為5×106個細胞數/mL)各置于塑料管A中，各加入2 mL磷酸鹽緩沖液(PBS)1 400×g離心15 min，去上清液后，加400μL鞘液定容。在塑料管 A中加入40μL CD41-PE，充分混勻。另取4支試管，分別加入上述4種單抗試劑10μL，再在各試管中加入塑料管A中的血小板懸液100μL，室溫暗處放置孵育15 min。再加入PBS 2 mL，1 400×g離心5 min洗滌1次，去上清后加1.0 mL鞘液定容。

3.流式分析 根據CD41/SSC設置血小板門，以同型對照管調整電壓及熒光補償，然后分別檢測骨髓液及血液標本PAIgG、PAIgM、PAIgA熒光百分率和平均熒光強度(MFI)。

三、統計學方法

結 果

一、對照組、ITP組骨髓、血液標本血小板相關抗體結果比較

ITP組骨髓及血液PAIgG水平差異有統計學意義(P＜0.01)，PAIgM及PAIgA水平2種標本間差異無統計學意義(P＞0.05)。見表1。

表1 對照組與ITP患者骨髓、血液標本血小板相關抗體結果比較 (%)

二、ITP患者2種標本血小板相關抗體陽性率比較

ITP患者骨髓標本 PAIgG、PAIgM、PAIgA陽性率分別為98%、42%、46%，總陽性率為100%;均高于血液標本(76%、38%、44%，總陽性率為82%)。顯示骨髓標本血小板相關抗體的敏感性更高。

表2 ITP患者2種標本血小板相關抗體陽性率比較

討 論

目前ITP的發病機制尚未完全闡明，患者血小板相關抗體的增高與血小板數及血小板壽命呈負相關[4]。PAIg是診斷ITP的1項敏感指標。本研究顯示血液有82%的ITP患者血小板相關抗體陽性，骨髓為100%陽性。本研究血液數據略低于文獻報道[5]，而骨髓陽性率明顯高于血液標本。

本研究中骨髓PAIgG的濃度及陽性率均明顯高于血液標本相關指標，可能是由于骨髓淋巴細胞產生的血小板特異的IgG自身抗體[6]一方面優先與血小板結合，同時骨髓內結合了血小板抗體的血小板未被破壞，所以骨髓PAIgG水平及陽性率升高。從骨髓釋放入血液的結合有血小板相關抗體的血小板在循環中進入脾臟或其它單核巨噬系統后被識別破壞，導致血液中PAIgG水平降低。PAIgM為5價的多聚體，是機體受抗原刺激后最早產生的抗體。PAIgM可激活補體，較IgG類高1 000倍左右，是具有最強活力的凝集抗體，其與血小板結合直接破壞大量血小板。PAIgA可以結合抗原，但不能激活補體的經典途徑。因此，不能像PAIgG那樣發揮生物效應。骨髓PAIgM、PAIgA水平及陽性率與血液相當或偏高也驗證了此理論。

綜上所述，檢測骨髓PAIg可以提高ITP患者的輔助診斷率，具有一定的臨床價值。

[1]許文榮，王建中.臨床血液學檢驗[M].第5版.北京:人民衛生出版社，2012:39-117.

[2]張之南，郝玉書，趙永強，等.血液病學[M].第2版.北京:人民衛生出版社，2011:1273-1274.

[3]張之南，沈 悌.血液病診斷及療效標準[M].第3版.北京:科學出版社，2007:172-176.

[4]李美玲，楊林花.血小板抗體及其檢測在特發性血小板減少性紫癜中的研究進展[J].山西醫藥雜志，2007，36(4):325-327.

[5]李 明，臺 虹，歐陽紅梅，等.PAIgG、PAIgA 和PAIgM在特發性血小板減少性紫癜診斷中的應用[J].中國醫學檢驗雜志，2002，3(1):52-54.

[6]Nakhoul IN，Kozuch P，Varma M.Management of adult idiopathic thrombocytopenic purpura[J].Clin Adv Hematol Oncol，2006，4(2):136-144.