化療聯合CIK免疫療法治療晚期消化道腫瘤86例觀察

李 霞，趙穩興，蔡 琳，崔 靜，王媛媛，徐文漭

化療聯合CIK免疫療法治療晚期消化道腫瘤86例觀察

李 霞，趙穩興，蔡 琳，崔 靜，王媛媛，徐文漭

目的探討化療聯合CIK免疫療法對晚期消化道腫瘤的效果。方法 采用化療(方案以奧沙利鉑、氟尿嘧啶、卡培他濱為主)聯合CIK免疫療法治療2005年10月—2010年1月成都軍區昆明總醫院收治的晚期消化道惡性腫瘤86例(觀察組)，將同期僅接受化療的63例晚期消化道腫瘤設為對照組，分別于完成第2、4個療程后2周檢測兩組相關免疫指標(CD56+、CD3+、CD3+CD56+、CD3+CD8+T細胞)，完成第2個療程后觀察兩組臨床癥狀(體重減輕、消化道出血、惡心、嘔吐)改善情況和總生存期，同時對比療效。結果 完成第2、4個療程后觀察組免疫指標均高于對照組(P＜0.05，P＜0.01)。完成第2個療程后觀察組體重減輕、消化道出血、惡心和嘔吐癥狀均明顯緩解(P＜0.05，P＜0.01)。兩組近期療效差異無統計學意義(P＞0.05)。患者均獲隨訪，隨訪時間0．5～5年，觀察組中位生存期28個月，對照組中位生存期9個月，log-rank檢驗兩條生存曲線差異有統計學意義(χ2=4．851，P=0．028)。結論 化療聯合CIK免疫療法治療晚期消化道腫瘤，能夠提高患者的免疫功能、減輕臨床癥狀、延長生存期。

消化系統腫瘤;免疫療法;細胞因子誘導的殺傷細胞;抗腫瘤聯合化療方案

有研究表明，過繼性免疫治療對于晚期腫瘤是一種安全、可行的治療方法［1］。細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokine-induced killer cells，CIK)免疫療法被廣泛認為是新一代腫瘤過繼細胞免疫治療的首選方案，臨床試驗結果表明具有較好的應用前景［2］。本研究重點觀察采用化療聯合CIK免疫療法治療晚期消化道惡性腫瘤86例的效果。

1 對象與方法

1.1 對象與分組 選擇2005年10月—2010年1月成都軍區昆明總醫院收治的消化道惡性腫瘤86例設為觀察組，男50例，女36例;年齡39～84歲，中位年齡59歲;均為不能手術或術后復發的晚期消化道惡性腫瘤，其中胃癌12例，結腸癌18例，直腸癌34例，肝癌18例，膽囊癌4例，均經病理活檢證實。將同期住院的、不愿接受CIK免疫療法治療的63例晚期消化道惡性腫瘤設為對照組，男32例，女31例;年齡42～82歲，中位年齡58歲;胃癌10例，結腸癌17例，直腸癌21例，肝癌11例，胰腺癌4例。所有患者治療前心血管系統及肝、腎功能基本正常，血白細胞總數≥2×109/L;卡氏(Karnofsky score，KPS)評分均≥50分;預計生存期3個月;近1個月未接受其他免疫治療。患者均簽署知情同意書。兩組年齡、性別及疾病種類差異無統計學意義(P ＞0．05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑:Pules-3000型血細胞分離機購于美國百特公司，Therm CO2培養箱，EPPENDORF 5810R低溫離心機，Olympus倒置顯微鏡。AIM-V無血清培養基購自GIBCO公司，白介素2(IL-2)購自山東泉港藥業有限公司，γ干擾素(γ-IFN)購自上海克隆生物高技術有限公司，CD3McAb購自美國BD公司，淋巴細胞分離液購自北京鼎國生物技術有限責任公司。

1.2.2 CIK細胞制備及檢測:按文獻［3］方法制備CIK并應用流式細胞儀檢測。

1.2.3 治療方案:兩組均予奧沙利鉑(130 mg/m2靜脈滴注，連續5 d，每3周給藥1次，共6個周期;齊魯制藥有限公司生產)、氟尿嘧啶(400 mg/m2靜脈滴注，連用3 d，每周給藥1次，4次為1個療程;天津金耀氨基酸有限公司生產)、卡培他濱(2．5 g/m2，每日總劑量分早晚2次飯后30 min口服，連用2周，間隔1周，每3周重復1次，共6個周期;上海羅氏制藥有限公司生產)為主的化療方案。觀察組行化療前給予1次CIK回輸，化療結束后2周再回輸，每天1次，連輸3 d為1個療程［4］。每次細胞數量＞109，每3個月重復1次，共4個療程。

1.3 觀察指標及療效評估

1.3.1 觀察指標:分別于完成第2、4個療程后2周檢測相關免疫指標(CD56+、CD3+、CD3+CD56+、CD3+CD8+T細胞)，完成第2個療程后觀察臨床癥狀(體重減輕、消化道出血、惡心、嘔吐)改善情況和總生存期。

1.3.2 療效評估:采用WHO實體瘤近期療效評價標準:完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩定(SD)、進展(PD)，有效(RR)率(%)=(CR+PR)例數/總例數×100%。

1.4 統計學處理 應用SPSS 17．0統計軟件，計量資料采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，采用Kaplan-Meier法計算生存率，采用log-rank檢驗比較，α=0．05為檢驗水準

2 結果

2.1 免疫指標 完成第2、4個療程治療后2周，觀察組免疫指標均高于對照組，差異有統計學意義(P ＜0.05，P ＜0.01)，見表1。

表1 兩組晚期消化道腫瘤患者完成第2、4個療程后2周免疫指標變化(±s)

表1 兩組晚期消化道腫瘤患者完成第2、4個療程后2周免疫指標變化(±s)

注:觀察組、治療組均予奧沙利鉑、氟尿嘧啶、卡培他濱為主的化療方案，觀察組同時予細胞因子誘導的殺傷細胞免疫療法

組別 例數(完成第2/4個療程)完成第2個療程后2周CD56+ CD3+ CD3+CD56+ CD3+CD8+完成第4個療程后2周CD56+ CD3+ CD3+CD56+ CD3+CD8+觀察組 73/65 0．270 ±0．005 0．664 ±0．004 0．365 ±0．003 0．310 ±0．005 0．273 ±0．005 0．675 ±0．007 0．375 ±0．007 0．323 ±0．008對照組 42/15 0．228 ±0．004 0．651 ±0．004 0．343 ±0．005 0．297 ±0．005 0．243 ±0．005 0．660 ±0．006 0．353 ±0．007 0．299 ±0．008 6．440 2．453 3．742 1．999 20．253 8．069 11．579 10．425 P 0．000 0．016 0．000 0．049 0．000 0．000 0．000 0．000 t

2.2 臨床癥狀改善情況 完成2個療程后觀察組體重減輕、消化道出血癥狀、惡心和嘔吐癥狀均明顯緩解，與對照組比較差異有統計學意義(P＜0.05，P ＜0.01)，見表2。

2.3 近期療效 對完成2個或2個以上療程者(觀察組73例，對照組42例)進行療效判定。觀察組有效率(65．8%，48/73)高于對照組(35．7%，15/42)，但差異無統計學意義(P＞0.05)。

2.4 生存率 患者均獲隨訪，隨訪時間0．5～5年，觀察組中位生存期28個月，對照組中位生存期9個月，log-rank檢驗兩條生存曲線差異有統計學意義(χ2=4．851，P=0．028，圖 1)，觀察組生存率高于對照組。

表2 兩組晚期消化道腫瘤患者完成2個療程后臨床癥狀發生率比較(%)

圖1 兩組晚期消化道腫瘤患者生存曲線

3 討論

3.1 CIK免疫療法的特點 CIK細胞來源于CD3+CD8+細胞［5］，主要由 CD3+CD56+和 CD3+CD8+亞群組成，其中CD3+CD56+T細胞也稱為自然殺傷活性T細胞(natural killer active T cell，NKT)，其含量在正常人外周血中極少［6］。CD3+CD8+T細胞為細胞毒性T細胞(cytotoxicity t lymphocyte，CTL)，是機體內發揮細胞免疫功能的主要效應細胞，具有抗腫瘤活性。CIK增殖速度快，可殺傷腫瘤細胞和病毒感染細胞、清除病毒［7］，具有以下特點:①增強機體免疫功能;②增強放、化療的敏感性，減輕不良反應;③清除手術及放、化療后的微小病灶和殘余腫瘤細胞，無明顯毒性反應;④對常規治療無效的患者效果明顯。

3.2 CIK免疫療法適應證 ①早期腫瘤患者。對于早期原發腫瘤病灶，CIK免疫療法治療可有效控制腫瘤細胞發展，直至全部殺滅腫瘤細胞。②無法耐受手術及放、化療的患者。③聯合放、化療的患者。聯合應用CIK免疫療法可提高放、化療效果，迅速緩解臨床癥狀。④術后恢復患者。⑤晚期腫瘤患者。通過激活機體的免疫功能，識別和殺傷腫瘤細胞，有效延長患者的生存時間，提高生存質量。

3.3 化療聯合CIK免疫療法的優勢 在腫瘤形成過程中，機體失去正常的免疫監視功能，晚期惡性腫瘤患者免疫系統功能常更為低下［8］。化療后，體內殘存腫瘤細胞的清除依賴于機體的免疫系統，然而多個療程的化療又會在很大程度上進一步造成機體免疫功能低下，這可能是化療后腫瘤復發率仍然較高的重要原因之一。CIK可在體外進行大量擴增，兼有對惡性腫瘤細胞的直接殺傷作用及調解宿主免疫功能的雙重優勢［9］。化療后序貫應用CIK過繼性免疫治療，通過提高機體的免疫力、增強機體抗腫瘤免疫效應，降低患者術后的復發和轉移。目前，CIK已經廣泛應用于晚期胃癌、肝癌、肺癌等多種實體瘤的治療，CIK免疫療法與化療等其他治療手段聯合應用有助于提高患者的生存質量、延長生存期［1，10-12］。有研究發現，增加 CIK 治療頻率可進一步延長胃癌患者的生存期［13］。石亮榮等［14］的研究結果也提示，對于Ⅲ期胃癌術后化療后進行CIK治療可改善患者免疫功能，延長患者的生存期。周炳喜［15］研究發現，CIK 治療觀察組血清 CA199、CEA、AFP、CA242及CA724水平均低于對照組，且不良反應發生率也較低。

本研究結果顯示，予化療聯合CIK免疫療法治療的觀察組體內 CD56+、CD3+CD56+和 CD3+CD8+T細胞水平顯著高于對照組，說明患者體內腫瘤特異性免疫殺傷細胞水平明顯增高，免疫水平處在較高且平穩的免疫激活水平，有利于效應細胞聯合化療藥物發揮對原位腫瘤細胞及術后殘存腫瘤細胞的殺傷作用，提高治療效果。免疫重建功能的加強，理論上利于機體抗腫瘤能力的增強，可以轉化為生存的優勢，這在本研究中得到證實。通過長期隨訪發現，與僅行化療的對照組比較，觀察組中位生存期延長了19個月，總生存率顯著優于對照組，顯示了化療聯合CIK免疫療法治療的優勢，為晚期消化道惡性腫瘤患者的治療提供了可靠方法。

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Chemotherapy Combined with CIK Cells Immunotherapy in Treatment of 86 Patientswith Advanced Digestive Malignant Tumor

LIXiaa，ZHAOWen-xingb，CAILinb，CUIJingb，WANG Yuan-yuanb，XUWen-mangb(Kunming General Hospital of Chengdu Military Area Command，a．Orthopedics and Trauma Institute of PLA，b．Department of Pathology，Kunming 650032，China)

ObjectiveTo explore the effect of chemotherapy combined with CIK cells immunotherapy in treatment of advanced digestivemalignant tumor．MethodsA total of86 patientswith advanced gastrointestinal cancer(observation group)were treated with chemotherapy(main components of Oxaliplatin，Fluorouracil，Capecitabine)combined with CIK immunotherapy during October2005 and January2010 in Kunming General Hospital，and 63 patientswith advanced gastrointestinal tumors(controlgroup)

only chemotherapy at the same period．The related immune parameters(CD56+，CD3+，CD3+CD56+，CD3+CD8+T cells)of the two groupswere detected twoweeks after 2ndand 4thcourses of treatmentwere finished respectively，and improvements of clinical symptoms(weight loss，gastrointestinal bleeding，nausea and vomiting)and total life span were observed，and clinical effectwas synchronously compared after 2ndcourse of treatmentwas completed in the two groups．ResultsAfter 2ndand 4thcourse of treatment was completed，the immune parameters in observation group were higher than those in control group(P＜0.05，P＜0.01)．After 2ndcourse of treatmentwas completed，weight loss，gastrointestinal bleeding，nausea and vomitingwere significantly alleviated in observation group(P＜0.05，P＜0.01)，and the difference in recent curative effectwas not statistically significant(P＞0.05)，and the difference in recent curative effectwas not statistically significant(P＞0.05)．All patients were followed up for0．5 － 5 years，themedian life span in observation group was28months;median life span in control group was 9 months，and the difference in survival curves by log-rank testwas statistically significant(χ2=4．851，P=0．028)．ConclusionChemotherapy combined with CIK cells immunotherapy in treatment of advanced digestivemalignant tumormay improve immune function，relieve clinical symptoms and prolong life span．

Digestive system neoplasm;Immunotherapy;Cytokine-induced killer cell;Antineoplastic combined chemotherapy protocol

R735;R392．12;R979．1

A

2095-140X(2014)05-0038-03

10．3969/j．issn．2095-140X．2014．05．010

云南省應用基礎研究自籌項目(2010ZC186)

650032昆明，成都軍區昆明總醫院全軍創傷骨科研究所(李霞)，病理科(趙穩興、蔡琳、崔靜、王媛媛、徐文漭)

徐文漭，E-mail:highskysky@126．com

2014-01-09 修回時間:2014-02-13)

·論著·