IgA腎病與低相對分子質量尿蛋白的關系＊

錢白音，魯紅云，李 雙，張 樺，李中和，鄒和群

（1.中山大學附屬第五醫院腎內科，廣東珠海519000；2.南方醫科大學第三附屬醫院腎內科，廣州510630）

IgA腎病是全球范圍內最常見的腎小球疾病，也是導致終末期腎衰竭的一個主要原因[1]。因此，尋求有效的方法阻止／延緩IgA腎病的進展意義重大。尿蛋白水平是影響IgA腎病病情進展的指標，除了尿蛋白的量與持續時間，尿蛋白成分也與IgA腎病的預后有關[2]。有研究表明，低相對分子質量尿蛋白是IgA腎病預后不良的指標[3]。低相對分子質量尿蛋白與IgA腎病之間的關系正越來越受到人們的重視。故本文選用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）法檢測34例同步行腎活檢診斷明確IgA腎病患者尿液中尿蛋白相對分子質量，以了解低相對分子質量尿蛋白在IgA腎病患者發病機制中的作用，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇近期收治的中山大學附屬第五醫院及南方醫科大學第三附屬醫院腎內科，經臨床、腎活檢首次診斷明確，尚未接受過任何治療，并除外繼發性腎病等的IgA腎病患者34例，男13例，女21例，年齡13～42歲，平均29.6歲。排除標準：（1）年齡小于13歲或大于65歲的患者；（2）紫癜性腎炎、狼瘡性腎炎、乙型肝炎相關性腎炎等繼發性腎病，其他腎臟疾病及（或）高血壓、糖尿病等其他疾病患者。

1.2 儀器與試劑 垂直式平板電泳槽購自北京崇文東方儀器廠，低相對分子質量 Marker購自Bio-Rad公司，肌酐（Scr）試劑盒（肌氨酸氧化酶法）購自上海科華生物股份有限公司，尿總蛋白檢測（鄰苯三酚紅法）試劑盒購自廣州標佳科技有限公司。所有試劑均為分析純。

1.3 方法

1.3.1 腎組織病理標準 腎小管間質病理參數半定量積分采用Katafuchi等的標準：腎小管間質積分0～9分，包括間質炎性細胞浸潤（0～3分）、間質纖維化（0～3分）和腎小管萎縮（0～3分）。

1.3.2 SDS-PAGE檢測 （1）凝膠的配制。分別配制10%分離膠和4%的濃縮膠，將分離膠和濃縮膠依次加入0.75mm的垂直電泳板中。（2）電泳方法。尿標本先進行蛋白定性，根據蛋白定性的結果決定樣本電泳所需的上樣量（表1）。加樣后在200V電壓下電泳1～2h。以溴酚藍作為電泳指示劑。（3）考馬斯亮藍染色及脫色。電泳結束后，凝膠用考馬斯亮藍R-250進行染色，并脫色。

表1 尿蛋白定性與上樣量的關系

1.3.3 相對分子質量的測定 電泳、染色結束后，測量蛋白質及示蹤染料的遷移距離，計算相對遷移率（relative mobility，Rf）值：Rf＝蛋白質的遷移距離／示蹤染料的遷移距離；以已知蛋白質低相對分子質量Marker繪坐標圖，通過測定未知蛋白質的Rf值便可在標準曲線上讀出它的相對分子質量。

1.3.4 尿蛋白SDS-PAGE分型 依尿蛋白相對分子質量分為：小球性尿蛋白組（相對分子質量大于或等于70×103，包括高、中相對分子質量尿蛋白），生理性尿蛋白組（相對分子質量為70×103，僅為中相對分子質量尿蛋白），混合性尿蛋白23×103組（包括高、中、低相對分子質量尿蛋白，最低相對分子質量為23×103），混合性尿蛋白10×103組（包括高、中、低相對分子質量尿蛋白，最低相對分子質量為10×103）[4]。

1.4 統計學處理 采用SPSS17.0統計軟件進行分析，計量資料以±s表示，兩組間比較用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 SDS-PAGE尿蛋白分型結果 根據SDS-PAGE法，IgA腎病患者尿蛋白可依相對分子質量分為4組類型：小球性尿蛋白組5例，生理性尿蛋白組4例，混合性尿蛋白23×103組10例，混合性尿蛋白10×103組15例。

2.2 兩組腎小管間質病理損害比較 混合性蛋白尿10×103組較23×103組腎小管間質損害嚴重，間質炎性細胞浸潤、間質纖維化及腎小管萎縮均明顯增加。

圖1 根據SDS-PAGE分型的4種尿蛋白類型

2.3 兩組腎小管間質損害評分比較 IgA腎病混合性尿蛋白10×103組患者與混合性尿蛋白23×103組患者腎小管間質損害評分分別為（5.13±2.85）分與（2.30±2.41）分，前者與后者比較，腎小管間質損害評分明顯升高（P＜0.05）。

2.4 兩組24h尿蛋白定量比較 IgA腎病混合性尿蛋白10×103組患者與混合性尿蛋白23×103組患者24h尿蛋白定量分別為（5.14±3.15）g與（3.12±1.55）g，前者與后者比較，24h尿蛋白定量明顯增加（P＜0.05）。

圖2 混合性蛋白尿10×103組腎小管間質損害較嚴重[過碘酸六胺銀染色（PASM）-膠原纖維染色（Masson），×100]

圖3 混合性蛋白尿23×103組腎小管間質損害較輕（PASM-Masson，×100）

2.5 兩組血清Scr水平比較 IgA腎病混合性尿蛋白10×103組患者與混合性尿蛋白23×103組患者Scr水平分別為（165.8±121.83）μmol／L與（80.00±35.51）μmol／L，前者與后者比較，Scr水平明顯升高（P＜0.05）。

3 討 論

IgA腎病是一種進展性疾病，多達40%的患者最終發展為終末期腎病[5]，是慢性腎衰竭的最常見病因。其發展和預后不僅與腎小球本身的損害有關，更與腎小管間質病變的嚴重程度密切相關[6-7]。雖然學者們進行了大量研究，但IgA腎病發病機制至今尚未完全明確，且缺乏有效的治療方法，仍是目前困擾著腎臟病學者的一個重要難題[8]。

有研究表明，IgA腎病尿蛋白水平與腎功能損害進展程度呈正相關[9]，其既是反映腎功能損害的指標，也是加速腎功能惡化的重要因素[10-11]。不少尿蛋白對腎臟均有毒性作用，可能參與了腎小管及間質的損傷[12-13]。由于異常尿蛋白的含量有時不高，所以必須依靠高靈敏度蛋白尿組成成分的檢測方法。尿蛋白電泳作為一種高靈敏度無創性診斷工具，能夠比較全面地觀察患者尿液中蛋白組分含量及變化[14]。SDS-PAGE是根據蛋白質所帶電荷及其相對分子質量大小和形狀差異，在電場作用下產生不同的移動速率而被分離的方法，將尿蛋白按其相對分子質量的大小順序彼此分離，來判斷患者的尿蛋白譜（尿蛋白的性質與構成）。故本文選用SDS-PAGE垂直式平板電泳法，分析尿標本中蛋白質的組分，探討其在IgA腎病中的臨床意義及可能的病理生理作用。研究發現，低相對分子質量尿蛋白與IgA腎病患者的進展和預后關系緊密，低相對分子質量尿蛋白在IgA腎病中的重要性日益受到關注[15-16]。有研究表明，腎小管間質損害在IgA腎病進展中起重要作用，可加速腎功能惡化，對于IgA腎病預后具有重要影響[17-19]。學者們指出，低相對分子質量尿蛋白生理情況下可不受限制地從腎小球濾過膜濾出，并被腎小管上皮細胞全部重吸收[20-21]。隨疾病的發展，腎小球濾過膜選擇性受損，中、高相對分子質量尿蛋白從腎小球漏出至腎小管腔，他們之間及與低相對分子質量尿蛋白之間存在腎小管重吸收的競爭，當重吸收機制出現飽和時，生理情況下可重吸收的低相對分子質量尿蛋白便在這種病理情況下逃脫腎小管的重吸收而出現在尿液中。而腎近曲小管上皮細胞也在持續的濾出蛋白超負荷下受到損害，發生結構破壞，并激活細胞因子及生長因子瀑布效應，引起腎間質細胞浸潤及纖維化，從而導致腎小管上皮細胞的重吸收機制進一步受損，導致低相對分子質量尿蛋白逃脫腎小管重吸收現象加重。因此，尿液中的低相對分子質量蛋白與小管細胞損害程度及整體小管間質損害緊密相關，理論上能較可靠地反映IgA腎病患者小管間質損害的嚴重程度。因此，本研究重點比較了混合性蛋白尿23×103組和混合性蛋白尿10×103組兩種類型尿蛋白患者的腎臟病理損害及臨床指標。本研究發現，腎小管間質損害評分、24h尿蛋白定量及Scr水平，10×103組均較23×103組升高，說明相比較于23×103組尿蛋白，10×103組尿蛋白與腎小管間質損害、腎功能損害更密切相關。已有學者發現[15]，相對分子質量為11.8×103的β2微球蛋白與IgA腎病患者尿蛋白及Scr水平緊密相關，可指導IgA腎病患者的預后，與本研究結果一致。因為腎活檢是一種侵襲性檢測手段，并只能反映很少一部分腎組織的狀況。因此，SDS-PAGE作為一種無創性檢測手段，10×103組尿蛋白對判斷IgA腎病患者腎小管間質損害的程度具有重要的診斷意義，可以作為判斷IgA腎病患者腎小管間質損害程度的指標。但本研究因病例數較少，IgA腎病與低相對分子質量尿蛋白的關系尚需進一步的研究。

綜上所述，SDS-PAGE分型10×103組尿蛋白對判斷IgA腎病患者腎小管間質損害程度有臨床意義，其作為一種非有創性檢測手段，可以作為判斷IgA腎病患者腎小管間質損害程度的指標。

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