血硫化氫與腸缺血-再灌注損傷大鼠凝血功能相關性研究

斯偉宏 盧根林 黃驚鴻 吳愛兵

1浙江省義烏市中心醫院普通外一科 義烏 322000 2廣東醫學院附屬醫院腫瘤中心

硫化氫（H2S）是繼NO和CO之后的第三氣體信號分子，由胱硫醚-β-合成酶（CBS）、胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）催化L-半胱氨酸代謝產生[1-3]。H2S能保護腸缺血-再灌注損傷大鼠小腸黏膜屏障、肝臟功能[4-5]。本研究探討硫化氫對腸缺血-再灌注損傷大鼠凝血功能的影響，報道如下。

1 材料與方法

1.1 材 料 雄性Wistar大鼠（浙江大學醫學院動物中心提供，清潔級，動物合格證號：201001018）。敏感硫電極和PXS-270離子計購于上海雷磁儀器廠。Sysmex CA-1500購于Sysmex CA-1500公司。硫氫化鈉（NaHS）購于上海第一生化藥業有限公司。

1.2 方法

1.2.1 動物模型及分組 雄性Wistar大鼠24只，6周齡，體質量 190～230g，平均（210±15）g，隨機分為 S（假手術）組、I（缺血-再灌注）組，N（缺血-再灌注+NaHS）組，每組8只。S組僅行剖腹及游離腸系膜上動脈（SMA）術，I和N組剖腹、游離及鉗夾SMA 60min和再灌注120min，建立大鼠腸缺血-再灌注損傷模型。N組在灌注前10min時靜脈注射NaHS 100μmol/kg后按1mg/（kg·h）輸注直到再灌注2h，S和I組靜脈注射相同體積的生理鹽水，作用時間和持續時間均同N組[4-5]。處死大鼠，取血離心分離血漿。

1.2.2 血漿H2S濃度與凝血指標檢測 敏感硫電極法[6]測定血漿H2S濃度，Sysmex CA-1500凝血分析儀測定凝血指標。

1.3 統計學方法 應用SPSS13.0統計軟件，計量資料以均數±標準差（x±s） 表示，多樣本均數比較采用單因素方差分析，多樣本均數間兩兩比較采用q檢驗，相關性采用直線相關分析。

2 結果

與 S 組比較，I組 APTT、PT、TT、D-二聚體增加，FIB、H2S減低（P＜0.01），表現為凝血功能障礙。N 組PT、APTT、TT、D-二聚體低于 I組、高于 S 組（P＜0.01），FIB、H2S 低于 S組、高于 I組（P＜0.01），凝血功能障礙得以改善，見表1。

表1 各組大鼠凝血指標、H2S濃度比較（x±s）

相關性分析顯示，H2S與FIB呈正相關（r=0.758，P＜0.01），與 PT、APTT、TT、D-二聚體呈負相關（r=-0.715、-0.721、-0.689、-0.748，P＜0.01）。

3 討 論

腸缺血-再灌注損傷時，由于氧自由基、炎癥介質（包括細胞因子）大量釋放，內源性H2S產生減少等多種因素作用，大鼠小腸黏膜屏障功能受損，表現為小腸黏膜通透性增加、腸源性細菌移位和內毒素血癥等。

凝血過程包括凝血酶原酶復合物（也稱為凝血酶原激活復合物）的形成、凝血酶原的激活和纖維蛋白的生成三個基本步驟。PT主要反映外源性凝血系統功能，APTT是內源性凝血因子缺乏最可靠的篩選指標，纖維蛋白原一種由肝臟合成的具有凝血功能的蛋白質，纖維蛋白是在凝血過程中，凝血酶切除血纖蛋白原中的血纖肽A和B而生成的單體蛋白質。D-二聚體是纖維蛋白單體經活化因子XIII交聯后，再經纖溶酶水解所產生的一種特異性降解產物，是一個特異性的纖溶過程標記物，來源于纖溶酶溶解的交聯纖維蛋白凝塊。本研究發現，大鼠缺血-再灌注后，APTT、PT、TT、D-二聚體值均增加，FIB 減低，表現為凝血功能障礙。而給予NaHS后PT、APTT、TT、D-二聚體等均降低，FIB增加，與缺血-再灌注組比較差異有統計學意義（P＜0.01），即凝血功能障礙得以改善。H2S 與 FIB 呈正相關，與 PT、APTT、TT、D-二聚體呈負相關。提示H2S與腸缺血-再灌注損傷大鼠凝血功能改善相關。但吳之浩等[7]研究表明，內源性的H2S上調對急性出血壞死性胰腺炎患者TNF-α表達起促炎作用,并上調PAR-1、TF表達，致凝血功能障礙。提示硫化氫對凝血功能的影響可能有疾病的特異性，其具體作用機制尚需進一步研究。

［1］Kang K，Zhao MY，Jiang HC，et al.Role of Hydrogen Sulfide in Hepatic Ischemia-Reperfusion-Induced Injury In Rats［J］.Liver Transpl，2009，15（10）：1306-1314.

［2］ Sodha NR，Clements RT，Feng J，et al.The effects of therapeutic sulfide on myocardial apoptos-is in response to ischemia-reperfusion injury［J］.Eur JCardiothorac Surg，2008，33（5）：906-913.

［3］ Tamizhselvi R，Moore PK，Bhatia M.Hydrogen sulfide acts as amediator of inflammation in acute pancreatitis:in vitro studies using isolated mouse pancreatic acinar cells［J］.J CellMolMed，2007，11（2）：315-326.

［4］盧根林，閆興軍，鄧勇，等.硫化氫在腸缺血-再灌注損傷大鼠肝臟功能障礙中的作用［J］.中華實驗外科雜志，2010，27（7）：907-910.

［5］閆興軍，盧根林，鄧勇，等.硫化氫在腸缺血-再灌注損傷大鼠腸粘膜屏障功能障礙中的作用［J］.中華實驗外科雜志，2010，27（1）：71-74.

［6］耿彬，杜軍保，唐朝樞.敏感硫電極法在測定心血管組織細胞及血漿胱硫醚-γ-裂解酶/硫化氫的應用［J］.北京大學學報（醫學版），2005，37（5）：545-548.

［7］吳之浩，盧根林，鄧勇.硫化氫對急性出血壞死性胰腺炎患者凝血功能的影響［J］.中國鄉村醫藥，2012，19（15）：52-53.