葡萄籽原花青素提取物對衰老模型小鼠抗氧化作用

高 璐，王 瀅，饒勝其，楊振泉，黃阿根，胡博然,*

（1.揚(yáng)州大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225127；2.常州市武進(jìn)工商局，江蘇 常州 2131 59）

葡萄籽原花青素提取物對衰老模型小鼠抗氧化作用

高 璐1，王 瀅2，饒勝其1，楊振泉1，黃阿根1，胡博然1,*

（1.揚(yáng)州大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225127；2.常州市武進(jìn)工商局，江蘇 常州 2131 59）

目的：研究葡萄籽原花青素提取物對衰老小鼠心臟、肝、腦和血清抗氧化功能的影響。方法：采用纖維素酶輔助浸提葡萄籽原花青素，經(jīng)大孔樹脂吸附純化后灌胃由D-半乳糖連續(xù)皮下注射誘導(dǎo)的亞急性衰老模型小鼠，以各組小鼠心臟、肝、腦和血清中的總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH- Px）活力和丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量為指標(biāo)，全面評價葡萄籽原花青素提取物在小鼠體內(nèi)的抗氧化能力。結(jié)果：與空白對照組相比，模型對照組小鼠心臟、肝、腦和血清中T-AOC、SOD、GSH-Px活力均有不同程度的降低，MDA含量有不同程度的升高，其大多變化差異顯著，說明小鼠衰老模型構(gòu)建成功。與模型對照組相比，葡萄籽原花青素提取物各劑量組能增強(qiáng)模型小鼠心臟、肝、腦和血清中T-AOC、SOD、GSH-Px活力，同時降低MDA值，其中大多變化差異顯著，而血清中各值變化差異極顯著。結(jié)論：葡萄籽原花青素提取物能夠顯著增強(qiáng)亞急性衰老小鼠的抗氧化能力，具有延緩衰老的作用。

葡萄籽原花青素提取物；D-半乳糖；衰老模型小鼠；抗氧化

我國葡萄資源較為豐富，年產(chǎn)量約有近600萬 t，這些葡萄中約有80%用于釀酒，13%作為鮮果食用，7%用于加工果汁及其他葡萄產(chǎn)品。工業(yè)酒的生產(chǎn)伴隨著大量的垃圾，全世界每年生產(chǎn)出數(shù)以萬噸計釀酒葡萄廢棄物，其中主要包括葡萄皮、葡萄籽等[1]。隨著葡萄酒市場的不斷壯大，隨之產(chǎn)生的釀酒副產(chǎn)物逐漸變成了一個不可忽視的環(huán)境問題。大多數(shù)企業(yè)一般是將皮籽丟棄、用作飼料、燒材或發(fā)酵后作為肥料，利用率很低，造成了極大的資源浪費(fèi)[2]。

近年來的研究發(fā)現(xiàn)，葡萄籽具有很高的營養(yǎng)價值和藥用價值，其中所含的原花青素為葡萄籽生物活性的重要成分之一[3-4]。葡萄籽原花青素（grape seed proanthocy anidin extract，GSPE）是由兒茶素、表兒茶素及其沒食子酸酯通過C4-C6或C4-C8鍵共價相連組成的多聚體[5]。由于這類物質(zhì)的分子中具有多電子的羥基部分，使它擁有較強(qiáng)的抗氧化、清除自由基和抑制脂質(zhì)過氧化的能力，是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)效的氧自由基消除劑和脂質(zhì)過氧化抑制劑之一[6]。

衰老是生命過程中必然出現(xiàn)的極其復(fù)雜的生理現(xiàn)象，目前最具有代表性的衰老學(xué)說之一是1956年Harman提出的自由基學(xué)說[7-9]。Das等[10]的研究表明，人體內(nèi)存在清除自由基的防御系統(tǒng)，包括超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）等抗氧化酶系。隨著年齡的增長，抗氧化防御物質(zhì)的合成和活性下降，大量代謝產(chǎn)物丙二醛（malondialdehyde，MDA）產(chǎn)生，機(jī)體產(chǎn)生和清除自由基的平衡被破壞，自由基堆積，加速機(jī)體衰老。D-半乳糖致衰老模型是我國學(xué)者基于衰老代謝學(xué)說而復(fù)制的衰老模型，近年來不少國內(nèi)外學(xué)者紛紛使用此衰老模型來研究體內(nèi)抗氧化作用[11]。

目前對葡萄籽原花青素提取物的抗衰老研究主要是通過體外法測定其對1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基、超氧陰離子自由基（O2－·）、羥自由基（·OH）的清除活性，抗脂質(zhì)過氧化能力以及對金屬離子螯合能力等體外抗氧化指標(biāo)來評價[12-14]，而用衰老模型進(jìn)行系統(tǒng)的體內(nèi)抗氧化研究的報道并不多。因此，本實驗用葡萄籽原花青素提取物灌胃由D-半乳糖連續(xù)皮下注射誘導(dǎo)的亞急性衰老模型小鼠，測定其血清、腦、肝、心臟組織中MDA含量，SOD、GSH-Px及總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC） 活性，較為系統(tǒng)地研究葡萄籽原花青素提取物對D-半乳糖衰老模型小鼠體內(nèi)抗氧化的影響，為其進(jìn)一步開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物

ICR小白鼠：雌性，7 周齡，購自揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心。

1.2 材料與試劑

赤霞珠釀酒葡萄籽由甘肅紫軒酒業(yè)有限公司提供。

纖維素酶（酶活力30 000 U/g） 上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司；D-半乳糖 美國Sigma公司；MDA生成量測試試劑盒、SOD活性測試盒、GSH-PX活性測試盒、T-AOC活性測試盒 南京建成生物工程研究所；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.3 儀器與設(shè)備

SZC-C索氏提取器 上海纖檢儀器有限公司；FW100高速萬能粉碎機(jī) 天津市太斯特儀器有限公司；ALPHA1-2LD冷凍干燥機(jī) 北京博行儀器有限公司；755S紫外分光光度計 上海棱光技術(shù)有限公司；PICO17離心機(jī) 美國Thermo公司。

1.4 方 法

1.4.1 葡萄籽原花青素提取

[15]中酶解助提法進(jìn)行GSPE提取。首先葡萄籽粉碎后經(jīng)石油醚脫脂并干燥，準(zhǔn)確稱取1.0 g干燥脫脂葡萄籽粉置于100 mL三角瓶中，加入20 mL pH 4.0的緩沖液，調(diào)節(jié)纖維素酶液活力至100 U/mg，45 ℃酶解1.0 h后迅速升溫至90 ℃充分滅活，1 500 r/min離心分離并保存上清液，加入70%的乙醇溶液于50 ℃水浴30 min后進(jìn)行抽濾、70 ℃減壓蒸餾濃縮至沒有液滴滴出、濃縮物經(jīng)冷凍干燥得GSPE粗提物。

1.4.2 葡萄籽原花青素純化

參考文獻(xiàn)[15-16]中最優(yōu)純化參數(shù)對GSPE進(jìn)行純化。在100 mL錐形瓶中加入5 g經(jīng)前處理好的AB-8大孔樹脂，再加入50 mL 3 mg/mL GSPE粗提物水溶液，放入25 ℃搖床中振蕩吸附24 h（振蕩速度為160 r/min），過濾除去未吸附的GSPE粗提物水溶液，蒸餾水沖洗過的樹脂倒入50 mL 50%的乙醇中25 ℃、160 r/min解吸24 h，濾出解析液、70 ℃減壓蒸餾濃縮至沒有液滴滴出，冷凍干燥得到GSPE粗提物。

1.4.3 葡萄籽原花青素含量的測定

采用鐵鹽催化比色法[17]。配制不同含量的原花青素溶液，顯色劑顯色后，在500 nm波長處測吸光度A，以原花青素含量為橫坐標(biāo)，吸光度A500nm為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得直線回歸方程y=－0.007 39+2.411 5x，R2= 0.999 49。樣品測定過程中通過測吸光度A500nm反映原花青素含量。

1.4.4 葡萄籽原花青素提取物對衰老模型小鼠抗氧化作用

1.4.4.1 實驗小鼠分組和處理

將60 只ICR小鼠分為6 組：空白對照組、模型對照組、VC陽性對照組、GSPE低劑量組、GSPE中劑量組、GSPE高劑量組，每組10 只。低劑量組50 mg/（kg·d）、中劑量組100 mg/（kg·d）、高劑量組200 mg/（kg·d）（均以體質(zhì)量計，下同）灌胃GSPE；VC陽性對照組以200 mg/（kg·d）灌胃VC；模型對照組和空白對照組灌胃同體積生理鹽水，連續(xù)灌胃40 d。各組小鼠同室分籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食（基礎(chǔ)飼料）和水，溫度18～20 ℃，相對濕度50%～60%。

1.4.4.2 D-半乳糖衰老小鼠模型構(gòu)建

各實驗組小鼠（空白對照組除外）按300 mg/（kg·d）的劑量皮下注射滅菌D-半乳糖，空白對照組注射等體積滅菌生理鹽水，連續(xù)注射55 d，構(gòu)建小鼠衰老模型。模型小鼠構(gòu)建成功后再對各劑量組小鼠進(jìn)行灌胃受試物，連續(xù)30 d[15-17]。

1.4.4.3 小鼠處理和指標(biāo)測定

末次灌胃后，各組小鼠禁食不禁水，24 h后將各組小鼠眼眶采血后處死，取心臟、肝、腦及血清，處理后測定T-AOC、GSH-Px、SOD活性及MDA生成量這4 個抗氧化指標(biāo)，測定方法按試劑盒說明書操作。

1.5 數(shù)據(jù)處理

用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件對有關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。表中參數(shù)用±s表示，差異顯著水平為P＜0.05，差異極顯著水平為P＜0.01。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄籽原花青素的提取與純化結(jié)果

本實驗中提取得GSPE粗提物含量為84.5 mg/g，其提取率達(dá)7.1%。葡萄籽原花青素粗提物經(jīng)純化后純度為88.6%。

2.2 GSPE提取物對衰老模型小鼠組織及血清中T-AOC活性的影響

表1 葡萄籽原花青素對衰老模型小鼠組織和血清中T-AAOOCC活性的影響（±s）Table1 Effect of grape seed procyanidins on T-AOC in aging micex±s)

表1 葡萄籽原花青素對衰老模型小鼠組織和血清中T-AAOOCC活性的影響（±s）Table1 Effect of grape seed procyanidins on T-AOC in aging micex±s)

注：*. 與模型對照組相比差異顯著（P＜0.05）；**. 與模型對照組相比差異極顯著（P＜0.01）。下同。

組別劑量/（mg/（kg·d））T-AOC活力/（U/mg pro）血清T-AOC活力/（U/mL）腦肝心臟GSPE低劑量組503.99±0.30*5.09±0.613.91±0.0535.13±1.23**GSPE中劑量組1003.64±0.17*5.64±0.48*4.08±0.1337.98±4.1 7**GSPE高劑量組2004.24±0.59*5.80±0.91*4.18±0.4339.90±1.21**VC陽性對照組2004.47±0.04*4.74±0.074.14±0.0524.09±4.49*模型對照組03.23±0.144.93±0.143.78±0.0816.28±3.98空白對照組03.36±0.136.36±0.13*4.03±0.3125.49±1.64*

由表1可知，模型對照組小鼠的腦、肝、心臟和血清中的T-AOC值均低于空白對照組，其中肝和血清中的T-AOC值差異顯著（P＜0.05），說明從T-AOC值來看衰老小鼠模型構(gòu)建基本成功。GSPE各劑量組和VC陽性對照組的T-AOC值均大于模型對照組，在小鼠腦、肝組織中幾乎各劑量組的T-AOC值均與模型對照組差異顯著（P＜0.05），而小鼠血清中的T-AOC值與模型對照組差異極顯著（P＜0.01），說明GSPE能提高小鼠腦、肝、心臟組織和血清的總抗氧化能力，在血清中的影響最顯著，作用強(qiáng)于VC。

2.3 葡萄籽原花青素對衰老模型小鼠組織及血清中SOD活力的影響

SOD對機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用，此酶能清除O2－·保護(hù)細(xì)胞免受損傷，SOD活性的大小能間接反映機(jī)體清除氧自由基的能力。GSPE對小鼠組織和血清中SOD活性的影響見表2。與空白對照組相比，模型對照組小鼠的腦、肝、心臟和血清中的SOD活性均有所降低，其中腦和心臟中的SOD活性降低顯著，血清中的SOD活性降低極顯著，說明從SOD活性來看衰老小鼠模型構(gòu)建基本成功。與模型組相比，GSPE各劑量組和VC陽性對照組的SOD活性均有所增強(qiáng)，其中心臟組織中的SOD活性增強(qiáng)顯著（P＜0.05），腦組織和血清中的SOD活性增強(qiáng)極顯著（P＜0.01），說明GSPE能顯著地提高小鼠腦、心臟和血清中的SOD活性，且中、高劑量組作用強(qiáng)于VC陽性對照組。

表2 葡萄籽原花青素對小鼠組織和血清SOD活性的影響（±s）Table2 Effect of grape seed procyanidins on SOD activity in aging mice (±s)

表2 葡萄籽原花青素對小鼠組織和血清SOD活性的影響（±s）Table2 Effect of grape seed procyanidins on SOD activity in aging mice (±s)

心臟GSPE低劑量組50136.21±5.91**228.74±29.5520.48±2.92*480.88±46.18**GSPE中劑量組100140.91±4.94**255.71±9.61*32.37±1.41*549.01±33.23**GSPE高劑量組200150.40±5.53**245.59±45.0147.85±6.24**739.81±119.08**VC陽性對照組200133.58±3.58**246.68±19.54*15.43±1.09544.66±25.57**模型對照組065.11±5.19228.77±0.1413.73±0.18170.63±22.92空白對照 組083.75±10.48*233.39±0.1320.94±3.60*341.36±24.82**組別劑量/（mg/（kg·d））腦SOD活力/（U/mg pro）血清SOD活力/（U/mL）肝

2.4 葡萄籽原花青素對衰老模型小鼠的組織及血清中GSH-Px活性的影響

表3 葡萄籽原花青素對小鼠組織和血清GSH-Px活性的影響（±s）Table3 Effect of grape seed procyanidins on GSH-Px activity in aging mices)

表3 葡萄籽原花青素對小鼠組織和血清GSH-Px活性的影響（±s）Table3 Effect of grape seed procyanidins on GSH-Px activity in aging mices)

組別劑量/（mg/（kg·d））GSH-Px活力/（U/mg pro）血清GSH-Px活力/（U/mL）腦肝心臟GSPE低劑量組5032.25±9.10*62.39±11.53**32.41±2.31*1 698.51±144.21**GSPE中劑量組10038.76±4.04*66.14±4.25**32.59±2.81*1 837.24±12.00**GSPE高劑量組20043.99±2.57**68.65±8.27**36.76±0.87*1 914.4± 76.10**VC陽性對照組20029.30±1.8059.75±8.22**29.37±5.84*1 885.9±197.68**模型對照組025.72±0.1431.20±0.1421.89±2.181 173.33±110.29空白對照組032.01±0.13*35.04±5.1125.49±1.171 773.67±106.20**

GSH-Px活性反映小鼠體內(nèi)組織和血清的還原力的大小，它的高低間接反映小鼠對自由基的消除能力的大小。由表3可知，模型對照組小鼠的腦、肝、心臟和血清中的GSH-Px活性均低于空白對照組，其中血清中GSH-Px活性差異極顯著（P＜0.01），說明從GSH-Px活性來看衰老小鼠模型構(gòu)建基本成功。GSPE各劑量組和VC陽性對照組的GSH-Px活性均大于模型對照組且差異顯著（P＜0.05），肝和血清中GSPE各劑量組的GSH-Px活性與模型對照組相比，差異極顯著（P＜0.01），說明GSPE顯著提高小鼠腦、肝、心臟和血清的GSH-Px活性，顯示了GSPE很好的抗氧化活性。

2.5 葡萄籽原花青素對衰老模型小鼠的組織及血清中MDA含量的影響

表4 葡萄籽原花青素對小鼠組織和血清MDA含量的影響（±s）Table4 Effect of grape seed procyanidins on MDA content in aging mice±s)

表4 葡萄籽原花青素對小鼠組織和血清MDA含量的影響（±s）Table4 Effect of grape seed procyanidins on MDA content in aging mice±s)

組別劑量/（mg/（kg·d））MDA含量/（nmol/mg pro）血清MDA含量/（nmol/mL）腦肝心臟GSPE低劑量組501.14±0.057.69±0.890.57±0.1919.67±1.28*GSPE中劑量組1001.19±0.136.48±0.270.43±0.07*17.81±1.38**GSPE高劑量組2000.87±0.164.94±0.49**0.37±0.14*16.68±3.65**VC陽性對照組2000.92±0.043.21±0.71**0.43±0.05*27.53±1.42模型對照組01.27±0.057.84±0.290.77±0.0133.99±4.42空白對照組01.03±0.145.29±0.34*0.40±0.04*22.18±6.19*

MDA含量的大小反映機(jī)體受自由基攻擊的嚴(yán)重程度，當(dāng)機(jī)體受到自由基的攻擊以后，會引發(fā)脂質(zhì)的過氧化作用，進(jìn)而引發(fā)MDA的產(chǎn)生。GSPE對小鼠組織和血清中MDA含量的影響見表4。模型對照組小鼠的肝、心臟和血清中MDA含量明顯高于空白對照組且差異顯著（P＜0.05），說明模型基本成功。GSPE各劑量組小鼠血清中MDA含量顯著低于模型組，且中、高劑量組差異極顯著（P＜0.01），GSPE各劑量組小鼠的肝和心臟組織中MDA含量也均低于模型對照組，且中、高劑量組差異顯著（P＜0.05），說明GSPE能顯著降低血清和心臟、肝中MDA的含量；而對小鼠腦中的MDA含量沒有顯著影響。

3 結(jié) 論

本實驗中，ICR小鼠經(jīng)皮下注射D-半乳糖55 d后，小鼠肝和血清中的T-AOC活性、小鼠腦、心臟和血清中SOD活性、小鼠腦和血清中GSH-Px活性均有顯著降低；小鼠肝、心臟和血清中的MDA含量顯著升高，這和Ho等[18]報道的結(jié)果基本一致，說明小鼠衰老模型構(gòu)建成功。

Garcia-Ramirez[19]和Shoji[20]等的研究表明原花青素能很快被大鼠吸收，直接參與體內(nèi)的生理功能。本研究首先采用纖維素酶輔助提取葡萄籽原花青素，純化后再連續(xù)灌胃經(jīng)D-半乳糖致衰老小鼠40 d，結(jié)果顯示各劑量組的T-AOC、SOD、GSH-Px活性均有不同程度增加，MDA含量有不同程度的降低，其中小鼠血清中各指標(biāo)變化差異極顯著，這和解素花等[21]的研究結(jié)果基本一致。劉霞等[22]對冷榨葡萄籽餅粕和彭亮等[23]對葡萄籽粉的研究結(jié)果與本研究的結(jié)果也基本一致，表明原花青素具有較好的抗氧化防衰老的作用，也是葡萄籽餅粕和葡萄籽粉中可能的主要抗氧化成分。

葡萄籽原花青素分子中具有多電子的羥基部分，可在分子內(nèi)和分子間形成締合氫鍵，是一個大的供氫體。此外，其結(jié)構(gòu)單元黃烷醇結(jié)構(gòu)，其酚羥基對Fe3+具有較強(qiáng)的配位作用，8 個酚羥基（兒茶素）均與雙鍵共軛，從而使原花青素能夠有效清除羥基自由基，2 個脂肪族羥基又使其具有良好的水解性，保護(hù)脂質(zhì)不被氧化，緩解細(xì)胞DNA的氧化損傷，阻斷自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，促使細(xì)胞抗氧化酶的誘導(dǎo)合成和丙二醛的下降。這些分子結(jié)構(gòu)特點也許就是其具有良好的清除自由基和抗氧化活性的原因所在[24]。

研究結(jié)果表明，一定量的GSPE能顯著增強(qiáng)體內(nèi)抗氧化酶的活性和顯著降低體內(nèi)過氧化脂質(zhì)含量，從而增強(qiáng)機(jī)體清除自由基的能力，即GSPE具有較強(qiáng)的體內(nèi)抗氧化性和延緩衰老的作用，若將其應(yīng)用到食品、保健 品等領(lǐng)域，可以對葡萄酒工業(yè)最大的副產(chǎn)品——葡萄籽進(jìn)行再利用，以實現(xiàn)經(jīng)濟(jì)和生態(tài)效益的最大化。

參考文獻(xiàn)：

[1] 薛雯, 房玉林, 袁照程. 葡萄廢棄物的開發(fā)利用及葡萄循環(huán)經(jīng)濟(jì)研究概況[J]. 西北林學(xué)院學(xué)報, 2013, 28(6): 253-259.

[2] DEVESA-REY R, VECINO X, VARELA-ALENDE J L, et al. Valorization of winery waste vs. the costs of not recycling[J]. Waste Management, 2011, 31(11): 2327-2335.

[3] 袁敏, 韓莉, 裴俊俊. 葡萄籽提取物原花青素藥理作用研究進(jìn)展[J].中藥材, 2005, 28(7): 632-634.

[4] YIM T S, KIT Y L, WOUTER KALLE, et al. Protective effect of grape seed extracts on human lymphocytes: a preliminary study[J]. Applied Physiology Nutrition and Metabolism, 2013, 38(3): 275-279.

[5] 周坦洋, 羅芙蓉, 白彬. 葡萄籽原花青素生物藥理活性的研究進(jìn)展[J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2012, 46(1): 94-96.

[6] 暴悅梅, 佟永薇, 章勤學(xué). 葡萄籽中原花青素的研究[J]. 食品研究與開發(fā), 2010, 31(1): 185-186.

[7] HARMAN D. Aging: a theory based on free radical and radiation chemistry[J]. Journal of Gerontology, 1956, 11: 298-300.

[8] HARMAN D. Origin and evolution of the free radical theory of aging: a brief personal history, 1954-2009[J]. Biogerontology, 2009, 10(6): 773-781.

[9] FINKEL T, HOLBROOK N J. Oxidants, oxidative stress and the biology of ageing[J]. Nature, 2000, 408: 239-247.

[10] DAS N, LEVINE R L, ORR W C, et al. Selectivity of protein oxidative damage during aging in Drosophila melanogaster[J]. Biochemical Journal, 2001, 360(15): 209-216.

[11] 雷鳴, 朱祖健. D-半乳糖致衰老的研究進(jìn)展[J]. 解剖科學(xué)進(jìn)展, 2011, 17(1): 83-85.

[12] 胡博然, 朱勇, 徐潔, 等. 電子自旋共振法和分光光度法測定釀酒葡萄籽原花青素抗氧化活性[J]. 食品科學(xué), 2013, 34(1): 33-37.

[13] 張鏡, 刁樹平. 海南蒲桃果實原花青素的體外抗氧化活性[J]. 食品科學(xué), 2012, 33(1 7): 101-105.

[14] AURELIE F, ALINE L F, CECILE B. in vitro study of antioxidant capacity and antibacterial activity on oral anaerobes of a grape seed extract[J]. Food Chemistry, 2009, 113(4): 1037-1040.

[15] 張濤, 李超, 商學(xué)兵. 葡萄籽原花青素的纖維素酶輔助提取工藝優(yōu)化[J]. 中國食品添加劑, 2011(5): 82-88.

[16] 范明霞, 劉新橋, 陳瑩, 等. 大孔樹脂吸附純化葡萄籽原花青素的研究[J]. 應(yīng)用化工, 2009, 38(6): 864-867.

[17] 洪新, 唐克, 牟曉剛, 等. 葡萄籽中原花青素鐵鹽催化比色法的測定條件研究[J]. 河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報: 自然科學(xué)版, 2009, 30(6): 41-46．

[18] HO S C, LIU J H, WU R Y. Establishment of the mimetic aging effect in mice caused by D-galactose[J]. Biogerontology, 2003, 4(1): 15-18.

[19] GARCIA-RAMIREZ B, FERNANDEZ-LARREA J, SALVADO M J, et al. Tetramethylated dime ric procyanidins are detected in rat plasma and liver early after oral administration of synthetic oligomeric procyanidins[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2006, 54(7): 2543-2551.

[20] SHOJI T, MASUMOTO S, MORIICHIN, et al. Apple procyanidin ol igoners absorption in rats after oral administration:analysis of procyanidins in plasma using the porter method and high-performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2006, 54(3): 884-892.

[21] 解素花, 岳楓, 陳霞, 等. 葡萄籽提取物原花青素抗氧化作用量效關(guān)系[J]. 中國中醫(yī)藥信息雜志, 2013, 20(12): 37-39.

[22] 劉霞, 楊繼紅, 王海瑞, 等. 冷榨葡萄籽餅粕超微粉對衰老小鼠內(nèi)臟抗氧化功能的影響[J]. 食品科學(xué), 2013, 34(17): 299-304.

[23] 彭亮, 傅偉忠, 姚思宇, 等. 葡萄籽粉對自然衰老大鼠的抗氧化作用研究[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2012, 22(10): 2376-2378.

[24] TAKAHATA Y, OHNISHI K M, FURUT A S, et al. Highly polymerized procyanidins in brown soybean seed coat with a high radical-scavenging activity[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2001, 49(12): 5843-5847.

Antioxidant Activity of Grape Seed Proanthocyanidin Extract in Aging Mouse Model

GAO Lu1, WANG Ying2, RAO Sheng-qi1, YANG Zhen-quan1, HUANG A-gen1, HU Bo-ran1,*
(1. College of Food Science and Engineering, Yangzhou University, Yangzhou 225127, China; 2. Changzhou Wujin Industrial and Commercial Bureau, Changzhou 213159, China)

Objective: To study the antioxidant activity of grape seed proanthocyanidin extract (GSPE) in aging mice induced by D-galactose. Methods: GSPE was extracted with cellulase and purified by macroporous resin adsorption. The aging ICR mouse model induced by subcutaneous injection of D-galactose was orally administered with GSPE. The content of malondialdehyde (MDA), the activities of superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px) and total antioxidant capacity (T-AOC) in cerebrum, heart, liver and serum of the mice were assessed. Results: D-gala ctose could obviously reduce T-AOC as well as SOD and G SH-Px activities, and enhance MDA contents in mouse cerebrum, heart, liver and serum. In contrast, GSPE could significantly enhance T-AOC, and SOD and GSH-Px activities, and reduce MDA contents in serum, and cerebrum, heart and liver tissues of the aging mice, especially in serum. Conclusion: GSPE could improve the activities of endogenous antioxidant enzymes in aging mice. Therefore, it has good antioxidant and anti-aging effects.

grape seed proanthocyanidin extract; D-galactose; aged mice; antioxidation

TS201.4

A

1002-6630（2014）23-0253-04

10.7506/spkx1002-6630-201423049

2014-06-28

國家自然科學(xué)基金面上項目（31271857）；江蘇省“青藍(lán)工程”項目；“揚(yáng)州大學(xué)新世紀(jì)人才工程”資助項目

高璐（1976—），女，講師，碩士，研究方向為食品安全與食品成分功能分析。E-mail：gaolu@yzu.edu.cn

*通信作者：胡博然（1964—），女，教授，博士，研究方向為葡萄酒、食品生物技術(shù)與食品營養(yǎng)安全。E-mail：huboran@yzu.edu.cn