發酵紅三葉草對肉仔雞飼料消化率的影響

孟翠紅，張福元

（1.山西運城農業職業技術學院，山西 運城 044000；2.山西農業大學動物科學院，山西 太谷 030800）

發酵紅三葉草對肉仔雞飼料消化率的影響

孟翠紅1，張福元2

（1.山西運城農業職業技術學院，山西 運城 044000；2.山西農業大學動物科學院，山西 太谷 030800）

為評價紅三葉草固態發酵物（RSF）對肉仔雞的飼料消化率及血液生化指標的影響，采用單因素完全隨機試驗，設0.1%、0.2%、0.3%3個添加水平，用紅三葉草提取物作對比，選用1日齡健康艾維茵肉仔雞600只，分成5組，每組3個重復，每個重復40只雞，試驗期為49 d。試驗結果表明，RSF 0.1%處理組顯著提高了脂肪的消化率（P＜0.05），對氮沉積的作用低于脂肪。RSF 0.1%處理組提高了生長前期（13～15 d）表觀代謝能，在生長后期（34～36 d）RSF 0.2%處理提高效果顯著（P＜0.05）。RSF有提高血清總蛋白、血糖及降低尿酸濃度的趨勢，但差異不顯著（P＞0.05），添加RSF對其他各項血液生化指標影響不大。

紅三葉固態發酵；肉仔雞；血液生化指標

紅三葉草也稱紅車軸草，為豆科三葉草屬多年生草本植物。大量研究表明，紅三葉不僅是優良的豆科牧草，而且因其含有豐富的異黃酮類物質，如紅車軸草素、芒柄花素、鷹嘴豆芽素A、大豆素等具有類似大豆異黃酮的藥用與保健作用[1-3]。異黃酮具有多種生理活性，主要有植物雌激素功能和抗氧化功能[4-5]。異黃酮類化合物屬植物雌激素，相關研究結果表明，異黃酮具有促進動物生長、提高動物泌乳性能及促進乳腺發育、增加產蛋、調節動物繁殖、增強機體免疫力等生理功能[6-8]。楊守鳳等發現，這類物質還具有降血脂、對抗性激素依賴性腫瘤生長和抗癌等作用[9-10]。米曲霉固態發酵紅三葉草培養物富含異黃酮、各種消化酶、多糖等有益保健成分。陶浩等證實，異黃酮、各種消化酶和多糖等物質單獨添加于飼料中都能提高動物生產性能和機體免疫力[11-13]。但未見米曲霉發酵紅三葉草培養物對動物生產性能方面的試驗報道。本試驗進一步了解米曲霉對紅三葉草的發酵效果，認識該發酵物對肉仔公雞生產性能的影響，從營養消化率指標方面探討發酵物作用效果和機理，為固態發酵紅三葉生產富含異黃酮、消化酶的高效廉價的飼料添加劑提供試驗依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

紅三葉草：購自甘肅岷海制藥有限公司，粉碎，過40目篩，測得總黃酮含量為2.2%。

紅三葉草固態發酵物（RSF）：在最佳發酵條件下利用米曲霉A.niger 3.314 8菌株（產纖維素酶）發酵紅三葉草兩周后，低溫干燥便可制得。測得含纖維素酶為2 000 U·g-1、果膠酶為1 560 U·g-1、糖化酶為396 U·g-1、酸性蛋白酶為196 U·g-1，米曲霉活菌數為5.3×106cfu·g-1，總黃酮為2.3%。

紅三葉草提取物：購自蘭州天萃生物技術有限公司，主要成分為刺芒柄花素、鷹嘴豆芽素A、染料木素及大豆素，總黃酮含量為98%。

1.2 試驗日糧

以玉米-豆粕為主要原料，按兩個階段配制試驗日糧，即為生長前期（0～21 d）和后期（22～49 d）。基礎日糧組成及營養水平見表1。

1.3 試驗設計

本試驗是以紅三葉固態發酵物RSF的添加水平為影響因素的單因素完全隨機試驗設計。選擇1日齡健康艾維茵肉仔公雛雞600只，肉仔雞平均體重為40.39±1.48 g·只-1（P＞0.05），隨機分為5個處理，每個處理3個重復，每40只雞為1個重復。5個試驗組日糧分別為基礎日糧（對照組），基礎日糧添加RSF0.1%，基礎日糧添加RSF0.2%，基礎日糧添加RSF 0.3%，基礎日糧添加紅三葉草提取物20mg·kg-1。試驗期為49d。

表1 肉仔雞基礎日糧組成及營養水平

1.4 飼養管理

試驗雞采用3層籠養，進雞前5 d雞舍用福爾馬林熏蒸消毒。第1周室溫為33～35℃，第2周為30℃，3周后室溫保持在22℃。自由飲水和采食。在試驗雞7日齡，新城疫弱毒苗首免；14日齡，法氏囊疫苗飲水；21日齡，新城疫弱毒苗飲水二免，疫苗用量為2倍的首免。全程為自然環境條件下飼養，室內24 h光照。整個試驗全程觀察雞群精神狀態和健康狀況，記錄每日采食量和病死數。

1.5 測定指標及方法

分別在13～15、20～22、34～36日齡，采集糞樣要以重復組為單位，各組在以試驗期每天17:00收糞1次，連續收集3 d，糞樣-20℃保存。將3 d收集的各重復組的糞樣等比例混合，分成15份樣品。將樣品置于瓷盤內，70℃烘箱內烘干48 h，冷卻30 min，稱重，再繼續烘干2 h，直至恒重為止（＜0.01 g）。待糞樣烘后，粉碎機粉碎，過40目篩（孔徑0.45 mm），充分混勻后放入有磨口的廣口瓶中，貼上標簽，用于測定表觀代謝能、氮沉積、表觀脂肪。取樣后，再將剩余糞樣置于105℃烘箱烘干至恒重（＜0.01 g），用于測定總能。日糧中各種養分消化率和日糧代謝能均采用內源指示劑法（2N-HCl不溶灰分法）測定。養分消化率計算公式見式1。

式中：a-糞中某養分的百分含量；b-飼料指示劑的百分含量；c-飼料中某養分的百分含量；d-糞中指示劑的百分含量。

1.6 統計分析

試驗數據采用SPSS10.0軟件One Way ANONA進行統計，并進行Duncan's多重比較，結果以“平均值±標準誤”表示。

2 結果與分析

2.1 對肉仔雞各日齡營養物質消化率的影響

RSF對肉仔雞各生長階段脂肪消化率的影響見表2，對各日齡表觀代謝能的影響見表3，對各日齡階段氮沉積的影響見表4。

表2 RSF對肉仔雞各生長階段脂肪消化率的影響 %

表3 RSF對肉仔雞各日齡表觀代謝能的影響MJ·kg-1

表4 RSF對肉仔雞各日齡階段氮沉積的影響

由表2可見，RSF 0.1%處理組和紅三葉草提取物提高了肉仔雞13～15日齡脂肪的消化率，與對照組相比差異顯著（P＜0.05），與另外兩個水平RSF處理組差異不顯著（P＞0.05）。20～22日齡，RSF處理組有提高脂肪消化率的趨勢，但與對照組相比差異不顯著（P＞0.05）。紅三葉草提取物可顯著提高脂肪消化率，與對照組相比差異顯著（P＜0.05），但與RSF 3個水平添加組差異不顯著（P＞0.05）。RSF 0.1%處理顯著提高了肉仔雞34～36日齡脂肪消化率，與對照組差異顯著（P＜0.05），與其他各組差異不顯著（P＞0.05）。紅三葉草提取物可顯著提高34～36日齡肉仔雞脂肪消化率（P＜0.05）。總的來看，RSF的添加可提高肉仔雞脂肪的消化率。

由表3可見，RSF 0.1%組能夠顯著提高肉仔雞13～15日齡代謝能，與對照組和RSF 0.3%組差異顯著（P＜0.05），與RSF 0.2%組和紅三葉草提取物組差異顯著（P＞0.05）。各RSF組在20～22日齡無顯著差異（P＞0.05）。紅三葉草提取物與試驗理組對照組差異顯著（P＜0.05），與RSF組差異不顯著（P＞0.05）。RSF 0.2%組顯著提高了34～36日齡肉仔雞表觀代謝能（P＜0.05），與對照組及RSF 0.3%組差異顯著（P＜0.05），與RSF 0.1%組和紅三葉草提取物組差異不顯著（P＞0.05）。

由表4可見，各組間13～15日齡肉仔雞氮沉積無顯著差異（P＞0.05）。在20～22日齡階段，紅三葉草提取物組有提高氮沉積的趨勢，但與各組間無顯著差異（P＞0.05）。RSF 0.3%組提高了34～36日齡肉仔雞的氮沉積，與紅三葉草提取物組無顯著差異（P＞0.05），與對照組及另外兩個水平RSF組差異顯著（P＜0.05）。但總的來看，RSF提高了氮沉積，但差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 對肉仔雞各日齡血液生化指標的影響

RSF對22、36和49日齡肉仔雞血液生化指數的影響見表5、6和7。

由表5、6和7可見，添加RSF對22、36、49日齡肉仔雞中各組之間的總蛋白、白蛋白、血糖、尿酸、膽固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白、底密度脂蛋白、球蛋白和血蛋白/球蛋白差異不顯著（P＞0.05）。

表5 添加RSF對22日齡肉仔雞血液生化指數的影響

表6 添加RSF對36日齡肉仔雞血液生化指數的影響

表7 添加RSF對49日齡肉仔雞血液生化指數的影響

3 討論

3.1 對肉仔雞各日齡營養物質消化率的影響

安永義報道，在玉米-豆粕日糧中添加消化酶，并對營養物質的消化率沒有產生顯著影響（P＞0.05），消化酶的添加可以降低抗營養物質水平和腸道食糜黏性，從而提高營養物質的消化吸收[13]。此外，腸道有害微生物可通過腸道食糜黏度的降低來減少其滋生，而有害菌的存在與宿主在營養吸收上存在競爭，尤其是脂肪的利用[14]。周業飛在基礎日糧中分別添加不同水平的那西肽預混劑，進行肉仔雞飼養試驗，研究那西肽對肉仔雞生長性能及日糧營養消化率的影響，結果表明，那西肽可以顯著提高飼料消化率（P＜0.05），對促進肉仔雞生長具有一定的劑量依賴性。這與安永義和Smits等的研究結果一致。本試驗為含米曲霉菌的未發酵紅三葉草，主要以纖維素酶為主，可能是因為纖維素酶可降低抗營養因子的作用來提高某些營養的利用率，另外米曲霉菌在腸道中也可發揮作用。

3.2 對肉仔雞各日齡血液生化指數的影響

血液成分在一定程度上能反映動物體內代謝及健康狀況，血液總蛋白在某種程度上反映動物蛋白質營養狀況，良好的營養狀況可以提高血漿蛋白含量，使血漿蛋白維持在一個相對較高的水平上，血清蛋白是組織合成的原料，特別是清蛋白和α-球蛋白的合成。從表5、6、7可見，RSF 0.2%組提高了肉仔雞0～21和36～49 d血清總蛋白，與對照組相比提高比例為5.95%和8.44%，對各生長階段血清總蛋白水平統計分析表明，各組間在血清總蛋白水平上差異均不顯著（P＞0.05）。

血清白蛋白和球蛋白的含量高低與動物抗病力有關，本試驗雖發現RSF的添加提高了成活率，卻在白蛋白和球蛋白指標上沒有反應出來，各組間差異不顯著（P＞0.05）。從本試驗數據上看，在各試驗組內血液生化指標個體偏差較大，RSF 0.1%和0.2%組雖有提高血清總蛋白和降低尿酸的趨勢，但差異不顯著（P＞0.05），可能是個體差異較大所致。另外血液生化指標表明，米曲霉菌對肉仔雞生理機能沒有損傷作用。Steenfeldt等對2 kg的石歧雜雞用加酶飼料強飼后4 h采血，測定血液中葡萄糖和游離氨基酸的含量，發現加酶組血糖和總的氨基酸水平均高于對照組[16]。本試驗RSF 0.1%、0.2%組提高了肉仔雞35日齡前生長階段蛋白質沉積，但差異不顯著（P＞0.05），這點與上述差異顯著的報道不一致。動物機體內脂類代謝情況可通過血清甘油三酯、膽固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的指標得以反映。從全程來看，各組間無顯著差異（P＞0.05），這與Um等的研究結果一致[16]。說明RSF對肉仔雞脂類代謝影響不大，或者在血液指標上無表現出來。

Um等發現添加淀粉酶提高血糖濃度，安永義卻未發現加酶使血糖濃度升高[17]。本試驗RSF的添加有提高肉仔雞35日齡血糖濃度的趨勢，但各處理組與對照組差異不顯著（P＞0.05），有研究表明血糖濃度高是動物能量代旺盛的表現，Verma等發現，添加酶使肉鴨IGF-Ⅱ水平提高近2倍，血糖水平顯著降低[18]。而本試驗認為血糖升高可能是由于RSF中所含糖化酶和纖維素酶促進了高分子碳水化合物的單糖分解過程。有關酶添加對血液血糖濃度的影響結果不一致，造成不一致的原因可能與采血時雞生理狀況及應激有關。另一方面作者認為酶作用效果在血液生化指標上并不一定能很好的反應出來。

禽類蛋白質分解的產物是尿酸，當禽類不能從食物中獲得必需氨基酸時，將引起體蛋白的分解，補飼以獲得這種氨基酸，導致尿酸排出量增加。因此，蛋白質的品質可通過尿酸的排出量來評價。血液中尿酸水平的降低說明蛋白質的分解代謝降低，添加粗酶制劑可以增加限制性氨基酸的吸收，從而提高蛋白質的品質，增加蛋白質在體內的沉積。從各生長階段血清尿酸含量來看，3個水平RSF添加組均有降低0～21日齡肉仔雞尿酸含量的趨勢，RSF 0.2%、0.3%組有降低22～35日齡肉仔雞血清尿酸濃度的趨勢，但各組間差異不顯著（P＞0.05），36～49日齡肉仔雞尿酸濃度無下降趨勢，全期各組間在尿酸含量上差異不顯著（P＞0.05）。

4 結論

4.1 RSF對各生長期營養消化率的影響

RSF 0.1%組能顯著提高脂肪消化率（P＜0.05），脂肪消化率提高是由于RSF 0.1%組降低了腸道內有害菌，使腸道變薄以及維持腸道膽汁酸鹽的濃度，從而有利于營養物質的消化吸收。對氮沉積的作用低于脂肪。在生長前期，RSF 0.1%組的表觀消化能最佳；在生長后期，RSF 0.2%組的表觀消化能最佳。

4.2 RSF對血液生化指標的影響

RSF有提高血清總蛋白，血糖及降低尿酸濃度的趨勢，但差異不顯著（P＜0.05），添加RSF對其他各項血液生化指標影響不顯著（P＞0.05）。

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Effects of Redclover-solidstate-fermentation on Digestibility of Feed in Broilers

MENG Cuihong1,ZHANG Fuyuan2

（1.Agricultural Vocational and Technology College of Yuncheng Shanxi,Yuncheng 044000,Shanxi China;
2.College of Animal Science and Veterinary Medicine,Shanxi Agricultural University,Taigu 030801,Shanxi China）

To study the effects of redclover-solidstate-fermentation(RSF)on digestibility of feed in broilers,six hundred one-day-old broilers were divided into 5 groups randomly.The control group was fed with basal diet,while the four experiment groups were fed with the basal diet added 0.1%,0.2%,0.3%redclover-solidstate-fermentation products(RSF)and red clover extract.The experiment lasted for 49 days.The results showed that,0.1%RSF improved the digestibility of fat significantly(P＜0.05).But the nitrogen deposition is not as distinct as fat.0.1%RSF improved the apparent metabolizable energy at the early stage of growth(13-15 d),and 0.2%RSF had a signifixant effect at the later stage of growth(34-36 d)(P＜0.05).RSF could improve the total serum protein and blood glucose.It could reduce the concentration of uric acids,but no obvious difference(P＞0.05).Added RSF had little effect on the oblood of other biochemicalindexes.

redclover-solidstate-fermentation;broiler;blood biochemical indexes

S831.5

A

1001-0084（2014）12-0006-06

2014-09-30

孟翠紅（1972-），女，山西運城人，碩士，講師，主要從事動物營養與飼料科學方面的教學與研究。