中醫動物模型建立的研究進展及思路

旺建偉，葉虹玉，胥風華，趙雪瑩

(1.黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040;2.黑龍江省中醫藥基礎重點實驗室，黑龍江 哈爾濱 150040)

中醫動物模型是根據中醫病因病機理論，利用特定的致病因素，在動物身上復制出與人類疾病癥狀和病理改變相同或相似的證候［1］。中醫動物模型發展于上世紀60年代，最初建立的是陽虛模型，隨后逐步建立起了腎虛、脾虛、血瘀等一系列可復制的動物模型。而在此之前就有人對中藥的藥理作用進行過動物實驗，如上世紀20年代陳克恢與Schmidt、Read等人就用動物實驗證明了當歸粗制浸膏對實驗動物子宮、小腸、動脈血管等平滑肌具有興奮作用。當時的實驗研究僅僅借助西方醫學來證明中藥對實驗動物可產生某些藥理作用并未形成完整的可復制的中醫動物模型。而中醫學者對模型的研究古已有之，早在唐·陳藏器《本草拾遺》中便有記載:“黍米及糯，飼小貓、犬，令腳屈伸不能行，緩人筋故也?！边@種模型中醫稱之為實體模型。由此可見，古代醫家已對動物模型有所建樹，并且根據動物表現來判斷藥物的功效作用進而推廣應用于患者。然而，要說中醫最早的模型并不是這些實體模型，而是中醫特有的理論體系即中醫理論模型，是古代醫家對高等動物(人)所進行的解剖觀察、臨床實踐后總結并制定出來的多種規范。其中包括中醫先哲們所建立起來的“四時五臟陰陽”系統、經絡、精氣血津液等生理模型，六淫、七情、飲食、勞倦等病因模型，“治病求本”的治療模型等［2］。這些理論模型集結了中醫學者智慧結晶，為中醫幾千年的發展提供了理論依據和客觀指導，同時為后期中醫實體模型奠定了理論基礎。

由此看來，從古至今，無論是中醫理論模型、實體模型、借鑒西方醫學的動物模型，以及60年代后期所建立的可復制的中醫動物模型，在中醫藥的發展史上都起到了至關重要的作用。就現代中醫藥的發展而言，中醫動物模型的研究有助于提高臨床療效，促進中醫學的學術發展;對中醫臨床理論的形成、發展、診療水平的不斷提高起著重要作用;更是實現中醫藥現代化的重要依附條件。

1 中醫動物模型的分類

中醫模型的發展已有2000年之久，而中醫動物模型的發展只有50余年。自從上世紀60年代開始研制出以中醫“陽虛證”為主的動物模型以來，中醫證候動物模型的發展已經取得了很大的成就。目前國內外有關的中醫動物模型已經有上百種之多，其中包括八綱、臟腑、氣血、津液、六經、衛氣營血等多種辨證［3］。隨著時代的進步、科學技術水平的不斷發展，中醫動物模型也不斷進行著改變，從最初的腎虛、脾虛、血虛證等單純的證候模型研究發展到現在證候與疾病相結合的模型研究。中醫動物模型大體上可分為三類［4］:疾病動物模型;證候動物模型;病證結合動物模型。

1.1 疾病動物模型

疾病動物模型是利用不同的致病因素來復制出符合西醫或中醫疾病的動物模型。這種模型多借鑒現代醫學動物模型進行研究，如給小鼠腹腔注射致敏原，再進行霧化最終導致小鼠哮喘的疾病動物模型［5］。哮喘模型成立后再用中藥進行糾正癥狀。也有人不承認這種模型屬于中醫動物模型，因其使用的造模藥物為西藥，造模方法為現代醫學動物模型的造模方法，因此不應該稱這種模型為中醫動物模型［6］。但是也有學者對這類問題做出解釋，雖然所用造模藥物為西藥，但其建立的模型表現為哮喘，與中醫學所說哮喘病證候相吻合，那么就可以認為這個模型屬于中醫動物模型。這種模型具有較好的確認性，實驗結果可信，實驗指標明確可靠。并且這種動物模型較容易被國際醫學界所認同。但其缺點是容易脫離中醫理論，與中醫所認為的治病因素有所差異，而且單純的用現代醫學的病因病理來反應中醫證候，對于模型的評價和辨證診斷都帶來了困難。疾病動物模型的應用還是比較廣泛的，因其治病因素比較單一，容易建立模型，為中醫藥的發展做出了不可磨滅的貢獻。

1.2 證候動物模型

中醫認為證候是疾病發展狀況的某一階段的體現，可以了解疾病的部位、正氣與病氣的盛衰、疾病的性質、病機的變化等，是臨床進行診斷疾病和判斷診治效果的依據。因此，證候的研究對中醫的發展有其重要意義。證候動物模型最初是把疾病所體現在某一時期的證候表現形式收集起來，利用不同的方法手段來建立符合中醫證候特點的動物模型。如電針刺激家兔引起驚、恐、怒，造成“氣滯血瘀”動物模型。這種證候動物模型能夠遵循中醫理論，結合證候自身發展規律，體現中醫辨證施治的理念，因此廣泛被醫學工作者所使用。但是，證候動物模型同樣存在著諸多問題:這種模型缺少對模型動物的嚴謹、系統的診斷，例如舌診脈象很難判斷;觀察指標很難定量;容易出現同病異證，異病同證，模型證屬性判斷模糊等。證候動物模型雖然存在一些問題，但是證候動物模型是中醫動物模型研究的一個特色，體現了中醫學證候理論的特點，因此，中醫證候動物模要發揚其特色不斷的進行完善。

1.3 病證結合動物模型

在中醫的診斷中，疾病和證候并不完全是單一存在的，所以簡單的復制疾病動物模型或證候動物模型并不能滿足中醫動物模型的研究需要，近年來受到醫學界比較認可和推崇的是病證結合動物模型。所謂的病證結合動物模型，是指在中醫藥理論的指導下，適當結合現代醫學理論與實驗動物科學知識，分別(或同時)采用傳統中醫學病因復制證候動物模型和采用現代醫學病因復制疾病動物模型，使動物模型同時具備疾病和證候的特征［7］。如楊禮騰等［8］給大鼠器官注射博萊霉素復制肺纖維化模型，并在此基礎上灌注腺嘌呤建立腎陽虛肺纖維化模型。病證結合動物模型的建立更好的體現了疾病的特點，根據疾病的發病原理、致病因素建立模型，可以更好的選擇模型的病理監測指標，同時模型具有中醫的證候表現，符合中醫的理論，從證候的變化來判斷疾病發展的不同時期，能夠更好的了解疾病的發展規律，與中醫臨床診斷相結合，更好為中醫臨床實踐提供服務［9］。雖然病證結合動物模型與原型有著較好的相似性，但不表示可以完全替代原型，其仍然有許多問題值得商榷。因為病證結合模型需要有疾病和證候的多種表現，因此在操作上相對麻煩，而且諸多條件難以控制。證候模型本身就很難具有準確的辨證診斷性，因此病證結合動物模型的辨證診斷也是模糊不清的。病證結合動物模型仍然需要克服諸多困難才能取得更大的進步。

除了上述三種分類方法外，還有學者將中醫動物模型歸納以下四類:單純的中醫“證”動物模型;病證結合動物模型;狀態反應性動物模型;自然病態性動物模型［10］。其分類大體上與上述分類差不多，值得一提的是自然病態性動物模型，即自發性疾病動物模型，這種動物模型具有較好的與人類疾病的相似性，不需要人為的外界干預，具有很好的可控性和簡單易行性，是國際上公認的最理想的動物模型。如姚建平等［11］用自然衰老的SD雄性大鼠(24月齡)為腎虛衰老模型，研究右歸丸對自然衰老大鼠海馬5－HT、NE含量與HPA軸活性作用。此外，還有基因鼠模型、如風濕性關節炎模型中所用的基因鼠、C57BL/6x NOD遺傳背景的KRN T細胞受體轉基因(K/BxN)小鼠臨床上可以自發地發展為關節炎，可直接作為關節炎動物模型［12－13］。

2 中醫動物模型的研究思路

2.1 運用中醫整體觀念及辨證論治理論復制中醫動物模型

中醫講究人體本身的統一性和完整性以及人與自然的相互關系。人體是有機的整體，各組織結構在功能上相互協調、相互作用，在病理上相互影響，因此復制中醫動物模型應以整體觀念為主導，從臟腑病變著手［14］。同時辨證論治是中醫獨有的醫學體系，也是中醫對待疾病的一種特殊認識與處理方法。根據證候表現復制動物模型，進而分析模型動物的組織、器官、系統的生理及病理變化規律，最終以揭示中醫證的實質，為辨證論治提供實驗依據。依據辨證論治來進行模型的復制也是區別于中醫動物模型和西藥動物模型的標志。如肺氣虛模型既有咳嗽、痰飲等呼吸系統的病變，又有神疲乏力、肌體消瘦、神情倦怠、體溫下降等神經、內分泌系統及物質代謝系統的癥狀。慢性胃炎肝郁證既有食少、便稀等消化系統病變，又有神疲乏力、肌體消瘦、神情倦怠、體溫下降等神經、內分泌系統及物質代謝系統的癥狀，同時伴有質量增長遲緩，皮毛蓬松、枯黃，目暗、瞇眼，溜邊、扎堆等［15］。

2.2 運用中醫病因病機理論復制中醫動物模型

導致疾病發生的原因是多種多樣的，中醫認為六淫、七情內傷、飲食不節、勞倦過度及外傷等都可以引起不同的疾病，因此疾病的病變機理也是復雜多樣的，但是復雜的同時也存在著一般性的規律［14］。在建立中醫動物模型的時候要注重中醫臨床表現，運用中醫病因病機理論，更加準確的掌握治病因素的特點和性質。在選擇造模方法的時候要考慮中醫的發病學原理，使造模因素和中醫病因相符合。例如:孫廣仁等根據“肺氣虛弱，寒邪犯肺”的理論，將大鼠進行煙熏和寒冷等刺激從而建立慢性阻塞性肺疾病(COPD)寒飲蘊肺證大鼠模型［16］。

2.3 模型癥狀符合中醫臨床

當建立中醫動物模型時要考慮所復制出來的模型是否符合中醫臨床。研究中醫動物模型是為了更好地了解中醫臨床疾病的本質，進而預防和治療疾病。如果建立的動物模型所表現出來的癥狀與臨床病證不符，那復制的模型就沒有任何意義。但是影響人類身體健康的治病因素十分復雜并不是單一的，要遠遠的超出實驗室的造模因素，導致疾病的臨床癥狀表現也是繁多的，要在實驗室中將所有癥狀都表現出來也是不現實的，要抓住主要的癥狀來復制模型［6］。如脾虛濕熱大鼠模型［17］，大鼠出現體質量增長緩慢，大便不成形或稀便，毛發疏松粗糙，精神萎靡，嗜睡懶動，與臨床脾虛濕熱證表現食少，腹脹，便溏不爽，身體困重大體上相似，但也有模型不易表達的癥狀如舌紅胖，苔黃滑，脈滑數等癥狀。

2.4 模型要建立客觀指標，同時具有重復性

在復制中醫動物模型的同時要建立有關中醫證候的實驗室檢查指標。要科學、準確的用微觀、量化的客觀指標來表示中醫臨床癥狀，是確保中醫動物模型成立的關鍵之一。因此在確定指標的時候要選擇相關性和特異性較強的客觀指標。同時復制的中醫動物模型要具有重復性，即在相同的實驗條件下能夠完全重復，否則所建立的模型也沒有意義，也不會得到認可。

2.5 模型要用相應藥物進行反證

要確保所建立的模型是否成功需要用相應的藥物進行治療，如果有效說明模型成功，反之很難說明模型成立。例如，脾虛證動物模型可以用四君子湯、補中益氣湯等健脾理氣方藥反證。同時，選擇反證的方藥應是公認的能糾正模型動物的病態，最好選擇經典方藥。但也有人提出應用非適應證的方藥證進行治療顯示無效才能證明模型成立。大部分學者認為無需如此，因為中藥的成分是復雜的，臨床上會出現這樣的情況:由于醫生辨證錯誤而導致患者誤食非自身疾病癥狀的方藥卻發現病情有所減輕［7］。這是由于中藥的成分十分復雜，且具有多重藥效，有時也會發生我們無法預計的藥效。另外，治療脾虛證的藥物同時可能也會減輕陽虛的癥狀。因此用非適應證的方藥進行治療是不必要的。另外，還應注意人和動物之間的差異性，明·俞弁《續醫說》中曰:“人食礬石而死，蠶食之而不饑;魚食巴豆而死，鼠食之而肥，類不可必推。”

3 中醫動物模型的造模方法

中醫動物模型的實驗研究歷經五十多年的發展已經逐步趨于規范化、客觀化、科學化，其所研制出的證型也有百余種之多，其造模方法也是種類繁多。有學者將中醫動物模型的造模方法大體上歸納為以下三類:

3.1 模擬中醫傳統病因建立動物模型

這類模型是根據中醫的傳統理論對病因的經典認識來建立的，往往與現代醫學對疾病的病因認識有所區別，其造模方法可分為以下兩種。

3.1.1 單因素造模法

根據中醫對疾病的致病因素的認識來確定一個導致疾病發生的因素來進行造模，如中醫認為“恐傷腎”，采用貓嚇鼠、人嚇貓、爆竹嚇狗等方法建立腎虛模型;用附子、干姜、肉桂等熱性藥來建立“熱證”模型或用黃連等苦寒藥物來塑造“寒證”模型;根據中醫耗氣破氣理論給大鼠喂食中藥(大黃、厚樸、枳實)從而建立大鼠脾氣虛模型［14］。這些均屬于單因素造模方法，其特點是造模方法簡單，條件單一便于控制，但同時所復制出來的證并不能完全反映臨床疾病的所有特點，因此模型較為片面，比較模糊。

3.1.2 復合因素造模法

根據中醫對疾病的致病因素的多重認識來確定多個致病因素進行模型的復制，如中醫認為“勞倦過度、房勞不節”可致腎陽虛。張丹等［18］就運用此病因讓小鼠每日游泳至無力下沉以誘導其勞倦過度，并且每日讓其與動情雌鼠同籠誘導其房室不節。這些造模方法均屬于復合因素造模法，其特點是比單一因素造模更接近中醫臨床表現，有利于探討中醫藥的療效和機理，但是此種方法仍然存在缺陷，因其病因不同其病理變化也可能存在差異性，其治病因素越多復制起來越麻煩，模型的代表性和穩定性越弱。

3.2 采用西醫病因病理復制動物模型

這類模型是根據現代醫學對疾病的認識采用特定的化學、生物、物理機械的方法復制出符合中醫或西醫疾病的動物模型。此方法比較注重動物組織、器官或全身的病理損害。其治病因素主要有以下幾個方面。

化學因素刺激:曾代文等［19］給大鼠注射鹽酸普羅帕酮從而建立大鼠急性心衰心陽虛衰證動物模型。生物因素刺激:楊宇飛等［20］給大鼠腹腔注射促紅細胞生成素(Epo)造成繼發性紅細胞增多癥動物模型，該模型既符合繼發性紅細胞增多癥疾病模型，又符合中醫血瘀證模型。物理、機械因素刺激:王勇等［21］采用冠狀動脈前降支放置Ameroid縮窄環制備中華小型豬慢性心肌缺血氣虛血瘀證動物模型。李氏等［22］采用幽門結扎法復制大鼠胃潰瘍模型。就以上模型而言，其模型多借鑒現代醫學動物模型，造模方法比較成熟，實驗結果可靠，重復性較好。但其治病因素多采用現代醫學思路來判斷，缺乏中醫的辯證論治的思想，不利于中醫證本質的研究。

3.3 采用中西醫結合病因學說塑造動物模型

這類模型是既運用了中醫的發病學說，又考慮了西醫的致病原理，將兩種不同醫學體系相結合起來，既體現出了中醫證候的特點又有西醫病理變化的特點。與此同時，將西醫的疾病加以中醫證候的描述，用中醫中藥的方法來診斷治療疾病。如李敬林等［23］給予SD大鼠高脂飼料并且注射STE從而建立2型糖尿病模型。這類模型既有中醫證候的表現又有西醫疾病的特點，將中西醫有機的結合起來，能夠更好的認識疾病從而根本上對疾病進行預防和治療。

4 中醫動物型的評價與展望

中醫動物模型因其具有中醫理論特色，因此其評價也具有特殊性，可以分為中醫一般狀態評價和借助西醫方法學進行評價。在以往的研究中，有人將中醫證候表現作為一般評價，也有人精心將實驗動物的“四診”表征記錄下來從而來進行客觀的定量分析。在前人努力的基礎上現在已經建立了大鼠、小鼠四診(問診、望診、聞診、切診)的工作站，初步實現了小鼠診法的標準化、客觀化、定量化［24］。與此同時，中醫動物模型還通過“以藥測證”的方法來評價模型。如盧芳等［25］以2，4－二硝基苯酚誘導的熱病證候為切入點，利用寒性藥物和溫性藥物對比干預的實驗研究，探討動物模型的評價方法。借助西醫的方法主要有組織形態學、生化指標、血液流變學等指標來評價模型。現在也有人采用代謝組學原理對模型動物的尿液、血液、等組織液進行研究從而研究代謝物與證候的相關性［26］。隨著科學技術的不斷發展，中醫動物模型的評價趨于標準化、客觀化、規范化。中醫動物模型研究的發展也越來越快，更多的病證結合動物模型在不斷的完善，為中醫方－證－病深入研究創立了堅實基礎。

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