聊城地區手足口病病原構成的臨床研究

于金林　孟衛東　孫愛霞　初瑞雪

[摘要] 目的 探討聊城地區手足口病（HFMD）的病原構成及臨床特點。 方法 采集2010年6月聊城地區240例HFMD患者（包括23例重癥患者）咽拭子并提取病毒RNA。采用real-time RT-PCR方法，以腸道病毒5′UTR區通用引物及探針對病毒RNA進行初步篩查，初篩陽性標本進一步采用CA16及EV71 VP1區特異性引物及探針進行型別鑒定。 結果 普通患者EV71陽性143例、CA16陽性6例、其他腸道病毒陽性21例；重癥患者中EV71陽性率達82.6%（19/23），CA16感染未見引起重癥。 結論 聊城地區HFMD患者以1～3歲兒童為主，男性高發于女性，農村高發于城市；HFMD的病原包括EV71、CA16及其他腸道病毒，主要病原為EV71，且EV71感染容易引起重癥并發癥。

[關鍵詞] 手足口病；柯薩奇病毒；腸道病毒

[中圖分類號] R512.5 [文獻標識碼] B [文章編號] 1674-4721（2014）01（a）-0163-03

手足口病（hand foot mouth disease，HFMD）是由腸道病毒引起的急性傳染病，常發生于學齡前兒童，以<3歲兒童的發病率最高，表現為發熱和手、足、口腔、臀、膝等部位的皮疹、斑丘疹，少數病例可出現無菌性腦膜炎、腦炎、腦脊髓炎、肺水腫、循環衰竭等并發癥，個別出現脊髓灰質炎樣麻痹后遺癥，甚至死亡。腸道病毒為HFMD病原，主要為柯薩奇病毒（Coxsackie virus）A組部分血清型，如A2、A4、A5、A8、A10、A16；部分B組柯薩奇病毒血清型，如B2、B4；埃可病毒（ECHO virus）和腸道病毒（enterovirus）71型，以CA16和EV71型常見。為了解本地區HFMD病原構成及臨床特點，本研究采集一定時期HFMD患者鼻咽拭子進行了real-time RT-PCR檢測，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2010年6月1～9日聊城市人民醫院HFMD門診依據原衛生部《手足口病診療指南2010年版》診斷為HFMD的240例患者，其中，男143例，女97例；年齡6個月～40歲（8、12、14、33、40歲各1例），平均3.2歲。輕型患者217例，重癥（并發腦炎、腦脊髓炎、腦膜炎、肺水腫、循環衰竭及心肌炎即為重癥）患者23例；并發腦炎7例，并發腦炎、肺炎11例，并發肺炎1例；農村178例，城市62例。

1.2 標本采集

由專業醫護人員用專用采樣棉簽，適度用力拭采咽后壁和兩側扁桃體部位，避免觸及舌部，迅速將采樣棉簽放入裝有保存液的外螺旋蓋采樣管中，旋緊管蓋，密封以防止干燥，在采樣管外注明標本唯一性編號。2 h內送達實驗室，超低溫（-80℃）冷凍保存。采集鼻咽拭子置病毒保存液中，送實驗室由專業人員嚴格按操作程序檢測。

1.3 標本檢測

咽拭子于標本保存液中充分振蕩20 min，洗下拭子上粘附的病毒及含有病毒的細胞等，凍融1次使細胞破裂，釋放病毒顆粒，并在4℃條件下10 000 r/min離心20 min。采用北京金豪制藥股份有限公司（簡稱“北京金豪”）生產的核酸分離試劑盒（硅膠膜吸附法），按試劑盒說明書提取病毒RNA。所得RNA首先應用針對腸道病毒5′UTR區的腸道病毒通用引物熒光檢測試劑盒（北京金豪）進行real time RT-PCR檢測，陽性標本再以分別針對EV71和CA16 VP1基因的腸道病毒EV71和CA16型雙通道熒光檢測試劑盒（北京金豪）進行型別鑒定。擴增體系及循環程序均參照試劑盒要求，在Roche Light Cycler 480Ⅱ上完成擴增。

1.4 結果的判讀與分析

根據Roche Light Cycler 480Ⅱ分析軟件進行分析，得到各標本的腸道病毒通用性RNA的檢測結果。每次試驗應設置陽性對照和陰性對照，且應符合以下要求，否則試驗結果不成立：無Ct值或Ct值為0報告該反應陰性；Ct值≤37.0報告該反應陽性；37.0

2 結果

<3歲兒童占64.2%，<5歲兒童占87.2%，EV71陽性患者143例，CA16陽性患者6例，其他腸道病毒21例（表1）。19例EV71陽性重癥患者中，農村患兒占68%（13/19），城市患兒占32%（6/19）；<1歲患兒中，男5例，女1例；2歲以下患兒男6例、女1例；3歲以下患兒男3例、女0例；4歲以下患兒男女均0例；5歲以下患兒男3例、女0例；男性占89%（17/19），女性占11%（2/19）。

3 討論

HFMD是由腸道病毒感染引起的兒童傳染病，傳染性強，傳播途徑廣，速度快，流行強度大，短期內可引起大流行。1957年新西蘭首次報道HFMD，1958年分離出CA16型病毒。自1972年美國首次確認EV71引起HFMD以來，HFMD在世界各地均有流行，且EV71與CA16病毒感染交替出現，成為HFMD的兩種主要病原體。本研究提示，EV71陽性患者143例，CA16陽性患者6例，其他腸道病毒22例，與上海、深圳、北京等地區存在差異[1-3]。近年來，馬來西亞、新加坡、香港等地EV71病毒多次大規模暴發流行，出現中樞神經系統癥狀，甚至暴發性死亡病例[4-6]。EV71病毒耐酸耐熱，耐酸決定其可通過糞-口途徑傳播，耐熱使其能在較高溫度下存活和自我復制。EV71病毒的復制能力與神經毒性有關，導致患兒神經系統發育遲緩和認知功能減退，亦可引起成人急性腦炎[7-9]。通過周圍運動神經元軸突逆向軸漿運輸可能是EV71型病毒侵入中樞神經的主要途徑[10-11]。本研究提示，本地區重癥手足口病主要由EV71型腸道病毒引起，CA16病毒未引起重癥感染。CA16病毒陽性較少，這與CA16病毒小范圍傳播及CA16病毒感染后大多數患者呈隱形攜帶，癥狀較輕，就診者少有關。本研究證實，聊城地區引起HFMD流行的病原主要為EV71和CA16病毒，同時存在其他型別腸道病毒。

本研究提示，<3歲兒童占64.2%，<5歲兒童占87.2%，男性發病率高于女性。與文獻報道聊城地區HFMD主要集中在<5歲兒童接近，男女比例略有差異，這可能與病例選擇的地域范圍和時間段不同有關。而男性患病率高于女性，這與男孩活潑好動，衛生清潔意識較弱有關。本研究發現，HFMD患者農村與城市比例為2.9∶1，且以<5歲農村幼托兒童為主，這與農村衛生條件差及該年齡段兒童抵抗力弱、相互接觸密切、室內通風不良易發生交叉感染等因素有關。

本研究240例咽拭子中有170例腸道病毒陽性，陽性率為70.8%，另外有70份標本腸道病毒陰性，分析其原因，主要有以下幾方面：①腸道病毒為RNA病毒，RNA在外界很容易被核酸酶降解，標本保存、運輸、解凍不當等都能導致RNA破壞；②臨床診斷誤診，有類似臨床癥狀患兒被誤診為HFMD；③實時熒光PCR具有較高的特異度、靈敏度，易導致一定假陰性；④臨床標本取材不當、患者口腔表現不明顯、藥物影響等；⑤本次研究中部分重癥患者從其他醫院轉院而來，存在采集時間不當，其中1例門診及入院時均采取咽拭子，門診采取標本測定為CA16陽性，入院采集標本腸道病毒為陰性；2例腸道病毒陰性患者，在其他實驗室不同時間檢測到EV71，提示不同病程階段采集標本可出現假陰性。咽拭子標本進行real time RT-PCR檢測存在一定假陰性，在臨床試驗方面仍顯示了很好的可行性和有效性，在傳染病流行或暴發時，采集咽拭子進行簡便、快速、穩定的RT-PCR試驗，對病原體的早期鑒定和分型具有重要意義，在控制疫情、應對突發公共衛生事件中發揮重要作用。

有關部門應加強HFMD知識的宣傳教育，對易感人群（<5歲兒童），特別是幼托機構、農村居住者進行HFMD相關知識教育，提高認識，控制傳染源、切斷傳播途徑。廣大科研工作者應加強病毒檢測和控制、基因組重組變異及疫苗、藥物的研究，有效控制疾病的發生、發展、暴發和流行，保護人類的健康。

[參考文獻]

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[8] Chang LY，Huang LM，Gau SS，et al.Neurodevelopment and cognition in children after enterovirus 71 infection[J].N Engl J Med，2007，356（12）：1226-1234.

[9] Hamaguchi T，Fujisawa H，Sakai K，et al.Acute encephalitis caused by intrafamilial transmission of enterovirus 71 in adult[J].Emerg Infet Dis，2008，14（5）：828-830.

[10] Chen CS，Yao YC，Lin SC，et al.Retrograde axonal transport：a major transmission route of enterovirus 71 in mice[J].J Virol，2007，81（17）：8996-9003.

[11] Wong KT，Munisamy B，Ong KC，et al.The distribution of inflammation and virus in human enterovirus 71 enceph alomyelitis suggests possible viral spread by neural pathways[J].J Neuropathol Exp Neurol，2008，67（2）：162-169.

（收稿日期：2013-09-27 本文編輯：袁 成）endprint

本研究提示，<3歲兒童占64.2%，<5歲兒童占87.2%，男性發病率高于女性。與文獻報道聊城地區HFMD主要集中在<5歲兒童接近，男女比例略有差異，這可能與病例選擇的地域范圍和時間段不同有關。而男性患病率高于女性，這與男孩活潑好動，衛生清潔意識較弱有關。本研究發現，HFMD患者農村與城市比例為2.9∶1，且以<5歲農村幼托兒童為主，這與農村衛生條件差及該年齡段兒童抵抗力弱、相互接觸密切、室內通風不良易發生交叉感染等因素有關。

本研究240例咽拭子中有170例腸道病毒陽性，陽性率為70.8%，另外有70份標本腸道病毒陰性，分析其原因，主要有以下幾方面：①腸道病毒為RNA病毒，RNA在外界很容易被核酸酶降解，標本保存、運輸、解凍不當等都能導致RNA破壞；②臨床診斷誤診，有類似臨床癥狀患兒被誤診為HFMD；③實時熒光PCR具有較高的特異度、靈敏度，易導致一定假陰性；④臨床標本取材不當、患者口腔表現不明顯、藥物影響等；⑤本次研究中部分重癥患者從其他醫院轉院而來，存在采集時間不當，其中1例門診及入院時均采取咽拭子，門診采取標本測定為CA16陽性，入院采集標本腸道病毒為陰性；2例腸道病毒陰性患者，在其他實驗室不同時間檢測到EV71，提示不同病程階段采集標本可出現假陰性。咽拭子標本進行real time RT-PCR檢測存在一定假陰性，在臨床試驗方面仍顯示了很好的可行性和有效性，在傳染病流行或暴發時，采集咽拭子進行簡便、快速、穩定的RT-PCR試驗，對病原體的早期鑒定和分型具有重要意義，在控制疫情、應對突發公共衛生事件中發揮重要作用。

有關部門應加強HFMD知識的宣傳教育，對易感人群（<5歲兒童），特別是幼托機構、農村居住者進行HFMD相關知識教育，提高認識，控制傳染源、切斷傳播途徑。廣大科研工作者應加強病毒檢測和控制、基因組重組變異及疫苗、藥物的研究，有效控制疾病的發生、發展、暴發和流行，保護人類的健康。

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（收稿日期：2013-09-27 本文編輯：袁 成）endprint

本研究提示，<3歲兒童占64.2%，<5歲兒童占87.2%，男性發病率高于女性。與文獻報道聊城地區HFMD主要集中在<5歲兒童接近，男女比例略有差異，這可能與病例選擇的地域范圍和時間段不同有關。而男性患病率高于女性，這與男孩活潑好動，衛生清潔意識較弱有關。本研究發現，HFMD患者農村與城市比例為2.9∶1，且以<5歲農村幼托兒童為主，這與農村衛生條件差及該年齡段兒童抵抗力弱、相互接觸密切、室內通風不良易發生交叉感染等因素有關。

本研究240例咽拭子中有170例腸道病毒陽性，陽性率為70.8%，另外有70份標本腸道病毒陰性，分析其原因，主要有以下幾方面：①腸道病毒為RNA病毒，RNA在外界很容易被核酸酶降解，標本保存、運輸、解凍不當等都能導致RNA破壞；②臨床診斷誤診，有類似臨床癥狀患兒被誤診為HFMD；③實時熒光PCR具有較高的特異度、靈敏度，易導致一定假陰性；④臨床標本取材不當、患者口腔表現不明顯、藥物影響等；⑤本次研究中部分重癥患者從其他醫院轉院而來，存在采集時間不當，其中1例門診及入院時均采取咽拭子，門診采取標本測定為CA16陽性，入院采集標本腸道病毒為陰性；2例腸道病毒陰性患者，在其他實驗室不同時間檢測到EV71，提示不同病程階段采集標本可出現假陰性。咽拭子標本進行real time RT-PCR檢測存在一定假陰性，在臨床試驗方面仍顯示了很好的可行性和有效性，在傳染病流行或暴發時，采集咽拭子進行簡便、快速、穩定的RT-PCR試驗，對病原體的早期鑒定和分型具有重要意義，在控制疫情、應對突發公共衛生事件中發揮重要作用。

有關部門應加強HFMD知識的宣傳教育，對易感人群（<5歲兒童），特別是幼托機構、農村居住者進行HFMD相關知識教育，提高認識，控制傳染源、切斷傳播途徑。廣大科研工作者應加強病毒檢測和控制、基因組重組變異及疫苗、藥物的研究，有效控制疾病的發生、發展、暴發和流行，保護人類的健康。

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[10] Chen CS，Yao YC，Lin SC，et al.Retrograde axonal transport：a major transmission route of enterovirus 71 in mice[J].J Virol，2007，81（17）：8996-9003.

[11] Wong KT，Munisamy B，Ong KC，et al.The distribution of inflammation and virus in human enterovirus 71 enceph alomyelitis suggests possible viral spread by neural pathways[J].J Neuropathol Exp Neurol，2008，67（2）：162-169.

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