龍膽瀉肝丸的薄層色譜鑒別方法改進分析

吳海燕

（吉林省遼源市東遼縣人民醫院,吉林 遼源 136200）

龍膽瀉肝丸的薄層色譜鑒別方法改進分析

吳海燕

（吉林省遼源市東遼縣人民醫院,吉林 遼源 136200）

目的對龍膽瀉肝丸的薄層色譜鑒別方法的改進進行分析探討，為今后的研究工作提供可靠的參考依據。方法采用醇提法對樣品進行處理，經10%硫酸乙醇進行顯色，在365nm波長下進行檢視，同時對梔子、龍膽、地黃、甘草展開薄層色譜鑒別；采取出提法處理樣品，在254nm波長下進行檢視，對柴胡、當歸進行薄層色譜鑒別。結果改進的方法具有操作簡單、斑點完全分離、顯示清晰等優勢。結論上述改進方式相對于《中國藥典（一部）》2010年版中所示方法更加適合龍膽瀉肝丸的薄層色譜鑒別，值得關注并推廣。

龍膽瀉肝丸；薄層色譜鑒別；改進；《中國藥典（一部）》2010年版

在中醫古方《醫方集解》中早有記載龍膽瀉肝湯,其方劑組成為:龍膽、柴胡、梔子、黃岑、炙甘草等10味藥材,對肝膽實火、三焦濕熱具有良好的治療效果,臨床應用十分廣泛,臨床療效顯著,目前臨床應用的劑型較多,以丸劑最為常見。在《中國藥典（一部）》[1]2010年版中龍膽瀉肝丸薄層鑒別的前處理相對復雜繁瑣,在日?？焖俦O督檢驗中不適合,本次研究中對龍膽瀉肝丸的薄層色譜鑒別方法進行了改進,現匯報結果如下。

1 儀器與試藥

1.1 實驗儀器

本次實驗中所需儀器包括:Reprostar 3型薄層數碼成像系統,940型TLC紫外燈箱,TLC pLate HeaterⅢ薄層加熱板；F80 型高速萬能粉碎機；XT型電子天平；KQ2200B型超聲清洗儀器；HH-6型恒溫水浴鍋、GF254薄層板等。

1.2 實驗試藥

三個不同常見龍膽瀉肝丸、龍膽苦苷對照品、梔子苷對照品、梓醇對照品、柴胡皂苷d、甘草對照藥材、當歸對照藥材,均購自中國藥品生物制品檢定所；所需試劑和試藥均為分析純。

2 方法與結果

2.1 龍膽、梔子、甘草、地黃的薄層鑒別

取3個不同常見的龍膽瀉肝丸樣品各10 g,研細后加入40 mL石油醚,在60～90 ℃條件下超聲處理20 min,靜置晾涼后過濾,在藥渣中加入30 mL甲醇超聲處理30 min,靜置晾涼后過濾,將濾液濃縮至1 mL作為供試品；按照同樣方法自制陰性對照品溶液；取梓醇對照品精密稱定后加入甲醇,制成每1 mL溶液含有0.5 mg的溶液作為對照品溶液；取梔子苷對照品精密稱定,加甲醇制成每1 mL溶液含有0.5 mg的溶液作為對照品溶液；取龍膽苦苷對照品精密稱定,加入甲醇制成每1 mL溶液含有0.5 mg的溶液作為對照品溶液；取甘草對照藥材粉末0.5 g,加入5 mL的甲醇后超聲處理10 min,取濾液作為對照藥材溶液,以薄層色譜法[2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB][2]試驗為依據,吸取上述所制溶液各10 μL,分別點于同一硅膠GF254薄層板上,展開劑為乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶5∶1∶0.3）為展開劑,展開,取出,晾干,以10%硫酸乙醇作為顯色劑,在105 ℃加熱至斑點顯色清晰,在紫外光燈（365 nm）下觀察。結果發現,上述所制的供試品溶液色譜中,在梔子苷對照品、梓醇對照品、甘草對照藥材、龍膽苦苷對照品色譜相應位置出現相同顏色的斑點。

2.2 柴胡、當歸的薄層色譜鑒別

取3個常見的龍膽瀉肝丸樣品,研細后精密稱定5 g,加入30 mL甲醇后超聲處理30 min,靜置晾涼后過濾,濾液濃縮至1 mL后作為供試品溶液,按照同樣方法自制陰性對照品溶液；取柴胡皂苷d對照品,精密稱定后加入甲醇,制成每1 mL含0.5 mg的對照品溶液；取當歸對照藥材粉末,精密稱定0.5 g,加入5 mL甲醇超聲處理10 min后靜置晾涼后過濾,取濾液作為對照藥材溶液。以薄層色譜法[2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB]試驗為依據,吸取上述所制溶液各10 μL,分別點于同一硅膠GF254薄層板上,展開劑為氯仿-甲醇（8.5∶1.5）,展開,取出,晾干,在紫外光燈（254 nm）下觀察。結果觀察到:供試品溶液色譜中,與柴胡皂苷d對照品溶液色譜和當歸對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點。

3 討 論

近幾年中醫藥領域的發展十分迅速,使得中藥現代研究逐漸熱門化。目前對中藥有效成分的研究不斷深入,紫外分光光度法、高效液相色譜法、薄層色譜法等技術在中藥研究工作中發揮了重要作用,得到了廣泛的應用[3]。由于受到高效液相色譜法的啟示,通過對已有文獻報道薄層色譜法的篩選,對同時分離、鑒別多種中藥有效成分的薄層色譜法進行尋找可謂一次新型和有意義的常識,使得薄層色譜法對相似化合物同時進行鑒別的研究更加深入。本次實驗中是對全信息薄層鑒別理論付諸實踐的一種新的常識,全信息薄層鑒別理論期望可以使薄層板的多層次、多成分分離檢出性能得以充分發揮[4]。在對硅膠GF254薄層板進行展開后,首先在365 nm紫外光燈下對具熒光的成分進行觀察,而后放置在254 nm紫外光燈下對熒光熄滅作用的成分進行觀察,最后放置在日光下對各種帶顏色的成分進行觀察,通過增熒光處理后,再次放置在365 nm紫外光燈下對增熒光的成分或者是254 nm紫外光燈下的熒光熄滅成分進行觀察,最后與顯色劑反應顯色后,再次在365 nm紫外光燈下觀察反應后呈現熒光的成分,日光下對反應顯色后的各種顏色成分進行觀察[6]。該方法可以采用1塊薄層板展開1次,盡管性質不同的化學成分會存在重疊現象,但是其在各自的檢視條件下可以互不干擾,能夠表現出各自的斑點特征,同時收集了多個 層次的不同信息量[7]。本次實驗中在同一展開條件下可對龍膽、梔子、甘草、地黃以及各樣品的對照品進行展開分層處理,1塊薄層板上承載的信息量增加,這對于今后的檢驗、監督等工作均具有重要意義。相對于《中國藥典（一部）》2010年版中龍膽瀉肝丸薄層鑒別方法而言,該方法操作簡單、結果清晰等優勢十分突出。通過本次研究我們體會到,薄層色譜法在鑒別方面相對于纖維鑒別更加容易掌握,且人才培養的周期較短,可以適應目前藥學檢驗、監督工作人力資源短缺的現狀,滿足了研究需求,同時使薄層色譜鑒別技術的發展得到了一定的推動作用,值得對其給予關注并推廣[8-9]。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫藥科技出版社,2010:636-637.

[2] 孫國祥,張靜嫻.系統指紋定量法鑒別龍膽瀉肝丸質量[J].分析化學,2009,37(8):1183-1187.

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[4] 丁宏珍.靈仙跌打片鑒別方法的改進[J].中國藥業,2010,14(2):437-439.

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[6] 肖麗和,郭巧技,關瀟瀅,等.瀉肝安神丸的定性及定量分析方法[J].中國實驗方劑學雜志,2009,15(8):198-199.

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[9] 段秀君.薄層色譜法鑒別清利合劑中的當歸、金銀花、黃芩[J].內蒙古中醫藥,2010,21(11):43-44.

R286；R284.1

B

1671-8194（2014）25-0093-02