復方蜥蜴散不同微粒組合劑對胃癌前病變模型大鼠Wnt 信號通路中Wnt2、β-catenin、Cyclin-D1 蛋白表達的影響

王延麗，朱西杰，蔡根深，肖清燕，王 儒，李美麗

寧夏醫科大學中醫學院，銀川 750004

胃癌前病變(Gastric Precancerous Lesions，GPL)是一個病理性概念，包括腸上皮化生(Intestinal Metaplasia，IM)和異型增生(Dysplasia，Dys)，目前認為主要是不完全性結腸型化生及中、重度異型增生，主要發生在慢性萎縮性胃炎(Chronic Atrophic Gastritis，CAG)演變過程中，是正常胃黏膜向胃癌演變的一個重要階段。胃癌前病變的臨床表現與慢性萎縮性胃炎相似，主要表現為胃痛、胃脹、心下痞滿，滿悶不舒，噯氣等癥，其表現與“痞滿”、“胃痛”相似。于1989 年10 月在江西廬山召開的全國中醫內科學會第五屆全國脾胃病學術會議上將胃癌前病變歸屬于“胃痞”范疇。

胃癌前病變其病因為物理、化學及生物性因素長期反復作用于人體所致，西醫治療效不明顯。目前認為無論何種損傷因素通過何種方式作用于胃黏膜，最終結果都是造成細胞的功能破壞，使細胞的增殖和凋亡失衡造成黏膜損傷。Wnt2、β-catenin、Cyclin-D1 是增殖調節基因，因此Wnt2、β-catenin、Cyclin-D1 在細胞內的表達是決定細胞發生增殖凋亡的重要因素。我們臨床應用寧夏密點麻蜥組成的驗方復方蜥蜴散不同微粒組合劑(以下簡稱復方蜥蜴散)治療胃癌前病變取得了良好的療效。本研究旨在應用免疫組化法，觀察該驗方對胃癌前病變模型大鼠胃黏膜細胞增殖蛋白Wnt2、Cyclin-D1、β-catenin 表達的影響，探討其對胃癌前病變的治療機制，為臨床治療提供依據。

1 材料與儀器

1.1 動物

SPF 級雄性SD 大鼠120 只，4～6 周齡，體重150～180 g，SPF 大小鼠生長繁殖飼料，均由寧夏醫科大學實驗動物中心提供。

1.2 藥物及試劑

藥物:N-甲基-N'-硝基-N-亞硝基胍(MNNG):東京化成工業株式會社。維酶素(新鄉恒久遠藥業有限公司)。復方蜥蜴散:由蜥蜴粉、鹿角霜粉、海螵蛸粉、炒白術粉、半枝蓮粉等組成，由寧夏醫科大學中醫消化病研究所提供。0.9%氯化鈉溶液:吉林省都邦藥業股份有限公司。

試劑:兔抗大鼠多克隆Wnt2 抗體，購自santa cruz 生物技術公司。兔抗大鼠多克隆β-catenin 抗體、兔抗大鼠多克隆Cyclin-D1 抗體購自美國Immunoway 生物技術公司。通用型二步法免疫組化檢測試劑盒，DAB 顯色試劑盒，檸檬酸鹽緩沖液，PBS 磷酸鹽緩沖液，均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 主要儀器與設備

石蠟切片機(上海萊卡公司);超低溫冰箱(廣東科龍電器公司);隔水式恒溫培養箱(上海精宏實驗設備有限公司);高壓蒸汽消毒鍋(廣東Galanz 公司);電熱恒溫培養箱(上海躍進醫用光學儀器廠);漂烘片機(常州市雅博電子設備有限公司);孵育盒(濕盒)(福州邁新生物技術開發有限公司);病理組織包埋冷凍臺(常州中威電子儀器廠);圖像采集系統顯微鏡(日本OLYMPUS 公司)。

2 實驗方法

2.1 動物分組

120 只SPF 級SD 雄性大鼠，隨機分為6 組，即正常對照組、復方蜥蜴散80 目治療組、100 目治療組、80 目和100 目等量混合治療組、胃癌前病變模型對照組、維酶素治療組，編為A-F 組，每組20 只，相同條件下分籠飼養，SPF 大小鼠生長繁殖飼料喂養，自由飲水，室溫(20 ±2)℃，濕度55%～60%。

2.2 藥物配制

MNNG 溶液:按0.017 mol/L 濃度的MNNG 溶液。維酶素混懸液:維酶素片研末，用生理鹽水配成0.1 g/mL 的混懸液。復方蜥蜴散不同微粒組合劑混懸液:復方蜥蜴散80 目、100 目、80 目和100 目等量混合物經過粉碎、高溫滅菌、蒸2.5h，晾干后，用雙蒸水分別配成0.14 g/mL 糊劑混懸液裝瓶。均4℃冰箱保存備用。

2.3 造模方法及治療方法

2.3.1 PLGC 模型的建立

參閱大量的文獻資料［1，2］，具體造模方法:以0.017 mol/L 的MNNG 溶液，按0.5 mL/100 g 體重對大鼠灌胃，每日一次，連續8 周，輔助采取2 日飽食、l 日饑餓的饑飽失常法，飽食日自由食用，饑餓日禁食不禁水，并不時給予情緒刺激因素，A 組大鼠充足供應標準顆粒飼料及清潔蒸餾水。

2.3.2 治療措施

造模8 周后，證實符合胃癌前病變的病理診斷(見圖4 中HE)。A 組大鼠仍然充足供食及水，B組、C 組、D 組大鼠分別給予復方蜥蜴散80 目、100目、80 目100 目等量混合糊劑混懸液10 mL/kg·d灌胃;E 組大鼠開始給予0.9%氯化鈉溶液10 mL/kg·d 灌胃;F 組大鼠給予0.1 g/mL 維酶素混懸液10 mL/kg·d(1.0 g/kg·d)灌胃。各1 次/天，連續用藥12 周。

2.4 標本采集和處理

2.4.1 標本采集

實驗進行至預定階段，大鼠禁食水24 h 后，全部用10%水合氯醛溶液腹腔內注射麻醉大鼠。剖腹，距賁門和幽門1.5 cm 離斷取出全胃。沿胃大彎側剖開，冰生理鹽水沖洗后，濾紙吸干鋪開。胃黏膜標本固定于10%的中性福爾馬林溶液中，胃體部取2 cm ×5 mm 縱切條狀組織，固定24 h 后，梯度脫水，石蠟包埋備用。常規HE 染色做病理組織學檢驗，鄰近切片做免疫組化染色。

2.4.2 免疫組化染色

Wnt2 與β-catenin、Cyclin-D1 免疫組化染色步驟采用通用型二步法，步驟如下:①將實驗用切片置于60 ℃恒溫電烤箱中過夜(12～16 h)。切片按步驟依次脫蠟水化。②高壓法抗原熱修復:枸櫞酸抗原修復液修復。③消除內源性過氧化物酶的影響:每張切片加入1 滴(50 μL)3% H2O2，室溫或37 ℃孵育10 min。PBS 洗3 min ×3 次。④消除非特異性染色:每張切片加1 滴(50 μL)的正常山羊非免疫性血清封閉，室溫或37 ℃孵育10 min。⑤加“一抗”:甩去血清，每張切片加1 滴(50 μL)新鮮配制的一抗，置于濕盒內放入4 ℃冰箱孵育過夜。⑥將濕盒從4 ℃冰箱中取出，放入37 ℃電熱恒溫箱中復溫45 min。PBS 洗5 min ×3 次。⑦加二抗:甩去PBS 液，每張切片加1 滴(50 μL)二抗工作液，室溫或37 ℃孵育30 min。PBS 沖洗，3 min×3 次。⑧顯色:甩去PBS 液，每張切片加2 滴(100 μL)新鮮配制的DAB 染色液，2～10 min 后顯微鏡下觀察，有陽性顯色即用自來水沖洗中止顯色。⑨復染:按步驟要求進行復染和脫水。⑩封片:二甲苯透明5 min后涼干，中性樹膠封片。

Wnt2 抗體使用濃度為1:100;β-catenin 抗體使用濃度為1∶150;Cyclin-D1 抗體使用濃度為1∶100。

2.5 圖像采集分析方法與統計方法

2.5.1 圖像采集分析方法

采用數碼顯微鏡捕捉免疫組化圖片(jpg 格式):采用Image-Pro Plus 6.0 圖像分析系統，每張切片隨機選取5個高倍視野測定陽性區域圖像的平均光密度(AOD)。圖像分割與自動計算:選定分割范圍后，點擊“分割”按鈕選擇手動分割，根據IHC 陽性染色區域的不同，通過RGB 顏色直方圖來調節分割的范圍及閾值。點擊“自動計算”，對已分割好的圖像自動測定陽性區域的光學密度值。

2.5.2 統計結果處理

統計數據均應用SPSS18.0 統計軟件進行分析。人工計數方法所得結果采用非參數秩和檢驗比較，圖像采集分析方法所得結果用單因素方差分析處理，所有計量資料呈正態分布，結果用表示，組間比較經方差其同性檢驗后采用成組t 檢驗;多組間比較當各組方差齊時用LSD 法進行均數間的兩兩比較，當各組方差不齊時用Dunnett 法進行均數間的兩兩比較。以P＜0.05 為有統計學意義。

3 實驗結果

3.1 各組大鼠Wnt2 免疫組化染色統計結果

Wnt2 蛋白陽性信號呈棕黃色，主要出現在細胞胞質及胞膜。正常對照組大鼠胃黏膜有極少量陽性細胞即細胞質染色。維酶素組和復方蜥蜴散組大鼠胃黏膜部分細胞可見黃色、褐色程度不同的染色，與模型組比較染色較淺。模型組細胞染色最重。見圖1(W-A～W-F)。統計結果:通過圖像分析系統對免疫組化圖像光密度的測算，B、C、D 各組細胞Wnt2蛋白的陽性表達率顯著與E 組有顯著差異(P＜0.01)，D 組細胞Wnt2 蛋白的陽性表達率顯著與F組有顯著差異(P＜0.01)。見表1。

圖1 正常組(W-A)、TCLP 80 目組(W-B)、TCLP 100 目組(W-C)、TCLP 80 +100 目組(W-D)、模型組(WE)及維酶素(W-F)Wnt2 蛋白陽性表達Fig.1 Expression of Wnt2 in control group (W-A)，TCLP-80 group (W-B)，TCLP-100 group (W-C)，TCLP-80+100 group (W-D)，model group (W-E)and vitacoenzyme group (W-F)

表1 各組大鼠Wnt2 蛋白表達的平均光密度比較()Table 1 Average optical density of Wnt2 protein expression in each group ()

表1 各組大鼠Wnt2 蛋白表達的平均光密度比較()Table 1 Average optical density of Wnt2 protein expression in each group ()

注:各治療組與模型E 組比較，▲P＜0.05，△P＜0.01;與維霉素F 組比較，◆P＜0.05，■P＜0.01。Note:Compared with model，▲P＜0.01，△P＜0.01;Compared with vitacoenzyme group，◆P＜0.05，■P＜0.01.

3.2 各組大鼠β-catenin 免疫組化染色統計結果

β-catenin 陽性信號主要定位于細胞-細胞接觸側的細胞膜，在胞質僅有很弱的表達，而在胃癌前病例中可見β-catenin 的異常表達，即在細胞質和細胞核中表達增強。免疫組化結果顯示，維酶素組和復方蜥蜴散組大鼠胃黏膜部分細胞可見黃色、褐色程度不同的染色，與模型組比較染色較淺。模型組細胞染色最深。見圖2(B-A～B-F)。統計結果:通過圖像分析系統對免疫組化圖像光密度的測算，B、C、D 各組細胞β-catenin 蛋白的陽性表達率與E 組有顯著差異(P＜0.01)，D 組細胞β-catenin 的陽性表達率與F 組有顯著差異(P＜0.01)。見表2。

圖1 正常組(B-A)、TCLP 80 目組(B-B)、TCLP 100 目組(B-C)、TCLP 80 +100 目組(B-D)、模型組(B-E)及維酶素(B-F)組β-catenin 蛋白陽性表達Fig.2 Expression of β-catenin in control group (B-A)，TCLP-80 group (B-B)，TCLP-100 group(B-C)，TCLP-80 +100 group (B-D)，model group (B-E)and vitacoenzyme group (B-F)

表2 各組大鼠β-catenin 蛋白表達的平均光密度比較()Table 2 Average optical density of β-catenin protein expression in each group ()

表2 各組大鼠β-catenin 蛋白表達的平均光密度比較()Table 2 Average optical density of β-catenin protein expression in each group ()

注:各治療組與模型E 組比較，▲P＜0.01;與維霉素F 組比較，◆P＜0.05，■P＜0.01。Note:Compared with model，▲P＜0.01;Compared with vitacoenzyme group，◆P＜0.05，■P＜0.01.

3.3 各組大鼠Cyclin-D1 免疫組化染色統計結果

Cyclin-D 1 蛋白陽性著色位于細胞漿和細胞核，細胞核呈棕黃色細小顆粒著色為陽性細胞，免疫組化結果顯示，維酶素組和復方蜥蜴散組大鼠胃黏膜部分細胞可見黃色、褐色程度不同的染色，與模型組比較染色較淺。模型組細胞染色最深。見圖3(C-A～C-F)。陰性對照片無表達。見圖4 中Y-1。統計結果:通過圖像分析系統對免疫組化圖像光密度的測算，B、C、D 各組細胞Cyclin-D1 蛋白的陽性表達率與E 組有顯著差異(P＜0.01)，D 組細胞Cyclin-D1 蛋白的陽性表達率與F 組有顯著差異(P＜0.05)。見表3。

圖3 正常組(C-A)、TCLP 80 目組(C-B)、TCLP 100 目組(C-C)、TCLP 80 +100 目組(C-D)、模型組(C-E)及維酶素(C-F)Cyclin-D1 蛋白陽性表達Fig.3 Expression of Cyclin-D1 in control group (C-A)，TCLP-80 group(C-B)，TCLP-100 group (C-C)，TCLP-80 +100 group (C-D)，model group (C-E)and vitacoenzyme group (C-F)

表3 各組大鼠Cyclin-D1 蛋白表達的平均光密度比較()Table 3 Average optical density of Cyclin-D1 protein expression in each group ()

表3 各組大鼠Cyclin-D1 蛋白表達的平均光密度比較()Table 3 Average optical density of Cyclin-D1 protein expression in each group ()

注:各治療組與模型E 組比較，▲P＜0.01;與維霉素F 組比較，◆P＜0.05，■P＜0.01。Note:Compared with model，▲P＜0.01;Compared with vitacoenzyme，◆P＜0.05，■P＜0.01.

3.4 染色圖片

各個蛋白因子均表現為:正常對照A 組大鼠胃黏膜有少量陽性細胞染色，且染色最淺，維酶素F組和復方蜥蜴散B、C、D 各組大鼠胃黏膜部分細胞可見黃色、褐色程度不同的染色，與模型組比較染色較淺。模型E 組細胞染色最重。圖4 中HE 圖片顯示細胞不規則，核大深染，核漿比例失調，核分裂象增多，出現高級別異型增生的異常細胞。圖4 中Y-1 示正常細胞表現。

圖4 造膜后HE 染色圖片和陰性對照圖片Fig.4 HE staining images of model and negative control

4 討論

細胞增殖和凋亡是中醫陰陽學說在細胞分子水平上的體現。人體正常胃黏膜上皮組織更新較快，以細胞凋亡和增殖維持著細胞總數的平衡，若這一平衡失調，就有可能導致疾病的發生。從正常胃黏膜、輕度不典型增生、重度不典型增生、癌前病變、早期胃癌到進展期胃癌的發展過程中，細胞凋亡逐漸受抑制，細胞惡性增生逐漸顯現，胃黏膜病變細胞凋亡減少，生存期延長，細胞大量堆積。細胞增殖指數逐漸增大，凋亡指數逐漸減小，增殖指數/凋亡指數比值增大是衡量胃癌發生、浸潤及轉移的可靠指標。同時也顯現出抑制凋亡的基因表達增加，促進凋亡的基因表達受到抑制［3］。腫瘤是細胞增殖相對超過其凋亡造成的，凋亡發生及調控是細胞中多種分子之間相互作用的結果。

Wnt 信號通路由一系列癌基因和抑癌基因編碼的蛋白質組成，各種蛋白質之間彼此聯系、相互制約。經典的Wnt 通路貫穿于細胞生長、增殖、分化、凋亡及轉移的關鍵途徑，Wnt2、β-catenin、Cyclin-D1為Wnt/β-catenin 信號通路中重要的組成成分，它們在調節細胞增殖，抑制細胞分化及調控細胞周期中起重要作用［4］。Wnt 基因編碼的Wnt2 蛋白是啟動這一傳導通路的信號蛋白，它與細胞增殖分化關系最為密切，其異常啟動可產生致癌作用。β-catenin被認為是經典Wnt 通路中的關鍵蛋白及其在胞漿內主要的效應分子，對細胞增殖分化的調控作用在胚胎發育和腫瘤發生中已受到廣泛關注，在Wnt 信號通路中是正向調節因素。正常情況下，β-catenin通過與E-cadherin 形成復合物定位于細胞膜的胞漿面而介導細胞間的黏附;當細胞被Wnt 蛋白配體激活后，Wnt2 的表達上調能夠使胞漿內β-catenin 免受降解，穩定化，在胞漿內積聚，移位到核內，與T細胞因子結合，增強一些在正常細胞增殖中起重要作用的基因的轉錄，誘發癌變。β-catenin 是Wnt 信號傳導途徑中最為關鍵的調控子，其除了介導細胞粘附外還參與基因表達，當β-catenin 在細胞核內異常蓄積并活化基因時β-catenin 基因就成了癌基因。Wnt/β-catenin 信號通路的異常激活是人類腫瘤發生的重要機制之一，β-catenin 異常蓄積正是此通路激活的主要表現。β-catenin 介導的Wnt 信號轉導通路異常激活導致腫瘤發生是腫瘤早期事件。Cyclin-D1 是Wnt 通路下游的關鍵靶基因，是細胞周期蛋白家族中調控細胞周期G1 期的關鍵蛋白，生命個體細胞周期的關鍵是G1 期的啟動，而細胞周期調控異常與細胞癌變密切相關。Cyclin-D1 的主要功能是促進細胞增殖，其過度表達可致細胞增殖失控而惡性化，在多種腫瘤發生發展及浸潤轉移中扮演重要角色［5］，并且已被公認為是一種原癌基因。Wnt 通路致癌的關鍵是β-catenin 降解障礙致使胞漿內游離的β-catenin 聚集并與Tcf/Lef 結合進入細胞核，啟動下游靶基因Cyclin-D1 的轉錄，導致腫瘤的發生。

本研究顯示在胃癌前病變模型大鼠中，Wnt2、βcatenin、Cyclin-D1 存在著高表達，經過復方蜥蜴散治療后，能顯著降低Wnt2、β-catenin、Cyclin-D1 蛋白的陽性表達率，并且80 目與100 目不同微粒等量組合在各治療組中效果最好(P＜0.05)。Wnt2、βcatenin、Cyclin-D1 表達下降提示復方蜥蜴散可能通過抑制增殖基因的激活，控制和維持細胞的正常生長，阻斷胃癌前病變病變細胞的增殖，促進胃癌前病變病變細胞的凋亡，從而逆轉胃黏膜損傷的病理生化指標，修復胃黏膜損傷，防止胃癌前病變的發生及發展。

胃癌前病變的形成是一個長期慢性病變過程，脾胃虛弱是其病理演變的關鍵，脾胃本弱，加之調養失當，外邪侵襲等因素，導致中氣更虛，氣虛不足以行血，則血行遲緩，逐漸形成壅滯成瘀。因瘀血阻絡使得胃黏膜腺體血運障礙、營養匱乏，致各種毒素產物的聚集，因此導師立法益氣養陰、化瘀解毒，并根據胃癌前病變病程、療程均較長，中藥煎劑費時費力很不方便又不經濟，患者往往依從性差，《臨證指南醫案》中“慢性疾患，以湯劑蕩滌，速而不達，乃胃氣不受藥之故”，“積滯宜溫下者，以散劑徐攻，免傷胃氣”，“丸劑、膏劑緩圖，以保胃氣”。因此在胃癌前病變胃黏膜損傷的修復中，散劑的治療作用優于湯劑、丸劑，基于此種認識，導師組成復方蜥蜴散，而散劑中顆粒的大小是影響其作用關鍵因素，經臨床及實驗證實過80 目篩和過100 目篩的粗細不同顆粒的結合才是較好的治療藥物劑型。通過藥物顆粒大小的不同使中藥制劑口服后可以延長其藥效及作用于胃腸道的時間，加上采用糊劑給藥形式，使藥物能夠很好的粘附在胃黏膜上，形成保護膜，發揮修復及逆轉黏膜增生、腸化的作用。

本實驗研究結果表明，復方蜥蜴散中君藥蜥蜴具養精血、破結散瘀、行氣活血、清熱解毒，有抗癌作用，能明顯增強人體免疫功能，消除胃腸道癥狀，對胃腸道有特殊的親和力和靶向治療作用［6］;臣以黃芪補氣生血、托毒生肌、利水消腫;白術益氣健脾、燥濕利水，白芍補血斂陰、平肝止痛;三者合用益氣養陰，健脾利濕，既扶助正氣，又提高胃腸動力，促進胃排空，加速水濕瘀血等“毒性”物質的排出，減少刺激性物質損傷胃黏膜，邪祛而正不傷;丹參活血祛瘀生新，消癰排膿止痛，三七活血定痛、化瘀止血、消腫生肌，兩者合用可改善胃黏膜微循環，促進胃黏膜損傷的再生修復。佐以半枝蓮清熱解毒，利濕殺“蟲”;烏梅養陰柔肝止痛，健胃生酸助運化;鹿角霜補中益血、通利血脈;海螵蛸制酸止痛、收濕斂瘡。使以甘草調和諸藥的同時，既可增強半枝蓮清熱解毒之效，又助黃芪、白術補中益氣，還可增強白芍緩急止痛的功效。現代藥理學研究結果發現:從黃芪中提取的黃芪多糖可通過調節細胞免疫功能來增強IL-2/LAK 抗腫瘤作用，通過促進抗癌素的分泌、IL-2R 受體的表達、LAK 前體細胞的增生而達到抗腫瘤作用;白術對免疫系統的作用主要是抗炎、抗腫瘤、抗氧化，白術甲醇提取物能夠誘導人T 淋巴瘤Jurkat 細胞、U937 和HL-60 白血病細胞凋亡，而達到抗腫瘤的作用;從丹參中提取出的脂溶性有效成分丹參酮òA 具有抑制多種腫瘤細胞(白血病細胞、實體瘤細胞等)增殖，誘導細胞凋亡和/或分化的作用［7］;三七皂苷可通過直接抑制腫瘤細胞生長與轉移、誘導腫瘤細胞凋亡與分化、增強和刺激機體免疫功能等多重機制抗腫瘤。半枝蓮主要在增強機體免疫力、抑制腫瘤細胞增殖、誘導腫瘤細胞凋亡等方面發揮抗腫瘤作用［8］。諸藥合用益氣養血扶正，化瘀解毒祛邪，黏膜得養，毒瘀得散，腸化、增生得消，有效干預甚至逆轉癌前病變，避免癌癥的發生。且臨床療效確切、安全性好、毒副作用小、長期服用總有效率在90%以上，也證實了我們對其修復作用的判斷［9，10］。

1 Yuan HX(袁紅霞)，Liu CM(劉彩梅)，Liu QJ(劉清君)，et al.Discuss the construction method of gastric precancerous lesions in rat models.J China Modern Medicine(中國當代醫藥)，2009，16(19):9-10.

2 Xie JR(謝晶日)，Sun F(孫芳)，Liang GY(梁國英).Research progress of gastric precancerous lesions in animal models.J Chin Arch of TCM(中華中醫藥學刊)，2012，30:2377-2378.

3 Liu G(劉鋼)，Yuan YN(袁又能).Apoptosis relationship with the occurrence and development of gastric cancer.J of Chin Prac Diag and Ther(中華實用診斷與治療雜志)，2010，24:629-631

4 Deng YZ，Chen PP，WangY，et al.Connective tissue growth factor is overexpressed in esophageal squamous cell carcinoma and promotes tumorigenicity through B-catenin-T-cell factor/Lef signaling.J Biol Chem，2007，282:36571-36581.

5 Yasuyoshi Miyata，Takahisa Iwata，Kojiro Ohba，et al.Expression of matrix metalloproteinase-7 on cancer cells and tissue endothelial cells in renal cell carcinoma:prognostic implications and clinical significance for invasion and metastasis.J Clin Cancer Res，2006，12:6998-7003.

6 Zhu XJ(朱西杰)，Yang LX(楊利俠)，Liang Y(梁巖)，et al.Application of lizard to the treatment for pathological changes of gastric mucosa.Shanxi J TCM(山西中醫)，2003，19(2):48.

7 Li L(李力)，Yang YM(羊裔明)，Deng CQ(鄧承祺)，et al.The vitro studies of tanshinone IIA induced MR2 cell differentiation and apoptosis.Chin J Hematol(中華血液學雜志)，2003，24:45-46.

8 Niu GX(牛國曉)，Li J(李潔).Research progress on anticancer effect of scuteiiaria barbata and its mechanism.J Cancer Rese on Pre and Trea(腫瘤防治研究)，2012，39:231.

9 Liang Y(梁巖)，Yang LX(楊利俠)，Zhu XJ(朱西杰).The clinical observation of the repair function that the protect the stomach membrane medicine paste to the damaged gastric mucosa.Ningxia Med J(寧夏醫學雜志)，2003，25:106.

10 Li WQ(李衛強)，Wei XH(魏雪紅)，Zhu XJ(朱西杰).The different combination of compound lizards powder treatment precancerous lesions of gastric carcinoma combination with Yin collaterals and Winding stasis in 120 cases.Liaoning J TCM(遼寧中醫雜志)，2011，38:2224.