星點設計－效應面法優選湖北海棠葉總黃酮的提取工藝

郭東艷 王 幸 唐志書 汪鋆植

湖北海棠［Malus hupehensis(Pamp．)Rehd．］別名甜茶果、泰山海棠，為薔薇科(Rosaceae)蘋果屬(Malus)植物［1，2］。原產湖北省西部神農架林區、宜昌、恩施等地，湖北海棠葉是湖北人常飲用的涼茶，也是土家族常用的藥物，收載于《湖北省中藥材質量標準》(2009年版)，具有養肝和胃、生津止渴、消積化滯等功效，用于急慢性肝損傷、慢性肝炎、脂肪肝治療［3，4］。有關湖北海棠葉總黃酮文獻報道較少，因此本研究采用星點設計－效應面法優選湖北海棠總黃酮的提取工藝，以期為今后的開發研究奠定基礎。

材料與方法

1．儀器:Agilent 1260 Infinity高效液相色譜儀(G1311C型四元泵，G1329B型進樣器，G4212B型二極管陣列檢測器);UV－1102型紫外可見分光光度儀(上海天美科學儀器有限公司);GB－204型電子天平(瑞士);HH－2型恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司)。

2．試藥:湖北海棠葉［購自湖北神農架，經陜西中醫學院王繼濤老師鑒定為蘋果屬(Malus Mill．)湖北海棠(Malushupehensis(Pamp．)Rehd］的干燥葉。根皮苷對照品(自制，經HPLC檢測含量＞98%);甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

3．湖北海棠葉中根皮苷的含量測定［6］色譜條件:Diamonsil C18(250．0mm ×4．6mm，5μm)色譜柱;乙腈 －0．05% 磷酸水(25∶75)為流動相;檢測波長為287nm;流速為:1．0ml/min;溫度為30℃。(1)對照品溶液的制備:精密稱取根皮苷對照品，加入50%甲醇溶解制成每1ml含0．015mg的溶液，備用。(2)供試品溶液的制備:精密移取湖北海棠葉提取液0．5ml于蒸發皿中于水浴上蒸干，加50%甲醇溶解并定容至10ml量瓶中，0.45μm微孔濾膜濾過，即得。線性關系的考察:精密移取根皮苷對照品溶液 2、4、6、8、10、12μl，依色譜條件進行測定，以根皮苷的含量(μg)為橫坐標，以測得的峰面積為縱坐標，計算回歸方程。……