量子點聯合磁微粒技術檢測HBsAg方法的建立及評價

何紫琪 李從榮 楊艷兵 吳 青 余 華

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)因其發病率高、傳染性強、傳播面廣，已成為全球性的公共衛生問題。據WHO報道，全世界大約有20億人曾經感染過HBV，超過2．4億的患者發展為慢性化，每年約有60萬人因急、慢性HBV感染而死亡［1］。乙型肝炎患者主要集聚在亞洲，該地區大多數人在兒童時期就感染HBV，8% ～10%的成人發展為慢性感染者，在中國更為嚴重［1］。HBV主要通過血液傳播，因此要對獻血員進行嚴格的HBsAg篩查，國家衛生和計劃生育委員會(原衛生部)出臺的《獻血者健康檢查要求》規定:獻血者要進行HBsAg的檢測。HBsAg是HBV感染最早出現的免疫學標志物，HBsAg檢測可以縮短病原檢出的“窗口期”，也能避免感染恢復后假陽性結果的產生，是病原體診斷的趨勢所在。本研究擬利用量子點與磁微粒的特性，建立一種便捷、高靈敏度的HBsAg的檢測方法。

材料與方法

1．試劑和儀器:發射波長為605nm的鏈霉親和素化CdSe/Zns硒化鎘量子點(武漢珈源量子點公司)、粒徑3 μm的xMagTM異硫氰酸根末端磁微粒(陜西北美基因股份有限公司)、HBsAg adr protein、生物素化兔抗 HBsAg－IgG、鼠抗 HB-sAg－IgG(英國Abcam公司)。DDHZ－300型恒溫振蕩器(江蘇太倉市實驗設備廠)、磁選分離器(西北美基因股份有限公司)、EURO StarⅡ型熒光顯微鏡(德國EURO公司)、BIORAD680型酶標儀(美國BIO RAD公司)。

2．方法:(1)磁微粒(MMS)與抗體偶聯:嚴格按照說明書進行MMS的活化、抗體偶聯、清洗和封閉，分別以不同濃度的鼠抗 HBsAg－IgG 與 MMS偶聯，以(OD原始抗體－OD清洗液)/OD原始抗體計算連接效率，并選擇最合適的抗體濃度。(2)量子點(QD)與抗體連接方法學的建立:用pH值7．2的PBS緩沖液以1∶500稀釋鏈霉親和素化的量子點，4℃保存備用。……