MMP-2和MMP-9在Hp陽性的腦梗死患者血清中的表達

王淑華

山東省菏澤市立醫院檢驗科，山東菏澤 274000

MMP-2和MMP-9在Hp陽性的腦梗死患者血清中的表達

王淑華

山東省菏澤市立醫院檢驗科，山東菏澤 274000

目的 探討幽門螺桿菌（Hp）感染陽性的腦梗死（CI）患者血清中MMP-2和MMP-9的表達情況。 方法 選取2012年1月～2014年3月在菏澤市立醫院神經內科住院的CI患者100例，患者均經頭顱CT檢查、頸動脈造影檢查并結合病史確診，同時選取無CI體征的健康體檢者100例為對照組，用ELISA法測定兩組的Hp細胞毒素相關基因蛋白（Hp-CagA-IgG），比較各組的Hp-CagA-IgG陽性率。再把Hp-CagA-IgG陽性的CI患者分為Hp重度感染CI組、Hp輕度感染CI組，把對照組中Hp-CagA-IgG陰性的受試者作為Hp陰性對照組。用ELISA法測定MMP-2、MMP-9，比較各組的MMP-2、MMP-9。 結果 CI組的Hp-CagA-IgG陽性率為72.1%，明顯高于對照組的 44.6%（P<0.01）。 Hp 重度感染 CI組的 MMP-2 為（373±126）μg/L、MMP-9 為（399±137）μg/L，Hp 輕度感染CI組的 MMP-2 為（267±139）μg/L、MMP-9 為（316±132）μg/L，均明顯高于 Hp 陰性對照組（P<0.01）；Hp 重度感染CI組與Hp輕度感CI組的MMP-2、MMP-9比較，差異有統計學意義 （P<0.01）。 結論 Hp感染能使CI患者的MMP-2和MMP-9表達量增高，從而使其發生CI的概率增高。

腦梗死；幽門螺桿菌；感染；基質金屬蛋白酶-2；基質金屬蛋白酶-9

Hp是世界上感染最普遍最廣泛的細菌之一。Hp感染導致消化系統疾病已有大量的研究，并且也已被全世界公認，但是，對Hp感染導致腦梗死（cerebral infarction，CI）的研究國內外報道較少，并且還存在爭議，需要做大量、深入的試驗研究來證實CI與Hp感染之間的關系和其可能的發病機制，從而為CI的早期防治提供一個新的手段和依據。本研究通過檢測Hp細胞毒素相關基因蛋白（Hp-CagA-IgG）及基質金屬蛋白酶2和9（MMP-2和 MMP-9）在血清中的表達，來探討Hp感染與CI形成之間關系及其可能的發病機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年1月～2014年3月在菏澤市立醫院神內科住院的CI患者，回顧性分析行頭顱CT/MRI檢查、頸動脈造影檢查并結合臨床病史診斷為CI的患者100例，其中男51例，女49例，年齡49～82歲，平均（65.3±10.6）歲，患者均符合第四屆全國腦血管疾病會議制訂的診斷標準。并同時選取無CI體征的健康體檢者100例為對照組，其中男50例，女50例，年齡50～85歲，平均（68.0±9.4）歲。兩組均除外消化系統疾病、結締組織病、肝腎系統疾病、免疫系疾病、合并感染性疾病、腫瘤、甲狀腺功能亢進或減低、貧血、抗Hp治療史的患者及近期服用過抗氧化藥物 （如B族維生素或葉酸）患者。

1.2 試劑及儀器

1.2.1 試劑 Hp-CagA-IgG試劑盒，購自朗頓生物科技有限公司，MMP-2和MMP-9試劑盒，購自上海研謹生物科技有限公司。

1.2.2 儀器 離心機：北京醫用離心機廠，型號為LD-42；酶聯免疫檢測儀：美國Instruments.Inc，型號為EL×800；低溫冰箱：日本 Sanyo公司，型號為 MDF-U332；洗板機：BIO-RAD公司，型號為1575；孵育箱：HIRA SAWA公司，型號為WJ-6C。

1.3 研究方法

用ELLSA法檢測Hp-CagA-IgG及基質金屬蛋白酶MMP-2、MMP-9，嚴格按照試劑盒說明書的操作規范去操作。

所有受試者于清晨空腹抽取靜脈血4 ml，沿管壁緩慢注入潔凈的玻璃試管內，以3000 r/min的速度離心10 min，離心半徑為14 cm，取淡黃色上清液存于封閉玻璃試管中備用。①檢測CI組及對照組的血清Hp-CagA-IgG，比較兩組的Hp-CagA-IgG陽性率。②根據檢測Hp-CagA-IgG的OD值大小，把Hp-CagA-IgG陽性的CI患者分為Hp輕度感染CI組 （100≤OD≤400），Hp 重度感染 CI組（OD＞400）；把對照組中 Hp-CagA-IgG陰性的受試者作為Hp陰性對照組。③用ELISA法分別檢測MMP-2和MMP-9在3組（Hp陰性對照組、Hp輕度感染CI組、Hp重度感染CI組）血清中的表達。比較各組的MMP-2、MMP-9。

1.4 統計學處理

數據使用SPSS 13.0軟件進行統計分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，兩樣本均數比較采用t檢驗，多個樣本均數比較采用完全隨機設計資料的方差分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CI組與對照組Hp-CagA-IgG陽性率的比較

CI組的Hp-CagA-IgG陽性率（72.1%）明顯高于對照組的44.6%，差異有統計學意義（P<0.01）。

2.2 Hp陰性對照組、Hp輕度感染CI組、Hp重度感染 CI組 MMP-2、MMP-9的比較

Hp輕度感染CI、Hp重度感染CI組的 MMP-2、MMP-9均明顯高于Hp陰性對照組，差異有統計學意義（P<0.01）；Hp重度感染CI組與Hp輕度感染CI組比較，差異有統計學意義（P<0.01）（表1）。

表1 Hp陰性對照組、Hp輕度感染CI組、Hp重度感染CI組MMP-2、MMP-9 的比較（μg/L，±s）

表1 Hp陰性對照組、Hp輕度感染CI組、Hp重度感染CI組MMP-2、MMP-9 的比較（μg/L，±s）

組別 MMP-2 MMP-9 Hp陰性對照組Hp輕度感染CI組Hp重度感染CI組F值P值142±72 267±139 373±126 37.4<0.01 155±87 316±132 399±137 28.7<0.01

3 討論

研究表明，Hp感染后的致病作用與其菌型有關。Hp-CagA-IgG和空泡毒素（VacA）是Hp的毒力標志。VacA可能是導致消化性潰瘍的重要因子，Hp-CagAIgG是一種高分子Hp抗體，Hp-CagA-IgG陽性菌株脂多糖是一種特殊的內毒素，其增強的毒力和細胞毒素性產物可能與CI相關[1]。Hp-CagA-IgG是Hp的一個標志性毒力因子，具有很強的毒性，與致病力關系密切，雖然含量甚微，卻能引起強烈的免疫應答[2]。Pasceri等[3]通過對缺血性心腦血管疾病總結了10個回顧性研究、3個前瞻性研究，對Hp及其毒力菌株狀況與心腦血管疾病的關系進行分析，結果顯示心腦血管病與Hp-CagA-IgG菌株感染之間存在相關性，Hp-CagA-IgG菌株感染極有可能是相關心腦血管疾病的獨立危險因素。本研究結果顯示，CI組的Hp-CagA-IgG陽性率均明顯高于對照組，顯示CI與Hp感染可能呈正相關，尤其是Hp-CagA-IgG菌株感染與CI的發病機制可能有更重要的關系。Hp感染后，Hp-CagA-IgG抗體與頸動脈血管壁相關抗原發生交叉反應，啟動炎癥過程，誘導急性炎性產物的表達和免疫反應，導致血管內皮細胞受損和功能障礙，進而啟動頸動脈粥樣硬化的病理演變過程，誘發CI的發生[4-5]。Hp感染導致全身性炎癥反應，加劇粥樣硬化的發展和臨床癥狀的加重[6]。

基質金屬蛋白酶是一個大家族，因其需要Ca2+、Zn2+等金屬離子作為輔助因子而得名，是主要的蛋白水解酶。目前MMPs家族已分離鑒別出26個成員，編號分別為MMP-1～26。根據作用底物以及片斷同源性，將MMPs分為6類，為膠原酶、明膠酶、基質降解素、基質溶解素、furin活化的MMP和其他分泌型MMP。

膠原酶為其中重要的一類，它主要有兩種形式，一種被糖化，分子量為92 kD，命名為MMP-9；另一種非糖化，分子量為72 kD，被稱為MMP-2。

近年來，動脈粥樣硬化的“感染學說”受到醫學界的關注[7]。炎性細胞的浸潤分泌多種炎性反應因子和脂質過氧化物，誘導內皮細胞大量分泌MMP-2、MMP-9，而MMP-2和MMP-9降解內皮細胞基底膜參，加速低密度脂蛋白滲透，有利于單核細胞入侵，并且與內皮細胞黏附，使內皮細胞轉變為泡沫細胞，這是動脈粥樣硬化的關鍵環節這一[8]。此外，在泡沫化過程中，多種細胞因子調節其他細胞分泌大量的MMP-2和MMP-9，進一步降解細胞外基質，促使脂質條紋的形成，并且加速動脈粥樣硬化斑塊的發展[9]。本研究結果顯示，Hp輕度感染 CI、Hp重度感染 CI組的MMP-2、MMP-9均明顯高于Hp陰性對照組（P<0.01）；Hp重度感染CI組與Hp輕度感染CI組比較，差異有統計學意義（P<0.01），說明Hp感染在CI的發生、發展中可能起更重要的作用。大量深入地研究Hp-CagAIgG菌株感染與炎性反應及MMP-2和MMP-9的濃度與CI的發生、發展之間的內在聯系必定會為CI的防治策略開拓更新的思路。

[1]鄭東明，王金春，郝慶，等.幽門螺桿菌感染對腦梗死患者血脂及纖維蛋白原水平的影響[J].中國醫科大學學報，2004，33（1）：59-60.

[2]劉明瑜.幽門螺桿菌感染與心腦血管病關系的探討[J].中華醫院感染學雜志，2011，21（8）：1599-1601.

[3]王玉梅，白彩琴.慢性產細胞毒素相關蛋白A幽門螺桿菌感染與動脈硬化性腦梗死的發病關系探討[J].陜西醫學雜志，2004，33（9）：779-781.

[4]許先進，金立軍.幽門螺桿菌感染與冠心病相關性的研究進展[J].醫學綜述，2010，16（2）：244-248.

[5]李唯瓊.幽門螺桿菌與腦梗塞相關性的探討[J].當代醫學，2009，15（30）：17-18.

[6]DiomediM，PietroiustiA，SilvestriniM，etal.CagApositveHelicobacrer pyloristrains may influence the natural history of atherosclerotic stroke[J].Neurology，2004，63（5）：800-804.

[7]王騰玉，彭成海，田野.基質金屬蛋白酶及其抑制劑與動脈粥樣硬化斑塊穩定性的關系研究進展[J].中國綜合臨床，2012，28（9）：997-999.

[8]周波，劉利慧.冠心病患者血清炎癥因子水平測定及其臨床意義[J].實用醫藥，2014，31（2）：121-122.

[9]Macin SM，Perna FR，Farías EF，et al.Atorvastation has an important acute anti-inflammatory effect in patients with acute coronary syndrome：results of a randomized，double blind，placebo-controlled study[J].Am Heart J，2005，149（7）：451-457.

Expression of MMP-2 and MMP-9 in serum of patients with cerebral infarction infected with Hp

WANG Shu-hua
Department of Clinical Laboratory,Heze Municipal Hospital of Shandong Province,Heze 274000,China

ObjectiveTo discuss the expression of MMP-2 and MMP-9 in serum of patients with cerebral infarction(CI)infected with Helicobacter pylori(Hp).Methods100 hospitalized patients with CI in department of neurology of Heze city were selected from January 2012 to March 2014,and the patients were diagnosed exactly by skull CT and carotid arteries anglography with medical history,meanwhile,100 people conducted health examination without CI sign were selected as the control group,Hp cytotoxin associated gene protein (Hp-CagA-IgG)in the two groups was determined using ELISA method,the positive rate of Hp-CagA-IgG was compared in the two groups.Then patients with CI(positive Hp-CagA-IgG)were divided into the Hp with severe infection CI group and Hp with mild infection CI group,the negative Hp-CagA-IgG from the control group were selected as the negative Hp control group,MMP-2,MMP-9 were determined using ELISA method,MMP-2,MMP-9 in the three groups were compared.ResultsThe positive rate of Hp-CagA-IgG in the CI group(72.1%)was significantly higher than that in the control group(44.6%)(P<0.01).MMP-2 was （373±126）μg/L,MMP-9 was （399±137）μg/L in the Hp with severe infection CI group,and it was （267±139）,（316±132）μg/L in the Hp with mild infection CI group,MMP-2,MMP-9 in the in the Hp with severe and mild infection CI group were higher than those in the negative Hp control group (P<0.01);there was a statistical difference of MMP-2,MMP-9 in the Hp with(P<0.01).ConclusionHp infection can cause the expression of MMP-2,MMP-9 in atients with CI to increase to increased the probability of occurrence of patients with CI.

Cerebral infarction;Helicobacter pylori;Infection;Matrix metalloproteinase-2;Matrix metalloproteinase-9

R743.9

A

1674-4721（2014）10（c）-0089-03

王淑華（1974-），女，主管檢驗師

2014-08-01 本文編輯：許俊琴）