應用HPLC 法測定天麻頭風靈膠囊中天麻素含量

陳韻蓓

(四川省骨科醫院，四川 成都610041)

天麻頭風靈膠囊由天麻、槲寄生、牛膝、玄參、地黃、當歸、鉤藤、杜仲、川芎、野菊花等10 味中藥制成，功能滋陰潛陽、祛風、強筋骨，用于治療頑固性頭痛、長期手足麻木、慢性腰腿酸痛等，收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準》中藥成方制劑第五冊。本品的質量標準(WS3-B-0903-91)雖在實行中藥保護時進行研究修訂(WS3-B-3034-98)，但也只有齊墩果酸及當歸的定性鑒別，沒有含量測定項，且本方中槲寄生、牛膝均含有齊墩果酸［1，2］，原質量標準中對齊墩果酸的定性鑒別不具有專屬性。而天麻作為本方的君藥，本品質量標準并沒有對其中的天麻素含量進行測定。為了全面評價天麻頭風靈膠囊的質量，本研究建立天麻素含量測定的高效液相色譜法(HPLC)［3，4］，擬使天麻頭風靈膠囊的質量控制更簡便、準確、可靠。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 SPD-10AVP 高效液相色譜儀(日本島津);分析天平(Sartorius，BS110S);天麻頭風靈膠囊(貴州益佰制藥股份有限公司，批號:130101、130410、130808);天麻素對照品(批號:807-200205，中國藥品生物制品檢定所);乙腈(色譜純，TEDIA);甲醇(色譜純，山東禹王實業有限公司);重蒸餾水為自制;其他所用試劑均為分析純。

1.2 方法 ①對照品溶液的制備:精密稱取80 ℃

減壓干燥1 h 的天麻素對照品適量，加流動相制成每1 ml 含50 μg 的溶液，即得。②供試品溶液的制備:取本品內容物約2 g，精密稱定，置50 ml 圓底燒瓶中，精密加入甲醇25 ml，稱定重量，回流提取1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液5 ml，蒸干，殘渣加流動相溶解，并轉移至5 ml 量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，用0．45 μm 微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。③陰性樣品溶液的制備:按處方比例稱取除天麻以外的其他藥材，參照天麻頭風靈膠囊質量標準中制法項下工藝制得陰性樣品，按②項方法制成陰性樣品溶液。④色譜條件［5］與系統適用性試驗:色譜柱:Dikma ODS，4．6 mm × 250 mm，5 μm;流 動 相:乙 腈-水-磷 酸(1 ∶98．9 ∶0．1);柱溫:30 ℃;檢測波長為220 nm;流速為1．0 ml/min。理論板數按天麻素峰計算應不低于5000。⑤空白干擾試驗:分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各20 μl，注入液相色譜儀，測定。⑥標準曲線與線性關系:取天麻素對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1 ml 含250 μg 的溶液，分別吸取上述溶液0．5、1、2、3、4、5 ml，分別置10 ml 量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為各對照品溶液。分別精密吸取各對照品溶液20 μl，注入液相色譜儀，依法測定。以峰面積積分值(Y)為縱坐標，以天麻素進樣量微克數(X)為橫坐標，繪制標準曲線并計算得回歸方程。⑦精密度試驗:精密吸取對照品溶液20 μl，注入液相色譜儀測定6 次，計算峰面積。⑧重現性試驗:取本品內容物約2 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法平行制備5 份，依法測定，并計算樣品中天麻素的含量。⑨穩定性試驗:取室溫放置的對照品溶液與供試品溶液，在0、1、2、4、8、12、24 小時分別進樣。為了更全面地考察穩定性，分別計算峰面積和天麻素含量的相對標準偏差(RSD)。⑩加樣回收率試驗:取已知含量的樣品內容物約1．0 g，精密稱定，平行5 份，各精密加入天麻素對照品溶液1 ml(精密稱取天麻素對照品10．08 mg，置10 ml 量瓶中，加50%甲醇溶解并定容至刻度，即得，按供試品的制備方法制備供試品溶液，依法測定各樣品天麻素的含量，計算回收率。

2 結果

2.1 空白干擾試驗 供試品色譜中天麻素峰分離度良好，柱效高，且陰性樣品色譜中在與天麻素峰相同保留時間處無干擾色譜峰，見圖1。

2.2 標準曲線與線性關系 線性關系回歸方程為Y=1786227．55X-27588．39，相關系數r= 0．9997。結果表明天麻素進樣量在0．2328 ～2．3280 μg 范圍內與峰面積呈良好線性關系。

2.3 精密度 計算得峰面積積分值RSD 為0．72%。

2.4 重現性 樣品中天麻素含量RSD 為2．4%。

2.5 穩定性 峰面積和天麻素含量的RSD 分別為1．1%和0．57%，顯示天麻素對照品溶液及供試品溶液室溫放置24 h 內基本穩定。

2.6 加樣回收率試驗 天麻素的平均回收率為97．74%，RSD 為1．9%，見表1。

圖1 天麻素含量測定HPLC 圖 a:對照品;b:供試品;c:陰性;1．天麻素峰

表1 回收率試驗結果

2.7 樣品含量 取貴州益佰制藥股份有限公司生產的天麻頭風靈膠囊樣品3 批，每批3 份，按1．2②項方法制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液20 μl，在上述色譜條件下進樣分析，并計算得各批樣品的含量。結果見表2。

表2 樣品中天麻素的含量測定結果

3 討論

中國藥典2010 年版一部天麻項下規定天麻素的含量不低于0．2%，由表2 可以看出市售產品中天麻素的平均含量為0．205 毫克/粒，參照《中華人民共和國衛生部藥品標準》可計算出樣品中天麻素的含量均符合《藥典》要求，其中第一批樣品含量相對較低，可能是因為廠家生產時原料差異造成的，但均符合藥典要求。

天麻為本方中君藥，雖然用量較少，但制定其含量測定方法是非常重要的。本文使用的含量測定方法有較強的實用性、可操作性，能合理、規范地測定天麻頭風靈膠囊中天麻素的含量，為以后天麻頭風靈膠囊含量限度的制定及質量標準的更新提供了依據。

［1］國家藥典委員會．《中華人民共和國藥典》一部［S］．北京:化學工業出版社，2010:350．

［2］鄭虎占，董澤宏，佘靖．中藥現代研究與應用［M］． 北京:學苑出版社，1998:1055．

［3］張輝，陳文秋，余敏靈，等．應用氣相色譜法測定冰硼散中樟腦的含量［J］．實用醫院臨床雜志，2014，11(2):100-102．

［4］童榮生．高效液相色譜法測定山茱萸中沒食子酸的含量［J］． 實用醫院臨床雜志，2006，3(4):27-28．

［5］國家藥典委員會．《中華人民共和國藥典》一部［S］． 北京:化學工業出版，2010:54．