廣東梅縣一野生紅菇化學成分及急性毒性研究

徐紹業，金美華，趙靈穎，李晶晶，韋玉，蔣禎鳳，羅琴，陳新華

（桂林醫學院，廣西桂林541004）

紅菇屬（Russula Pers.）是一類具有重要經濟意義的真菌類群，在中國有非常廣泛的分布。紅菇屬真菌多數可食用，是美味的食用菌，如變綠紅菇，梨菇；也有一些種類有毒[1-2]，如亞稀褶紅菇，嘔吐紅菇，脆弱紅菇，點柄黃紅菇等，誤食后往往引起胃腸炎型中毒癥狀，其中亞稀褶紅菇為劇毒的品種，誤食中毒發病率70%以上，半小時后發生嘔吐等，死亡率可達70 %。

廣東梅縣地處熱帶亞熱帶地區，山地眾多，野生大型真菌資源十分豐富。作者在廣東梅縣調查發現，有兩種類紅菇形態和顏色都十分相似，一為當地群眾稱為的“紅菌”或“紅菇”，已成為商品紅菇；另一為“棺材菌”或“白菌”，當地村民不采摘，任其自生自滅。目前，關于該“棺材菌”的毒性及化學成分鮮見有文獻報道。因此，我們對廣東梅縣“棺材菌”進行了急性毒性和化學成分類型研究，為進一步研究和利用該野生紅菇資源提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器、試劑與材料

1.1.1 儀器與試劑

儀器：電爐，冷凝管，鐵架臺。電子天平FA2204B：上海精科天美科學有限公司；三用紫外線分析儀ZF-6型：上海嘉鵬科技有限公司；循環水式多用真空泵：鄭州長城科工貿有限公司。

試劑：乙醇、石油醚、氯仿、茚三酮、濃鹽酸、濃硫酸、α-萘酚、鎂粉、碘、氯化汞、醋酐、對硝基苯胺、醋酸鎂、亞硝酰鐵氰化鈉、冰醋酸、無水硫酸鈉、氫氧化鈉、氨水、溴甲酚綠、碘化鉀、3，5-二硝基苯甲酸、氫氧化鈉、正丁醇、冰醋酸、硼酸、30%過氧化鈉、三氯化鋁、三氯化鐵、異羥肟酸鐵、明膠、氯化鈉均為分析純試劑；硫酸銅、酒石酸鉀鈉為化學純試劑；水為蒸餾水。

1.1.3 材料

實驗動物：KM 小鼠，體重（20±2）g，雌雄各半，購于桂林醫學院實驗動物中心，生產許可證號：SCXK 桂2007-0001。

紅菇樣品：同一時間采集于廣東梅縣隆文鎮村東一個山頭，采回的子實體洗去泥土經60 ℃烘干至恒重后，用植物粉碎機粉碎，過40 目篩，放入干燥器中密封保存備用。

1.2 化學成分鑒別

1.2.1 供試樣品的制備

水提取液：稱取樣品粗粉5 g，置于100 mL 的三角燒瓶中，加蒸餾水50 mL 室溫浸泡過夜。過濾出約20 mL 濾液供檢查氨基酸、多肽、蛋白質備用。

熱水提取液：將上述剩余的冷水浸泡液連同濾渣于水浴上60 ℃左右熱浸30 min，趁熱過濾，濾液供檢查糖、多糖、有機酸、皂甙、甙類、酚類、鞣質等成分備用。

乙醇提取液：稱取樣品粗粉10 g，置于250 mL 圓底燒瓶中，加95%乙醇100 mL，于水浴上加熱回流1 h，過濾，濾液供檢查黃酮、蒽醌、香豆素、萜類、甾體、強心甙、有機酸、酚類、鞣質等成分備用。

酸性乙醇提取液：稱取樣品粗粉1 g，加0.5%硫酸的乙醇溶液10 mL，于水浴上加熱回流10 min，過濾，濾液供檢查生物堿備用。

石油醚提取液：稱取樣品粗粉1 g，加入石油醚（60 ℃～90 ℃）10 mL，濾液供檢查揮發油、油脂、萜類、甾體化合物等成分備用。

1.2.2 化學成分鑒定方法

用加熱沉淀實驗、茚三酮實驗和雙縮脲實驗檢測氨基酸和蛋白質；泡沫實驗和醋酐-濃硫酸檢測皂苷；Fehling 反應和Molish 反應檢測多糖；三氯化鐵實驗和氯化鈉-明膠反應檢測酚類或鞣質類；pH 試紙和溴甲酚綠實驗檢測有機酸；碘化汞鉀實驗、碘-碘化鉀實驗和苦味酸實驗檢測生物堿；堿性反應、醋酸鎂反應和硼酸試驗測定蒽醌類；熒光實驗、重氮化反應和異羥肟酸鐵反應檢測內酯和香豆素；堿性苦味酸反應、3，5-二硝基苯甲酸反應和亞硝酸鐵氰化鈉反應檢查強心甙類；氯仿-濃硫酸反應和醋酐-濃硫酸反應檢測甾體；油斑實驗檢測揮發油及油脂；鹽酸-鎂粉反應、三氯化鋁熒光實驗和氨熏實驗檢測黃酮類物質。

1.3 急性毒性試驗

試驗時將紅菇粉末用蒸餾水配成注射器能抽動的混懸液，最大濃度為0.25 g/mL，用時搖勻。具體參考GB1519·3—2003《食品急性毒性試驗》。根據預試驗結果，實驗組以最大給藥濃度（0.25 g/mL）灌胃，三次灌胃間隔時間4 h，染毒容量為0.20 mL/10 g，折合成紅菇粉末給予量為15.00 g（/kg/d）。動物實驗小鼠20 只，禁食不禁水16 h，分實驗組與對照兩組，每組10 只，雌雄各半。對照組灌胃以蒸餾水，時間及劑量相同。染毒3h～4h后恢復正常進食。染毒后注意觀察小鼠中毒表現、死亡數和死亡時間。記錄染毒時、染毒后第7 天和第14天的體重。觀察期結束后，脫臼處死小鼠并解剖觀察主要臟器和組織有無肉眼可見的病理學變化。

1.4 統計學方法

采用origin75 統計軟件進行統計，各組數據以x±s表示，各組均數間差異采用方差分析。

2 結果與分析

2.1 化學成分分析結果

通過化學成分預試驗，結果表明該菇中可能含有氨基酸、多肽、蛋白質、還原糖、多糖及糖苷類、有機酸、植物甾醇、皂苷、三萜類、生物堿類等化學成分。

2.2 對小鼠一般體征的影響

實驗組小鼠分別灌胃給予紅菇粉末后，小鼠活動正常，連續觀察14 d，所有受試小鼠毛色光潔，飲食、活動和大小便正常，鼻、眼和口腔無異常分泌物，未出現不良情況。

2.3 對小鼠給藥前后體重的影響

第1 天受試樣品組雌性小鼠平均體重為（22.00±1.87）g，第7 天受試樣品組雌性小鼠平均體重為（27.80±2.05）g，7 d 內受試樣品組雌性小鼠體重增加了5.80 g，第14 天受試樣品組雌性小鼠平均體重為（31.80±2.68）g，14 d 內受試樣品組雌性小鼠體重增加了11.20 g。

第1 天受試樣品組雄性小鼠平均體重為（24.20±1.48）g，第7 天受試樣品組雄性小鼠平均體重為（32.40±1.52）g，7 d 內受試樣品組雄性小鼠體重增加了8.20 g，第14 天受試樣品組雄性小鼠平均體重為（38.40±1.34）g，14 d 內受試樣品組雄性小鼠體重增加了14.20 g。

受試樣品組雌、雄小鼠體重與對照組無明顯差別，14 d 內動物生長情況良好，表明紅菇樣品對小鼠體重無明顯影響。結果見表1。

表1 廣東梅縣一野生紅菇對動物體重的影響（x±s）Table1 Effects of wild Russula sp.from Meixian county，Guangdong on the body weight of mouse

2.4 小鼠死亡狀況

小鼠經口灌胃給予受試紅菇樣品15.00 g/kg 小鼠體重劑量，整個試驗期14 d 內無動物死亡發生，受試樣品組10 只小鼠全部存活。

2.5 對主要臟器的影響

脫臼處死所有受試小鼠進行大體解剖，未見其組織器官出現顏色、體積和質地等改變。受試樣品組小鼠皮膚、黏膜、眼睛、呼吸、循環及中樞神經系統、行為表現等反應與對照組小鼠無明顯差別。

3 結論與討論

以紅菇樣品最大使用濃度給予KM 小鼠經口灌胃劑量為15.00 g/kg 小鼠體重，在觀察期內受試樣品組小鼠毛色，皮膚，黏膜，眼睛，呼吸，循環，自主活動及中樞神經系統、行為表現等均對照組小鼠無明顯差別，整個試驗期內無小鼠死亡發生，紅菇樣品對雌性和雄性小鼠的半數致死量（LD50）均大于15.00 g/kg 體重。根據急性毒性分級標準，該野生紅菇樣品屬無毒級[3]。對所有試驗小鼠進行大體解剖，組織器官未見有異常改變。本試驗結果表明受試紅菇樣品急性毒性很小，但急性毒性實驗僅數次給藥，觀察時間較短，故還應結合長期毒性試驗的毒性表現及多種檢查結果綜合分析評價其毒性。

同時，本實驗還對該菇子實體的化學成分進行了初步研究，結果發現該菇子實體中含有大分子物質蛋白質（氨基酸）和多糖，小分子物質黃酮類、生物堿、酚類、甾體、萜類和有機酸等。該紅菇為紅色，試驗表明紅色素屬水溶性色素。由于預試樣液本身就帶有一定顏色，故用活性炭去色素以免造成顏色變化不明顯或出現假陽性反應。大型真菌種類不同其化學成分存在差異，還可能發現新化合物類型，該菇具體化學成分和生物活性還需進一步研究。

[1] 卯曉嵐.中國經濟真菌[M].北京：科學出版社,1998:1-762

[2] 應建浙,卯曉嵐,馬啟明,等.中國藥用真菌圖鑒[M].北京：科學出版社,1987:1-579

[3] 戴寅,馬鳳樓,郭世萍.急性毒性試驗(GB 15193.3—2003).食品安全性毒理學評價程序和方法[M].北京:中國標準出版社,2004:29