精神分裂癥患者血清特征多肽及其鑒定的研究＊

程 松，郭婧瀾，丁銀環，王開正（瀘州醫學院附屬醫院檢驗科，四川瀘州 646000）

精神分裂癥是一種精神活動與周圍環境不協調的常見精神疾病[1]，雖然做了大量研究，該疾病的分子機制仍未闡明。目前芯片技術和蛋白質組學技術具有高通量的特點，故可用于大規模篩選相關的基因與蛋白質[2]。表面增強激光解析電離飛行時間質譜（SELDI－TOF－MS）技術是一項蛋白質組學技術，國內外研究報道了該技術檢測心血管疾病、腫瘤、感染、器官移植的蛋白質標志物并用于早期診斷的可行性[3－4]，但對精神分裂癥研究卻未見報道。本研究前期利用該技術，篩選出差異具有統計學意義（P＜0.05）的血清蛋白質標志物[5]，通過查詢蛋白質數據庫找出對應的血清多肽，再利用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）對其驗證，探索該疾病實驗室診斷的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 精神分裂癥組來自2007年11月至2008年10月瀘州醫學院附屬醫院精神科的住院患者，共計28例，其中男13例，女15例；年齡19～48歲，平均（33.11±8.14）歲；納入標準：符合國際疾病分類與診斷標準第10版（ICD－10）的精神分裂癥診斷標準，首次發病，入院后未接受抗精神病藥物治療，并排除腦器質性和軀體疾病所致的精神障礙。其他精神疾病對照組為同期收治的26例患者，其中，抑郁癥患者12例，焦慮癥患者7例，顱腦外傷所致的精神障礙者7例；男14例，女12例；年齡19～53歲，平均（36.29±10.54）歲；納入標準：符合中華醫學會精神科分會2001年制定的中國精神障礙診斷與分類標準第3版（CCMD3）的相應精神疾病診斷標準，入院后未接受抗抑郁治療，并排除精神分裂癥。健康對照組為同期到該院體檢的健康體檢者24例，其中男12例，女12例；年齡21～50歲，平均（34.10±9.12）歲。

1.2 主要試劑與儀器 人神經肽2（NP－2）、內皮素－3（ET－3）、胰島素樣肽A鏈（INS－A）、Glicentin相關肽（GIP）ELISA試劑盒均購自上海豐翔生物科技公司。Diatek DR－200Bs自動酶標儀由無錫華衛德朗儀器提供。

1.3 方法

1.3.1 制備樣品 從醫用超低溫冷凍冰箱（－80℃）中取出所選中的標本并編號，冰上溶解后4℃10 000r／min離心2min，待用。

1.3.2 ELISA檢測 神經肽2、內皮素－3、胰島素樣肽A鏈、Glicentin相關肽的ELISA操作步驟參考文獻[5]。采用Diatek DR－200Bs自動酶標儀檢測3組標本中人神經肽2、內皮素－3、胰島素樣肽A鏈、Glicentin相關肽的吸光度（OD）值。

1.4 統計學處理 對精神分裂癥組、其他精神疾病對照組和健康對照組采用SPSS17.0軟件進行單因素方差分析，首先對這3組樣本進行方差齊性檢驗，然后進行方差分析和多重比較。若有方差齊性不相等，假設總體分布未知的情況下，使用非參數檢驗中的多獨立樣本檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 3組標本中人神經肽2、內皮素－3、胰島素樣肽A鏈、Glicentin相關肽的OD值見表1。

表1 各組神經肽2、內皮素－3、胰島素樣肽A、Glicentin相關肽OD值的比較（x±s）

2.2 3組標本的方差齊性檢驗 從表2可見，除Glicentin相關肽外，其余所有數值均大于0.05，因此，內皮素－3、胰島素樣肽A鏈、神經肽2的總體方差相等，方差是齊次的。而Glicentin相關肽的方差是不齊次的。

表2 精神分裂癥、其他精神疾病患者和健康人多肽水平方差齊次性檢驗

2.3 3組標本多肽水平方差分析 從表3中可以看出神經肽2的方差檢驗F＝4.010，對應的顯著性為0.022，小于顯著性水平0.05，因此認為神經肽2中至少有一個組與另外一個組差異有統計學意義（P＜0.05）。

表3 精神分裂癥、其他精神疾病患者和健康人多肽水平方差分析

表4 精神分裂癥、其他精神疾病患者和健康人多肽水平多重比較表（P值）

2.4 多重比較法 用多重比較法統計精神分裂癥組、其他精神疾病對照組和健康對照組的多肽水平，發現神經肽2在精神分裂癥組、其他精神疾病對照組與健康對照組的比較中差異均有統計學意義（P＜0.05），認為神經肽2在健康人和精神分裂癥患者之間存在差異表達。具體數值見表4。

2.5 多獨立樣本檢驗 鑒于Glicentin相關肽的方差齊性不相等，假設總體分布未知的情況下，使用多獨立樣本檢驗多個樣本是否來自于相同分布的總體。結果見表5，從表中可見神經肽2的漸近顯著性水平為0.031，小于0.05，因此，只有神經肽2在各組之間的表達差異有統計學意義（P＜0.05）。

表5 Kruskal Wallis H檢驗

3 討 論

精神分裂癥影響約世界1%的人口，治療這種疾病的大多數藥物是針對影響單胺能傳遞的受體。然而，有大量的證據表明，單胺類神經遞質常常釋放多種類型的神經肽；并且，配體作用于相應的神經肽受體，以調節單胺能的傳遞。這種神經肽系統包括神經降壓肽、縮膽囊素、神經肽Y、阿片肽、速激肽和食欲素等[6]。因此，對精神分裂癥神經肽的研究，有可能揭示該疾病的分子機制，并選取特定的生物標志物作為診斷的客觀依據[7]。

本研究前期篩選出差異具有統計學意義（P＜0.05）的血清蛋白質標志物。通過查詢蛋白質數據庫，它們對應的蛋白質名稱分別是神經肽2、內皮素－3、胰島素樣肽A鏈、Glicentin相關肽。從表4可以看出，神經肽2在精神分裂癥組VS健康對照組顯著性水平為0.040，其他精神疾病對照組VS健康對照組顯著性水平為0.008，說明神經肽2在這兩組比較中差異有統計學意義（P＜0.05）。而精神分裂癥組VS其他精神疾病對照組的顯著水平為0.487，大于0.05，故推測神經肽2可能與精神疾病的發生、發展有關。

眾所周知，神經系統的功能是由多種神經肽共同參與調節的，精神疾病的發病機制是復雜的，血清中神經肽2僅僅是共同參與并調節神經系統功能的多種神經肽中的一員。目前對精神分裂癥患者中樞神經肽2功能的研究很少，結果也很不一致。但可以肯定的是神經肽類進化上保守，并已證明其可調節眾多的行為。已經證實它們與一些精神疾病有關，包括精神分裂癥。盡管人類對精神疾病的研究存在著一些固有的困難（包括標本量小，病程多變，用藥狀況影響，伴發的精神障礙的存在，診斷異質性），但是一些研究結果仍然值得注意。有尸檢研究認為在額葉和顳皮層的神經肽系統發生了相關改變。來自遺傳學的強有力的證據也認為神經肽在精神分裂癥中把Neuregulin－1（NRG1）和縮膽囊素受體的研究聯系了起來[8]。

本研究初步研究結果顯示了神經肽2在精神分裂癥患者中表達的差異性，該實驗診斷方法為精神分裂癥的診斷提供了一種可行的方法。進一步研究宜把芯片技術和蛋白質組學技術結合起來，通過靶基因數據庫篩選出相關蛋白質，與已知的蛋白質進行比對分析，以此來闡述該疾病的分子作用機制，并對篩選的蛋白質標志物進行提取、測序和鑒定。

[1]韓柏.精神分裂癥的現代研究[M].北京：中國科學技術出版社，2003：2－12.

[2]韓闖，楊盛昌.高通量篩選技術及其應用[J].生物技術通報，2005（2）：22－25.

[3]Ricolleau G，Charbonnel C，Lode L，et al.Surface－enhanced laser desorption／ionization time of flight mass spectrometry protein profiling identifies ubiquitin and ferritin light chain as prognostic biomarkers in node2negative breast cancer tumors[J].Proteomics，2007，6（6）：1963－1975.

[4]Lin YW，Lin CY，Lai HC，et al.Plasma proteomic pattern as biomarkers for ovarian cancer[J].Gynecol Cancer，2007，16（1）：139－146.

[5]程松.精神分裂癥血清多肽和MicroRNA表達差異研究[D].瀘州：瀘州醫學院，2012.

[6]Lacrosse AL，Olive MF.Neuropeptide Systems and Schizophrenia[J].CNS Neurol Disord Drug Targets，2013，12（5）：619－632.

[7]Riley B，Kendler KS.Molecular genetic studies of schizophrenia[J].Eur J Hum Genet，2011，14（6）：669－680.

[8]Cáceda R，Kinkead B，Nemeroff CB.Involvement of neuropeptide systems in schizophrenia：human studies[J].Int Rev Neurobiol，2007，78：327－376.