膜醭畢赤酵母與殼聚糖復合處理對柑橘果實防御酶及防御物質(zhì)的影響

彭 茹，張 璐，曾凱芳,2,*

（1.西南大學食品科學學院，重慶 400715；2.農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品貯藏保鮮質(zhì)量安全風險評估實驗室（重慶），重慶 400715）

膜醭畢赤酵母與殼聚糖復合處理對柑橘果實防御酶及防御物質(zhì)的影響

彭 茹1，張 璐1，曾凱芳1,2,*

（1.西南大學食品科學學院，重慶 400715；2.農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品貯藏保鮮質(zhì)量安全風險評估實驗室（重慶），重慶 400715）

研究膜醭畢赤酵母與殼聚糖復合處理對柑橘果實防御酶和防御物質(zhì)的影響。采用損傷接種與無損傷浸泡復合液兩種處理方式，分別研究經(jīng)復合處理后果實防御酶和防御物質(zhì)在7 d和28 d貯藏期內(nèi)的變化。結(jié)果顯示：與對照果實相比，復合液接種處理果實中的苯丙氨酸解氨酶（PAL）、過氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）、幾丁質(zhì)酶、β-1,3葡聚糖酶（GLU）等防御酶在貯藏期內(nèi)活性增加明顯，其中以PAL、POD、GLU 3 種防御酶最為明顯，在貯藏第3天時均達到最大值；復合液浸泡處理果實中的PAL、POD、幾丁質(zhì)酶活性和木質(zhì)素含量的增加較為明顯，在貯藏第14天時達到最大值。結(jié)果表明，膜醭畢赤酵母與殼聚糖復合處理能夠誘導柑橘果實中防御酶活性和防御物質(zhì)含量的升高，從而起到提高果實抗病性的效果。防御酶在果實貯藏前期發(fā)揮較關(guān)鍵的抗病作用，而酚類、木質(zhì)素等防御類物質(zhì)則在貯藏后期發(fā)揮抗病作用。

誘導抗病性；防御酶；防御物質(zhì)；柑橘果實

果蔬在受到外界物理因素、化學因素和生物因素等刺激后，啟動自身防御系統(tǒng)，產(chǎn)生相關(guān)防御酶和防御物質(zhì)以抵抗外界不利因素對自身的影響，這就是果蔬的誘導抗病性[1]。過氧化物酶（peroxidase，POD）是一類催化很多化學反應發(fā)生的氧化還原酶，能夠清除果蔬體內(nèi)的H2O2，減少過量的活性氧對果蔬造成的毒害作用，并且與抗性物質(zhì)木質(zhì)素的合成相關(guān)[2]。多酚氧化酶（polyphenoloxidase，PPO）能夠?qū)⒐咧械挠坞x酚類氧化為對病原菌毒害性更強的醌類物質(zhì)，增加對病原菌的抵抗性[3]。苯丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonialyase，PAL）是苯丙烷代謝途徑的第一步關(guān)鍵酶，它能夠調(diào)控相關(guān)抗性物質(zhì)的合成如木質(zhì)素、黃烷酮類化合物等[4]。果蔬病程相關(guān)蛋白酶（pathogenesisrelated protein，PRP）家族中的PRP-2、PRP-3分別具有β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-glucanase，GLU）和幾丁質(zhì)酶的活性，能夠單獨或者協(xié)同降解真菌細胞壁，從而對病害起到控制作用[5-6]。此類防御酶大多已存在于植物體內(nèi)，但經(jīng)過外界誘導后，在果蔬體內(nèi)能夠迅速上升并且積累到一定水平，以抵抗病原菌侵害。此外，果蔬受到刺激后還會產(chǎn)生低分子質(zhì)量的植保素和木質(zhì)素等防御物質(zhì)，具有一定的抗病性[2]。

膜醭畢赤酵母（Pichia membranefaciens）是一種生防酵母、最早從桃上分離，目前研究表明，其對桃[7]的軟腐病，柑橘[8]和蘋果[9]的青綠霉病有防治作用。除了對病原菌的直接作用外，拮抗酵母作為生物激發(fā)子，同時能誘導果實防御酶和防御物質(zhì)，特別是誘導POD、PAL、幾丁質(zhì)酶和GLU活性的增加[8,10-11]。殼聚糖對采后果蔬病害有控制作用，且殼聚糖具有成膜性，它還能誘導果實產(chǎn)生抗病性[12]。提高拮抗酵母菌的生防效力有多種方法，Ge Lingling等[13]添加0.5%殼聚糖到紅酵母培養(yǎng)基或者直接添加到草莓上，顯著促進了酵母和草莓的GLU合成，從而降低了草莓發(fā)病率。Yu Ting等[14]研究的結(jié)果表明，采用羅倫隱球酵母結(jié)合赤霉素能誘導梨體內(nèi)POD和PPO活性的增強。Zong Yuanyuan等[15]用42 ℃熱水結(jié)合拮抗酵母菌處理番茄，發(fā)現(xiàn)番茄灰霉病發(fā)病率顯著降低，果實中PAL、幾丁質(zhì)酶、GLU 3 種酶活性顯著增強。本實驗室已有研究證明，膜醭畢赤酵母結(jié)合水楊酸和殼聚糖皆有協(xié)同增效作用，對柑橘青綠霉病害控制作用加強。但膜醭畢赤酵母復合殼聚糖處理誘導柑橘果實防御酶活性方面卻鮮有報道，實驗以接種和浸泡酵母菌和殼聚糖復合液兩種方式，分別測定柑橘在7 d和28 d貯藏期內(nèi)防御酶活性和防御物質(zhì)的變化情況，探討酵母菌結(jié)合殼聚糖防治柑橘果實病害的機理。

1 材料與方法

1.1 材料、菌種與試劑

實驗所用柑橘為北碚447#錦橙（Citrus sinensis L. Osbeck cv. Jincheng 447#），果實采摘自重慶北碚縉云山。挑選大小均一、成熟度一致、沒有機械傷的果實。

膜醭畢赤酵母 中國普通微生物菌種保藏管理中心；殼聚糖 濟南海得貝海洋生物工程有限公司；愈創(chuàng)木酚、鄰苯二酚、30% H2O2（均為分析純） 成都科龍化工試劑廠；幾丁質(zhì)、L-苯丙氨酸、脫鹽蝸牛酶、昆布多糖、溴乙酰（均為分析純） 北京拜爾迪生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 膜醭畢赤酵母與殼聚糖復合液的制備

膜醭畢赤酵母的活化：從斜面培養(yǎng)基上接1 環(huán)于營養(yǎng)酵母葡萄糖固體-NYDA培養(yǎng)基（含酵母膏、牛肉膏、葡萄糖、瓊脂）上，28 ℃條件下振蕩培養(yǎng)48 h；從活化后的NYDA培養(yǎng)基上取3～4 環(huán)至為不含瓊脂的液體培養(yǎng)基（NYDB）培養(yǎng)基中，28 ℃搖床180 r/min振蕩培養(yǎng)24 h。于4 ℃條件下，3 000 r/min離心10 min，并用無菌水清洗2 次，血球板計數(shù)濃度109CFU/mL。

殼聚糖：脫乙酰度大于85%，黏度為30 cps，溶于0.1%乙酸，再用pH 5.0的乙酸-乙酸鈉緩沖液稀釋成質(zhì)量濃度為0.02 g/100 mL的殼聚糖。

復合液：用109CFU/mL酵母和0.02 g/100 mL殼聚糖等比例（1：1）混合，得到最終5×108CFU/mL酵母和0.01 g/100 mL殼聚糖復合液。

1.2.2 處理方法

1.2.2.1 打孔接種處理

參照Droby等[16]的方法，將果實用清水清洗后在2%次氯酸鈉中浸泡2 min，再用純水將次氯酸鈉清洗干凈，晾干。用70%酒精在赤道周圍擦拭1 圈，將提前用酒精擦拭消毒后的打孔器在果實赤道周圍打6 個孔，孔徑寬度為4 mm，深度為5 mm。分別注入30 μL復合液和無菌水（對照組）。放置2 h待處理液充分吸收，套袋裝框，于20℃條件下貯藏。每組取樣5 個果實。

1.2.2.2 浸泡處理

將果實用清水清洗后在2%次氯酸鈉中浸泡2 min，再用純水將次氯酸鈉清洗干凈，晾干。將果實放置于復合液和無菌水中浸泡2 min，自然風干，待處理液充分吸收2 h。套袋裝框，于20 ℃條件下貯藏。每組取樣5 個果實。

1.2.3 指標測定

1.2.3.1 PAL活性測定

PAL活性測定參考Assis等[17]的方法并做適當修改，以每小時每克柑橘果皮組織（鮮質(zhì)量）酶促反應體系290 nm波長處吸光度增加0.01為1 個PAL活性單位（U），以鮮質(zhì)量計。

1.2.3.2 POD活性和PPO活性測定

POD活性測定參照Srivastava等[18]的方法并做適當修改。以每分鐘吸光度變化1為一個酶活力單位（U）。PPO活性測定參考Zauberman等[19]的方法，以每分鐘吸光度變化1為一個酶活力單位（U）。

1.2.3.3 幾丁質(zhì)酶活性和GLU活性測定

酶提取液制備：稱取1.0 g柑橘果皮，加入4 mL200 mmol/L，pH 5.2的醋酸緩沖液。在冰浴條件下研磨勻漿，于4 ℃、12 000 r/min離心30 min，收集上清液用于幾丁質(zhì)酶和GLU活性測定。幾丁質(zhì)酶活性測定參考Boller等[20]方法并修改。以每秒鐘每克蛋白分解膠狀幾丁質(zhì)產(chǎn)生1×10-9mol Glc-NAc為一個酶活性單位（U）。重復3 次。GLU活性測定參考Abeles等[21]的方法并做修改，以每秒鐘每毫克蛋白分解昆布多糖產(chǎn)生1×10-9mol葡萄糖為1個酶活性單位（U）。

1.2.3.4 總酚含量測定

總酚含量的測定參照Pirie等[22]的方法，稱取2 g果皮與預冷的50 mL的1% HCl-甲醇溶液充分研磨，在4 ℃、12 000 r/min離心10 min，上清液上分光光度計比色，以A280nm/g為一個單位，以鮮質(zhì)量計。

1.2.3.5 木質(zhì)素含量測定

木質(zhì)素含量測定參照Morrison等[23]的方法，并作修改。以每克鮮質(zhì)量在280 nm波長處的吸光度表示木質(zhì)素含量。

1.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計及圖形分析

以上所有實驗均重復3 次，并用Excel 2003統(tǒng)計分析所有數(shù)據(jù)，計算標準誤并制圖；應用SPSS 11.5軟件對數(shù)據(jù)進行方差分析，利用鄧肯式多重比較對差異顯著性進行分析。P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 膜醭畢赤酵母與殼聚糖復合處理對柑橘果皮PAL活性的影響

圖1 膜醭畢赤酵母與殼聚糖接種處理（A）和浸泡處理（B）對柑橘果皮PAL活性的影響Fig.1 Effect of Pichia membranefaciens in combination with chitosan on PAL activities in citrus fruit peel inoculated (A) or dipped (B)

PAL是苯丙氨酸代謝途徑的關(guān)鍵酶，調(diào)控次生代謝產(chǎn)物類黃酮植保素和木質(zhì)素的合成，是植物重要的防御酶之一。如圖1所示，膜醭畢赤酵母復合殼聚糖接種處理和浸泡處理的柑橘果實PAL活性均高于對照組，且呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢；而對照組果實的PAL活性一直處于較低水平。膜醭畢赤酵母復合殼聚糖接種處理貯藏第3天和浸泡處理第14天，果實的PAL活性分別比對照組高7.6 倍和7.3 倍。

2.2 膜醭畢赤酵母與殼聚糖復合處理對柑橘果皮POD活性的影響

圖2 膜醭畢赤酵母與殼聚糖接種處理（A）和浸泡處理（B）對柑橘果皮POD活性的影響Fig.2 Effect of Pichia membranefaciens in combination with chitosan on POD activities in citrus fruit peel inoculated (A) or dipped (B)

如圖2A所示，柑橘果皮的POD活性經(jīng)酵母和殼聚糖復合液接種處理后第3天達到高峰，而對照組的POD活性上升趨勢較緩慢；如圖2B所示，浸泡處理的果實在28 d的貯藏期內(nèi)，膜醭畢赤酵母復合殼聚糖處理組和對照組果實的POD活性都呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，在貯藏7 d后復合處理組果實的POD活性一直顯著高于對照果實，在第14天達到高峰時，復合處理組的POD活性比對照組的高64.4%。

2.3 膜醭畢赤酵母與殼聚糖復合處理對柑橘果皮PPO活性的影響

PPO與植物防御體系密切相關(guān)，如圖3A所示，在7 d的貯藏期內(nèi)，膜醭畢赤酵母復合殼聚糖接種處理組與對照組的PPO活性均呈現(xiàn)上升的趨勢，但是復合處理果實的PPO活性顯著高于對照果實（P＜0.05），貯藏第3天時，復合處理組的PPO活性比對照組的高1.95 倍。如圖3B所示，膜醭畢赤酵母復合殼聚糖處理組果實的PPO呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢，而對照組果實的PPO活性在貯藏第14天以后開始下降，經(jīng)過膜醭畢赤酵母與殼聚糖復合液浸泡后的柑橘果實在貯藏后期PPO活性顯著高于對照果實。

圖3 膜醭畢赤酵母與殼聚糖接種處理（A）和浸泡處理（B）對柑橘果皮PPO活性的影響Fig.3 Effect of Pichia membranefaciens in combination with chitosan on PPO activities in citrus fruit peel inoculated (A) or dipped (B)

2.4 膜醭畢赤酵母與殼聚糖復合處理對柑橘果皮幾丁質(zhì)酶活性的影響

圖4 膜醭畢赤酵母與殼聚糖接種處理（A）和浸泡處理（B）對柑橘果皮幾丁質(zhì)酶活性的影響Fig.4 Effect of Pichia membranefaciens in combination with chitosan on CHI activities in citrus fruit peel inoculated (A) or dipped (B)

幾丁質(zhì)為一般真菌病原菌的細胞壁結(jié)構(gòu)成分之一，果實幾丁質(zhì)酶活性的升高對于病原菌的分解效力增加，因此，幾丁質(zhì)酶是衡量果實誘導抗病性的重要指標。膜醭畢赤酵母復合殼聚糖接種處理和浸泡處理對幾丁質(zhì)酶活性的影響如圖4所示，在貯藏期間，接種或者浸泡酵母和殼聚糖復合液后，果實的幾丁質(zhì)酶活性均顯著高于對照果實（P＜0.05）。如圖4A所示，膜醭畢赤酵母復合殼聚糖接種處理組果實的幾丁質(zhì)酶活性在貯藏第2天迅速上升至峰值，比對照組高97.8%。幾丁質(zhì)酶在貯藏第2天達到活性高峰點，隨后迅速降低，在貯藏前波動較大，可能是因為幾丁質(zhì)酶活性在誘導后幾天內(nèi)受到刺激迅速達到高峰，與對照相比將活性峰值提前，有利于柑橘前期抗病，之后隨著時間的延長而降低。這與Luo Yang等[8]在柑橘上和Pombo等[24]在草莓上處理有相似的結(jié)論。如圖4B所示，膜醭畢赤酵母復合殼聚糖浸泡處理組和對照組果實的幾丁質(zhì)酶活性皆在前7 d迅速上升，之后變化趨于平緩。在貯藏第7天時，復合處理果實的幾丁質(zhì)酶活性比對照高20%。

2.5 膜醭畢赤酵母與殼聚糖復合處理對柑橘果皮GLU活性的影響

膜醭畢赤酵母復合殼聚糖接種處理和浸泡處理后柑橘果實GLU活性的變化情況如圖5所示。復合液接種處理后果實的GLU活性在貯藏期間呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，在貯藏第3天時達到峰值，此時的GLU活性比對照組的高4.8 倍；而接種對照組果實的GLU活性一直處于較低的水平（圖5A所示）。復合液浸泡處理組果實的GLU活性在貯藏期間也呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，在貯藏第21天時達到峰值，此時的GLU活性比對照組的高15.6 倍；而浸泡對照組果實的GLU活性只是在貯藏后期略有升高。

圖5 膜醭畢赤酵母與殼聚糖接種處理（A）和浸泡處理（B）對柑橘果皮GLU活性的影響Fig.5 Effect of Pichia membranefaciens in combination with chitosan on GLU activities in citrus fruit peel inoculated (A) or dipped (B)

2.6 膜醭畢赤酵母與殼聚糖復合處理對柑橘果皮總酚含量的影響

果蔬體內(nèi)的酚類物質(zhì)是一類具有抑菌活性的低分子質(zhì)量的抗病化合物。實驗結(jié)果表明，與對照果實相比，經(jīng)過膜醭畢赤酵母復合殼聚糖接種處理和浸泡處理后，柑橘果實總酚含量在整個貯藏期間均有明顯的上升。如圖6A所示，膜醭畢赤酵母復合殼聚糖接種處理果實的總酚含量在貯藏期間處于緩慢波動上升的趨勢，到第7天時上升到最大值，比對照高79.2%。總酚的合成受到PAL的調(diào)控，總酚亦能在PPO的作用下生成醌類物質(zhì)，因此，貯藏期間PAL和PPO的合成情況影響著總酚的含量，但總體仍是處于上升的趨勢，Luo Yang等[8]在柑橘上得到類似的結(jié)論。如圖6B所示，膜醭畢赤酵母復合殼聚糖浸泡處理和浸泡對照果實的總酚含量在整個貯藏期間均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，在第14天達到最大值，此時復合處理果實的總酚含量比對照果實的高47.3%。

圖6 膜醭畢赤酵母與殼聚糖接種處理（A）和浸泡處理（B）對柑橘果皮總酚含量的影響Fig.6 Effect of Pichia membranefaciens in combination with chitosan on total phenolic content in citrus fruit peel inoculated (A) or dipped (B)

2.7 膜醭畢赤酵母與殼聚糖復合處理對柑橘果皮木質(zhì)素含量的影響

如圖7A所示，膜醭畢赤酵母復合殼聚糖接種處理能夠誘導貯藏期間柑橘果實木質(zhì)素的生成，處理組果實的木質(zhì)素含量呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢，貯藏第7天時比第0天增加63%；接種對照組果實的木質(zhì)素含量呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，在第3天出現(xiàn)峰值，后迅速降低，在第7天對照組木質(zhì)素含量下降至比處理組低13%。如圖7B所示，膜醭畢赤酵母復合殼聚糖浸泡處理果實的木質(zhì)素含量在貯藏14 d出現(xiàn)峰值，比對照組高1.23 倍，對照組的木質(zhì)素含量一直處于較低水平。木質(zhì)素的合成受到PAL等關(guān)鍵代謝酶的調(diào)控，在后期PAL含量降低，導致木質(zhì)素含量降低，但也有研究[25]認為，木質(zhì)素的含量可能有兩個高峰期，這可能與木質(zhì)素合成代謝中間產(chǎn)物香豆酸、阿魏酸參與木質(zhì)素合成的階段不同有關(guān)。

圖7 膜醭畢赤酵母與殼聚糖接種處理（A）和浸泡處理（B）對柑橘果皮木質(zhì)素含量的影響Fig.7 Effect of Pichia membranefaciens in combination with chitosan on lignin content in citrus fruit peel inoculated (A) or dipped (B)

3 討論與結(jié)論

本實驗中，復合液損傷接種和浸泡膜醭畢赤酵母的柑橘果實在貯藏期內(nèi)，PAL、POD、幾丁質(zhì)酶、GLU等防御酶活性及總酚等防御物質(zhì)都比對照有顯著性差異，說明防御系統(tǒng)在柑橘貯藏期發(fā)揮了誘導抗病作用。PAL是類黃酮植保素、木質(zhì)素及多種次生酚類抗病物質(zhì)代謝途徑的關(guān)鍵酶，作為植物抗病性的生化指標，在植物抗逆性、抵御病蟲害等方面有重要的作用[5,24]。本實驗中復合液接種柑橘果實PAL活性在前3 d達到峰值，后迅速降低，呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，此結(jié)果與大多數(shù)研究相似[8,26]，Zong Yuanyuan等[15]用Pichia membranefaciens結(jié)合熱水處理番茄后果實PAL活性在前幾天內(nèi)出現(xiàn)兩個峰值，前期PAL的活性升高能夠誘導植保素、木質(zhì)素等抗性物質(zhì)的升高。POD能夠清除活性氧，同時參與木質(zhì)素的合成，本實驗發(fā)現(xiàn)POD在7 d接種誘導中有一個峰值，清除活性氧能力增強，增加抗病性[27]，在貯藏后期浸泡處理組也保持較高的水平以誘導木質(zhì)素的合成；幾丁質(zhì)酶和GLU具有協(xié)同抗性作用[8]。實驗中，兩者活性在貯藏前期有明顯升高趨勢，以發(fā)揮抗病作用，后期下降，這與大多人的研究都相似[28-29]。復合液接種處理后，防御酶變化迅速且明顯，但抗性物質(zhì)總酚和木質(zhì)素的含量在前期貯藏期中并沒有快速達到峰值，但可以看出兩者呈上升趨勢，這可能與抗性物質(zhì)自身的合成速度有關(guān)，因為次生代謝產(chǎn)物在植物體內(nèi)的積累是一個緩慢的過程[30]。復合液浸泡處理的果實在貯藏期間，PAL、POD、GLU活性的升高及木質(zhì)素含量的增加表現(xiàn)明顯，貯藏期14 d時，復合液浸泡處理果實的木質(zhì)素含量開始增加。木質(zhì)素是復雜的苯丙烷單體聚合物，它的合成是經(jīng)過苯丙酸途徑進行，由苯丙氨酸脫氨開始經(jīng)過一系列羧基化、甲基化與還原反應等形成幾種聚合物單體[25]。因此，木質(zhì)素含量增加是需要一定合成積累時間，此類聚合物單體相互聚合形成網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)可以加強果實細胞壁壘，阻礙外界病原菌的侵入，但木質(zhì)素含量過高則造成果皮木質(zhì)化，降低果實商品性[31]。復合液浸泡處理果實的總酚含量在貯藏前14 d有明顯的升高，隨后降低，這可能是總酚在后期被PPO氧化成醌類物質(zhì)，發(fā)揮抗病作用[8]。由此可見，防御酶和防御物質(zhì)在果實抗病的不同階段發(fā)揮作用，PAL、POD、幾丁質(zhì)酶和GLU活性能夠迅速對外界刺激做出反應，在果實貯藏前期發(fā)揮較關(guān)鍵的抗病作用，這是因為信號物質(zhì)將激發(fā)子的刺激傳遞至下游靶酶，并激發(fā)相關(guān)防御酶基因表達，以合成大量防御酶；而酚類、木質(zhì)素等防御類物質(zhì)則在后期才逐漸合成，主要在貯藏后期發(fā)揮抗病性。

實驗得出以下結(jié)論，膜醭畢赤酵母與殼聚糖復合處理能夠誘導柑橘果實中防御酶活性和防御物質(zhì)含量的升高，從而起到提高果實抗病性的效果。防御酶在果實貯藏前期發(fā)揮較關(guān)鍵的抗病作用，而酚類、木質(zhì)素等防御類物質(zhì)則在貯藏后期發(fā)揮抗病作用。

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Effects of Pichia membranefaciens Combined with Chitosan on Defensive Enzymes and Substances in Citrus Fruits

PENG Ru1, ZHANG Lu1, ZENG Kai-fang1,2,*
(1. College of Food Science, Southwest University, Chongqing 400715, China; 2. Laboratory of Quality and Safety Risk Assessment for Agro-products on Storage and Preservation (Chongqing), Ministry of Agriculture, Chongqing 400715, China)

The aim of this study was to investigate how combined treatment with Pichia membranefaciens and chitosan could affect defensive enzymes and substances in citrus fruits. The changes of defensive enzymes and substances during 7 and 28 days of storage were examined by inoculating or dipping citrus fruits with Pichia membranefaciens combined with chitosan respectively. The results were reported as follows: compared with the control group, the activities of the defensive enzymes phenylalanine ammonialyase (PAL), peroxidase (POD), polyphenoloxidase (PPO), chitinase, and β-1,3 glucanase in citrus fruits inoculated with Pichia membranefaciens in combination with chitosan were increased significantly during storage. PAL, POD, and β-1,3 glucanase were most evidently increased and reached the maximum on day 3. On the other hand, the activities of PAL, POD and chitinase and lignin content were increased significantly and reached the maximum on day 14 in citrus fruits dipped with Pichia membranefaciens in combination with chitosan. In conclusion, disease resistance in citrus fruits can be enhanced by Pichia membranefaciens combined with chitosan through inducing an increase in defensive enzymes and substances such as phenolics and lignin. Defensive enzymes and substances play a major role in disease resistance in the early and late stages of storage, respectively.

induced defense responses; defensive enzymes; defensive substances; citrus fruit

S609.3；S667.7

A

1002-6630（2014）10-0212-06

10.7506/spkx1002-6630-201410040

2013-10-21

國家自然科學基金面上項目（31271958）；重慶市科技攻關(guān)（應用技術(shù)研發(fā)類/重點）項目（cstc2012gg-yyjsB80003）；教育部留學回國人員科研啟動經(jīng)費項目（45批）

彭茹（1990—），女，碩士研究生，研究方向為食品科學。E-mail：pengru900715@163.com

*通信作者：曾凱芳（1972—），女，教授，博士，研究方向為農(nóng)產(chǎn)品加工與貯藏工程。E-mail：zengkaifang@163.com