瘦素與腎上腺髓質素在不同子宮平滑肌腫瘤中的表達及意義

王雅玲 李美蓉 宋亭亭

瘦素與腎上腺髓質素在不同子宮平滑肌腫瘤中的表達及意義

王雅玲①李美蓉②宋亭亭①

目的：了解瘦素、腎上腺髓質素在子宮平滑肌腫瘤（UMST）中的表達及意義。方法：對30例良性子宮平滑肌瘤（UL）、30例富于性子宮平滑肌瘤（CL）及10例子宮平滑肌肉瘤（LMS）應用免疫組化法檢測瘦素與腎上腺髓質素（ADM）的表達。結果：LMS組瘦素表達陽性率明顯高于CL組和UL組（P<0.05），且CL組表達陽性率高于UL組（P<0.05）；LMS組ADM表達陽性率明顯高于CL組和UL組（P<0.05），且CL組表達陽性率高于UL組（P<0.05）。結論：瘦素和ADM的表達可能在UMST的發生、發展中起重要作用。

子宮平滑肌腫瘤； 瘦素； 腎上腺髓質素

子宮平滑肌腫瘤（UMST）是女性生殖器官最常見的腫瘤，由平滑肌和結締組織組成，常見于30～50歲婦女，且目前臨床上30歲以下的女性發病率越來越高。子宮平滑肌腫瘤有良性、交界性與惡性之分，其中惡性腫瘤表現為子宮平滑肌肉瘤。良性平滑肌瘤預后較好；子宮平滑肌肉瘤預后差，治療效果不佳；交界性平滑肌瘤一般預后好，但組織病理學與平滑肌肉瘤難以鑒別，容易誤診，且近年來發病率顯著增高。本文通過瘦素及腎上腺髓質素（ADM）在不同平滑肌腫瘤中的表達為臨床病理診斷提供實驗依據，并以期為鑒別子宮平滑肌腫瘤良惡性提供新的輔助診斷指標。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取山西醫科大學第一臨床醫院2006-2012年手術切除且資料完整的良性平滑肌瘤（UL）30例、富于細胞性平滑肌瘤（CL）30例、平滑肌肉瘤（LMS）10例。所有子宮平滑肌瘤的病理診斷均根據已知的診斷標準。所有選取的USMT組織蠟塊為4 μm切片，經HE染色并由2位有經驗的婦科病理醫師在雙盲的情況下復核原診斷。

1.2 試劑 Leptin（兔抗人單克隆抗體）、ADM（兔抗人單克隆抗體）、山羊抗兔二抗均購自武漢博士德生物公司。

1.3 免疫組化化學 石蠟標本作4 μm連續切片，常規脫蠟，pH 6.0枸櫞酸液高壓熱修復，3% H2O2消除內源性過氧化物酶20 min，滴加一抗4 ℃過夜，滴加山羊抗兔二抗1 h后DAB顯色，蘇木素復染，中性樹膠封片。每次實驗以PBS代替一抗作為陰性對照，以已知陽性片作為陽性對照。

1.4 免疫組化結果判定 Leptin的效應產物為棕色顆粒，分布于細胞漿，ADM效應產物為棕色顆粒，分布于細胞漿及細胞膜。在400倍鏡視野下隨機選取切片中至少5個區域，計數陽性染色細胞的百分數，取其平均值為該切片的陽性細胞百分數，可分為5級：0分：染色細胞<5%；1分：染色細胞5%～25%；2分：染色細胞25%～50%；3分：染色細胞50%～75%；4分：染色細胞>75%。染色強度分為4級：0分：不顯色；1分：淺黃色；2分：棕黃色；3分：深棕色。兩者相加為最終免疫組化結果（0～1為-，2～3為+，4～5為++，6～7為 +++）。

1.5 統計學處理 采用SPSS 17.0統計學軟件對數據進行處理，計數資料比較采用 檢驗或者Fisher確切概率法，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

在30例UL中，瘦素陽性表達11例（36.7%），ADM陽性表達10例（33.33%）；30例CL中，瘦素陽性表達22例（73.3%），ADM陽性表達21例（70.0%）；10例LMS中，瘦素陽性表達10例（100%），ADM陽性表達9例（90.0%）。CL組瘦素表達陽性率明顯高于UL組（P<0.05），LMS組瘦素表達陽性率明顯高于UL組及CL組（P<0.05；CL組ADM表達陽性率明顯高于UL組（P<0.05），LMS組ADM表達陽性率明顯高于UL組及CL組（P<0.05），見表1、表2。

表1 瘦素在USMT的免疫組化結果

表2 AMD在USMT的免疫組化結果

3 討論

子宮平滑肌腫瘤是婦科最常見的腫瘤，好發于30～50歲婦女，近年來30歲以下的患病率呈上升趨勢。子宮平滑肌腫瘤分為良性、交界性與惡性腫瘤。惡性子宮平滑肌腫瘤即平滑肌肉瘤，臨床較少見，據文獻報道≤1%[1]，治療效果不佳，預后差。近年來有文獻報道，在子宮良性平滑肌瘤與肉瘤之間存在一組罕見的交界性腫瘤，即特殊類型的子宮平滑肌瘤。特殊類型的子宮平滑肌瘤包括：富于細胞性平滑肌瘤（CL）、奇異性平滑肌瘤（BL）、血管性平滑肌瘤、上皮樣平滑肌瘤、靜脈內平滑肌瘤病、彌漫性平滑肌瘤病、良性轉移性平滑肌瘤病、脂肪平滑肌瘤、卒中性平滑肌瘤、核分裂活躍型平滑肌瘤等。子宮富于細胞型平滑肌瘤即是其中之一，占子宮平滑肌腫瘤的3.7%，具有生長迅速、容易復發及具有惡變傾向的特點。目前其發病機制尚未完全闡明。在組織病理學上，因鏡下細胞可異常豐富，甚至出現個別異型細胞[2-3]，與平滑肌肉瘤難以鑒別，容易誤診，且近年來發病率顯著提高，因而給日常診療工作帶來很大的困難。

瘦素是肥胖基因的表達產物，主要由白色脂肪組織分泌，對人體調節能量平衡和脂肪代謝起重要的作用，與人類多種惡性腫瘤的發病存在相關性。雌激素、CCAAT∕增強子結合蛋白-α能使瘦素表達和分泌增多，瘦素通過與ob-R結合發揮生物學作用，通過作用于下丘腦調節食欲和能量代謝，還可與多種激素、細胞因子、酶等組成調節網絡，參與下丘腦-垂體-性腺軸、造血、免疫反應、血管形成等生理和病理過程[4-5]。瘦素與血管增生密切相關，是一種血管生成刺激因子，能夠誘導體內絨膜尿囊膜（CAM）和鼠角膜的血管生成[6]。瘦素促增殖的作用主要發生在血管內皮細胞、平滑肌細胞、結腸細胞及乳腺癌細胞。瘦素可通過內源性血管增生刺激因子（VEGF）、成纖維細胞生長因子等間接促進血管生成。瘦素通過上調凋亡抑制因子白細胞介素-2以減低微血管內皮細胞的凋亡[7-8]。惡性腫瘤細胞增長較快，需要大量營養物質供應，故血管分布較廣，密度較高。本研究顯示瘦素在LMS組織中的表達高于UL組和CL組，推測瘦素在UL、CL的生長中發揮著重要的作用。由以上可見，在良性腫瘤中瘦素不呈過度表達，腫瘤惡性程度越高，其表達越高，說明CL是有別于惡性腫瘤的。

ADM主要來源于血管內皮細胞和血管平滑肌細胞，以血管內皮細胞為主，屬于降鈣素基因相關肽（CGRP）家庭成員。ADM和CGRP受體、ADM特異性受體結合發揮生物學反應。ADM受體活化后通過Gs蛋白介導的腺苷酸環化酶系統、細胞內鈣離子通路、NO信號途徑、絲裂原活化激酶通路和ATP依賴的K+通路實現其功能。ADM的促腫瘤生長機制：（1）ADM是一種新的促細胞分裂的多肽，它可誘導細胞系中cAMP應答，通過絡氨酸激酶和有絲分裂原活性蛋白激酶的信號轉導途徑參與細胞的生長和凋亡[9]；（2）通過一氧化氮依賴途徑抑制腫瘤細胞的生長，降低腫瘤細胞的凋亡率；（3）ADM抑制T淋巴細胞的分化和細胞毒性作用，抑制或下調巨噬細胞的功能，增強補體因子H的補體調節功能，并抑制補體級聯反應的旁路途經，間接抑制機體免疫反應，從而使腫瘤細胞逃避免疫監視[10]；（4）ADM與血管內皮細胞的CGRP受體結合，或結合于其特異受體，通過cAMP一氧化氮途經松弛血管、擴張血管，也增加了腫瘤經血液轉移的可能；（5）ADM可直接刺激腫瘤細胞的生長。本研究結果表明，ADM蛋白表達陽性率在LMS組顯著高于UL組和CL組﹙P<0.05），提示LMS發病機制與ADM的表達有關。ADM蛋白陽性表達率隨腫瘤從良性、交界性到惡性的發展而遞增，提示CL為介于子宮良惡性腫瘤間的一種特殊類型的腫瘤。

綜上所述，瘦素、ADM的表達隨子宮平滑肌腫瘤惡性程度的增加而增加，故在USMT中應用免疫組化檢測瘦素、ADM的表達可提示腫瘤的良惡性。另外可進一步證明，子宮富于細胞性平滑肌瘤是一種介于良惡性子宮平滑肌腫瘤間的特殊類型的腫瘤。瘦素、ADM在多種腫瘤中均發揮重要作用，因而有望成為腫瘤病理診斷的指標，也可阻斷其作用途徑成為治療腫瘤的一個新靶點。

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Objective:To understand the expression and significance of Leptin and ADM in human uterine smooth muscle（USMTs）.Method：Immunohistochemical technique was used to detect the expression of Leptin and ADM protein in 30 usual leiomyoma（UL）， 30 cellular leiomyoma （CL） and 10 leiomyosarcoma （LMS）. Result： The positive Leptin protein expression rate of LMS group was apparently higher than the CL group and UL group（P<0.05）， the positive Leptin protein expressin rate of the CL group was apparently higher than the UL group （P<0.05）. The positive ADM protein expression rate of LMS was apparently higher than the CL group and UL group （P<0.05）， the positive ADM protein expression rate of CL was apparently higher than the UL group （P<0.05）. Conclusion： The expression of Leptin or ADM protein may play an important role in the occurrence and development of human uterine smooth muscie tumors.

Human uterine smooth muscle tumors； Leptin； ADM

Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

10.3969/j.issn.1674-4985.2014.10.012

①山西醫科大學 山西 太原 030001

②山西醫科大學第一臨床醫院

李美蓉

2014-01-26） （本文編輯：蔡元元）