細胞色素P450酶4F2基因多態性對中國人服用華法林起始七天內劑量的影響*

熊筱偉，劉紅，韓璐璐，婁瑩，華潞，李彥，李一石

細胞色素P450酶4F2基因多態性對中國人服用華法林起始七天內劑量的影響*

熊筱偉，劉紅，韓璐璐，婁瑩，華潞，李彥，李一石

目的：研究細胞色素P450酶4F2（CYP4F2, rs2108622）基因多態性對中國漢族人群服用華法林起始七天內劑量的影響。

華法林；CYP4F2基因多態性；初始劑量

(Chinese Circulation Journal, 2014,29:910.)

華法林是目前常用的口服抗凝藥，其抗凝效果同血藥濃度呈正相關性[1]。華法林藥物基因組學的研究明確了基因多態性對服用華法林患者的劑量差異有影響[2]。細胞色素P450酶2C9（CYP2C9），維生素K環氧化物還原酶復合物亞單位1（VKORC1, -1639G＞A）和細胞色素P450酶4F2（CYP4F2, rs2108622）的基因多態性在不同人群中對華法林的穩定劑量均有顯著的影響[3-5]。對華法林初始劑量的影響，目前研究較多的是CYP2C9和VKORC1的基因多態性[6-8]，而有關CYP4F2基因多態性的研究較少。本研究旨在評價CYP4F2基因多態性對中國漢族人服用華法林起始七天（初始階段）劑量的影響。

1 對象與方法

研究對象：本研究入選我院2008-05至2008-10因心臟瓣膜置換和2010-11至2011-12因肺栓塞在我院首次接受華法林抗凝治療，年齡≥18周歲，無肝、腎功能疾病及感染和腫瘤，無嚴重的心功能衰竭，服藥起始七天內國際標準化比值（INR）至少1次進入1.8≤INR≤3.0（治療窗）的患者271例，并檢測其CYP4F2基因多態性。所有患者均簽署書面知情同意書，試驗經由阜外心血管病醫院倫理委員會批準。

實驗室檢測：依地酸（EDTA）抗凝采集患者外周靜脈全血4 ml，用脫氧核糖核酸（DNA）提取試劑盒（天根生化科技有限公司，北京）提取DNA后置于-80℃冰箱待測。利用直接測序的方法檢測CYP4F2基因型。

INR檢測及給藥：檢測患者華法林用藥前及用藥起始七天內每天的INR值。根據INR基線值，初次華法林劑量為2～3 mg，此后每日劑量根據前一日INR值進行調整。患者住院用藥期間均予以均衡適量飲食。

臨床觀察指標：記錄所有患者年齡、性別、身高、體重，體表面積等人口學信息。記錄每日華法林劑量和INR檢測結果以及每位患者服藥后INR首次進入治療窗的時間和服藥起始七天內華法林的平均劑量。并記錄主要的合并疾病和用藥。

統計方法：利用計算機SPSS 17.0統計軟件完成。計量資料以均數±標準差表示。Hardy-Weinberg遺傳符合度及計數資料用卡方檢驗；兩組間比較用獨立樣本t檢驗，非正態分布數據用非參數秩和檢驗。多元線性回歸分析性別，年齡，體表面積，基因多態性和合并疾病及用藥對華法林劑量的影響。P＜0.05被認為差異有統計學意義。

2 結果

2.1患者人口學特征及CYP4F2基因多態性分布

CYP4F2基因多態性的CC、CT和TT基因型基因變異比例分別為：57.20%，34.31%，8.49%，基因多態性分布符合Hardy-Weinberg規律（P＞0.05），該人群符合群體基因遺傳平衡。CC、CT和TT各基因型患者的性別、年齡、身高、體重等基線水平以及各基因型間合并疾病和合用藥情況差異均無統計學意義（P＞0.05）。表1

表1 271例患者人口學特征及CYP4F2基因多態性分布[例(%),

表1 271例患者人口學特征及CYP4F2基因多態性分布[例(%),

注：CYP4F2：細胞色素P450酶4F2

CC基因型(n=155) CT基因型(n=93) TT基因型(n=23)基因變異比例 (%) 57.20 34.31 8.49男74 (47.7) 41 (44.1) 10 (43.5)女81 (52.3) 52 (55.9) 13 (56.5)年齡 (歲) 52.02±12.49 52.15±13.14 51.00±14.78身高 (cm) 163.79±8.23 164.98±8.19 163.83±7.24體重 (kg) 63.50±12.14 63.41±11.83 62.30±11.34體表面積 (m2) 1.66±0.19 1.67±0.19 1.64±0.17合并房顫 47 (30.3) 28 (30.1) 8 (34.8)未合并房顫 108 (69.7) 65 (69.9) 15 (65.2)合用胺碘酮 25 (16.1) 21 (22.6) 4 (17.4)未合用胺碘酮 130 (83.9) 72 (77.4) 19 (82.6)合用他汀 39 (25.2) 25 (26.9) 5 (21.7)未合用他汀 116 (74.8) 68 (73.1) 18 (78.3)

2.2CYP4F2基因多態性的CC、CT和TT各基因型華法林初始劑量及INR首次進入治療窗時間的比較

TT、CT/TT基因型的平均華法林初始劑量顯著高于CC基因型（P＜0.05），差異具有統計學意義。TT基因型的INR首次進入治療窗的時間顯著高于CC基因型（P＜0.05），差異具有統計學意義。表2

表2 CC、CT和TT各基因型的華法林初始劑量及INR首次進入治療窗時間的比較

表2 CC、CT和TT各基因型的華法林初始劑量及INR首次進入治療窗時間的比較

注：與CC基因型相比*P＜0.05。INR：國際標準化比值

例數 華法林初始劑量(mg/d) INR首次進入治療窗時間 (d) CC基因型 155 3.20±0.75 3.41±1.60 CT基因型 93 3.37±0.91 3.67±1.51 TT基因型 23 3.67±0.75* 4.22±1.60*CT/TT基因型 116 3.43±0.89* 3.78±1.53

2.3多元線性回歸分析結果

除外患者性別，年齡，身高，體重，CYP2C9和VKORC1基因多態性以及合并疾病和合用藥等多種因素，CYP4F2基因多態性對患者華法林起始七天內華法林劑量的影響仍有統計學意義（回歸系數0.21，P=0.003）。

3 討論

我們的研究發現，在中國漢族人群服華法林后的起始七天內，CYP4F2基因多態性的CC基因型攜帶者INR進入治療窗時所需的華法林劑量與CT/TT基因型攜帶者相比較低，差異具有統計學意義，且不受其他因素的影響。該研究結果同國內有關CYP4F2基因多態性對華法林穩定劑量影響的研究結果一致[9,10]。本研究數據也顯示，CYP4F2基因多態性對華法林初始劑量的影響主要存在于CC和TT兩基因型內，CC基因型攜帶者進入INR治療窗所需要的時間短于TT基因型攜帶者，差異具有統計學意義（P＜0.05）。提示在中國漢族人口服華法林抗凝治療的起始階段，攜帶CC基因型的中國人群對華法林抗凝治療反應的敏感性較高。

在基因多態性對華法林初始作用影響的研究中，婁瑩等[7]研究發現，CYP2C9和VKORC1對于肺栓塞或者心臟瓣膜置換術后患者初始階段華法林的抗凝作用有影響。CYP4F2是維生素K1的代謝酶，其基因變異可以通過影響體內維生素K的水平從而影響維生素K相關的凝血因子水平，繼而影響個體間的華法林劑量[11]。Caldwell等[12]于2008年首次發現CYP4F2基因多態性影響患者華法林的穩定劑量，并在隨后的多個研究中得到證實[3-5]。有研究提示，初始階段服用華法林的患者的維生素K1的水平可能與穩定劑量情況下的維生素K1的水平不同[13]，而CYP4F2在維生素K1循環中的作用也使得其基因多態性對華法林抗凝作用的影響在初始階段和穩定階段也可能不同。在一項有關CYP4F2基因多態性對華法林初始作用影響的研究中[14]，人們并未發現CYP4F2基因多態性對華法林抗凝患者的劑量和INR進入治療窗的時間有明顯的影響。而在服用華法林抗凝治療的中國漢族人群中，我們研究發現，在華法林服用的初始七天內，同CT/TT基因型攜帶者相比較，CC基因型攜帶者能在服用較低華法林劑量的情況下，在較短的時間內即可進入INR的治療窗，顯示出CC基因型攜帶者較高的華法林治療的敏感性。

綜上所述，本研究發現，CYP4F2的基因多態性不僅對華法林的穩定劑量有影響，而在華法林抗凝治療的中國漢族人群中，其對華法林的初始劑量和抗凝作用也具有顯著的影響，該發現對初始階段華法林的個體化治療具有一定的指導意義。

[1] 黃巖, 黃一玲, 田蕾, 等. 健康男性單次口服華法林血藥濃度與凝血指標的相關性研究. 中國循環雜志, 2005, 20: 375-377.

[2] Krynetskiy E, McDonnell P. Building individualized medicine: prevention of adverse reactions to warfarin therapy. J Pharmacol Exp Ther, 2007, 322: 427-434.

[3] Takeuchi F, McGinnis R, Bourgeois S, et al. A genome-wide association study comfirms VKORC1, CYP2C9, and CYP4F2 as principal genetic determinants of warfarin dose. PLos Genet, 2009, 5: e1000433. doi: 10. 1371/journal. pgen. 1000433.

[4] Carlquist JF, Horne BD, Mower C, et al. An evaluation of nine genetic variants related to metabolism and mechanism of action of warfarin as applied to stable dose prediction. J Thromb Thrombolysis, 2010, 30: 358-364.

[5] Liang R, Li L, Li C, et al. Impact of CYP2C9*3, VKORC1-1639, CYP4F2rs2108622 genetic polymorphism and clinical factors on warfarin maintenance dose in Han-Chinese patients. J Thromb Thromblysis, 2012, 34: 120-125.

[6] Schwarz UI, Ritchie MD, Bradford Y, et al. Genetic determinants of response to warfarin during initial anticoagulation. N Engl J Med, 2008, 358: 999-1008.

[7] 婁瑩, 劉紅, 韓璐璐, 等. CYP2C9和VKORC1基因多態性對肺栓塞患者華法林初始抗凝療效的影響. 中國臨床藥理學雜志, 2012, 28: 256-259.

[8] Zhong SL, Liu Y, Yu XY, et al. The influence of genetic polymorphisms and interacting drugs on initial response to warfarin in Chinese patients with heart valve replacement. Eur J Clin Pharmacol, 2011, 67: 581-590.

[9] Bejarano-Achache I, Levy L, Mlynarsky L, et al. Effects of CYP4F2 polymorphism on response to warfarin during induction phase: a prospective, open-label, observational cohort study. Clin Ther, 2012, 34: 811-823.

[10] Li JH, Ma GG, Zhu SQ, et al. Correlation between single nucleotide polymorphisms in CYP4F2 and warfarin dosing in chinese valve replacement patients. J Cardiothorac Surg, 2012, 7: 97.

[11] McDonald MG, Rieder MJ, Nakano M, et al. CYP4F2 is a vitain K1 oxidase: an explanation for altered warfarin dose in carriers of the V433M variant. Mol Pharmacol, 2009, 75: 1337-1346.

[12] Caldwell MD, Awad T, Johnson JA, et al. CYP4F2 genetic variant alters required warfarin dose. Blood, 2008, 111: 4106-4112.

[13] Cushman M, Booth SL, Possidente CJ, et al. The association of vitamin K status with warfarin sensitivity at the onset of treatment. Br J Haematol, 2001, 112: 572-577.

[14] Liang R, Li L, Li C, et al. Impact of CYP2C9*3, VKORC1-1639, CYP4F2rs2108622 genetic polymorphism and clinical factors on warfarin maintenance dose in Han-Chinese patients. J Thromb Thrombolysis, 2012, 34: 120-125.

Effect of Cytochrome P-450 4F2 Gene Polymorphisms in Patients With Warfarin for Initial Doses in 7 Days

XIONG Xiao-wei, LIU Hong, HAN Lu-lu, LOU Ying, HUA Lu, LI Yan, LI Yi-shi.
Key Laboratory of Clinical Trials Research in Cardiovascular Drugs, Ministry of Health, State Key Laboratory of Cardiovascular Disease, Cardiovascular Institute and Fu Wai Hospital, CAMS and PUMC, Beijing (100037), China

LI Yi-shi, Email: lchyl_fuwai@sina.com

Objective: To study the effect of cytochrome P-450 4F2 (CYP4F2, rs2108622) gene polymorphisms in patients with warfarin for initial doses in 7 days.Methods: A total of 271 patients treated by warfarin were studied. The CYP4F2 gene polymorphisms were assessed by real-time PCR, the average initial warfarin doses in 7 days and the time of international normalized ratio (INR) fi rst arrived to therapeutic range were recorded. The differences of initial warfarin doses and the time of INR fi rst arrived to therapeutic range among CYP4F2 gene polymorphisms of CC, CT and TT genotypes were analyzed by statistical method.Results: The average initial warfarin doses among CYP4F2 polymorphisms of TT and CT/TT were higher than CC, P＜0.05. The times of INR first arrived to therapeutic range in TT genotype was higher than CC genotype, P＜0.05. With adjusted gender, age, body height and weight, CYP2C9 and VKORC1 polymorphisms, conditions of disease and medication, the effect of CYP4F2 gene polymorphisms on initial warfarin doses in 7 days were still with the statistic meaning (regression coeff i cient=0.21, P=0.003).Conclusion: CYP4F2 polymorphisms inf l uenced the initial warfarin doses in 7 days in relevant patients.

Warfarin; Cytochrome P-450 4F2 gene polymorphisms; Initial dose

2014-05-29）

（編輯：王寶茹）

2010年國家臨床重點專科建設項目——《衛生部重點實驗室項目》；《大品種藥物IV期臨床試驗及新藥臨床試驗審評研究技術平臺》（2011ZX09304）

100037 北京市，北京協和醫學院 中國醫學科學院 國家心血管病中心 阜外心血管病醫院 衛生部心血管藥物臨床研究重點實驗室

熊筱偉 博士研究生 主要從事臨床藥理研究 Email：bddwxxw@aliyun.com 通訊作者：李一石 Email: lchyl_fuwai@sina.com

R54

A

1000-3614（2014）11-0910-03

10.3969/j.issn.1000-3614.2014.11.014

方法：利用Real-time PCR的方法分析271例服用華法林抗凝患者的CYP4F2基因多態性，記錄患者服用華法林七天內的平均華法林初始劑量，國際標準化比值（INR）首次進入治療窗的時間。統計學方法分析CYP4F2基因多態性的CC，CT和TT各基因型間初始劑量和INR首次進入治療窗的時間差異。

結果：CYP4F2基因多態性的TT、CT/TT基因型的平均華法林初始劑量顯著高于CC基因型（P＜0.05），差異具有統計學意義。TT基因型的INR首次進入治療窗的時間顯著高于CC基因型（P＜0.05），差異具有統計學意義。除外患者性別，年齡，身高，體重，CYP2C9和VKORC1基因多態性以及合并疾病和合用藥等多種因素，CYP4F2基因多態性對患者華法林起始七天內華法林劑量的影響仍有統計學意義（回歸系數0.21，P=0.003）。

結論：在服用華法林的中國人中，CYP4F2基因多態性對華法林起始七天內的劑量有影響。