ERα通過MTA3調控EMT影響HCC細胞凋亡的研究

張宇華 胡智明 張成武 吳偉頂 劉 杰 尚敏杰 趙大建

肝細胞性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)病死率高，每年全球50萬以上患者診斷為原發性肝癌，HCC約占原發性肝癌的85%［1］。我國是HCC高發區，發病人數約占全球55%，在腫瘤相關死亡中僅次于肺癌，手術治療是目前治療效果最佳、唯一有可能治愈的方案，但是5年內再次發現腫瘤的概率為75%［2］。進展期肝癌目前無有效治療方案，放化療對HCC無效。分子靶向治療是目前發展十分迅速的一個領域，但索拉菲尼是一種小分子多激酶抑制劑，僅能使37%患者延長生存期2～3個月［3］。雌激素在HCC發生發展中起作用，但目前對此方面的研究不多。上皮間質轉換(epithelial－mesenchymal transition，EMT)為目前腫瘤研究的熱點，影響多種腫瘤的轉移及進展，而雌激素受體 α(Estrogen receptorα，ERα)通過調控 Snail、E－cadherin(EMT重要調控因子)調控EMT已經在乳腺癌、卵巢癌及前列腺癌等中被證實，但在HCC中，目前尚未發現有關ERα調控EMT的報道。筆者通過檢測雌二醇、氟維司瓊作用于HCC細胞后 MTA3、Snail、E－cadherin和 BAX表達變化，明確 ERα通過 ERα→MTA3→Snail→E－cadherin信號通路影響 HCC細胞 EMT，進而影響HCC細胞凋亡的機制，為針對ERα的治療應用于HCC提供理論基礎。

材料與方法

1．HCC細胞:HCC 細胞株:HepG2、SMMC －7721(中國醫學科學院腫瘤細胞庫)。

2．細胞培養:HepG2、SMMC－7721細胞于DMEM培養基(含10%胎牛血清、100U/ml青霉素、100mg/ml鏈霉素)(杭州四季青)37℃、5%CO2常規培養。

3．Western blot:按照常規方法提取細胞總蛋白、定量。蛋白變性后10%SDS－聚丙烯膠收集+5%SDS－聚丙烯膠分離，蛋白濕轉至 PVDF 膜，脫脂奶封閉后，ERα、MTA3、Snail、E－cadherin、BAX(Santa Cruz Biotechnology公司)4℃振蕩孵育過夜，二抗(抗兔或抗鼠IgG，Santa Cruz Biotechnology公司)室溫孵育1h，ECL顯色。β－actin(Santa Cruz Biotechnology公司)作為內參照。

4．分組及干預藥物濃度:HepG2、SMMC－7721細胞在無酚紅培養液中調節細胞濃度為2．0×106個/毫升。……