獺兔源性大腸桿菌對小鼠的致病性研究

王艷萍，董 林，徐倩倩，郭時金，沈志強

（1.山東省濱州畜牧獸醫研究院，山東 濱州256600；2.山東綠都安特動物藥業有限公司，山東 濱州256600）

大腸桿菌O123是主要寄生于人和動物腸道內的一種細菌，本文中大腸桿菌O123是由規模化獺兔養殖場分離的一株致獺兔大腸桿菌性腹瀉的一種大腸桿菌，該菌主要引起的幼兔、仔兔腸道傳染病，以水樣、膠凍樣糞便和嚴重脫水為主要特征。

1 試驗材料

1.1 試驗菌株 兔源大腸桿菌，分離自山東省濱州市某大型獺兔養殖場，經山東省濱州畜牧獸醫研究院鑒定為大腸桿菌O123。

1.2 實驗動物 小鼠60只，體重18～22 g，購自山東省實驗動物中心。

2 試驗方法

2.1 小鼠致病性試驗 將60只小鼠隨機分成6組，每組10只。把大腸桿菌O123進行增菌培養，使其含菌量為3.4×108、1.7×108、0.85×108、0.425×108和0.225×108，按0.5mL/只腹腔接種小鼠，對照組接種營養肉湯，攻毒后，連續觀察7 d，記錄精神狀態、飲欲、食欲、發病及死亡情況。

2.2 臨床觀察 對感染后的小鼠每日觀察臨床癥狀，對因發病而死亡小鼠立刻剖檢，存活小鼠7日后剖檢，觀察病理變化，無菌取心、肝、脾、肺等在麥康凱平板上劃線進行病原分離，于37℃溫箱培養24～48 h后進行革蘭染色、鏡檢，觀察所分離菌株是否為攻毒細菌。若是，則證明該細菌具有致病性。

2.3 病理組織學檢查 將心、肝、脾、肺、腎、腸等器官放入福爾馬林溶液固定，經酒精梯度脫水、石蠟包埋、切片、H.E.染色，顯微鏡下進行病理組織學觀察[1]。

3 結果與分析

3.1 臨床癥狀表現 以大腸桿菌O123腹腔注射小鼠，約半小時后出現精神委靡、食欲不振、眼瞼粘連、扎堆等現象，對照組小鼠沒出現明顯臨床癥狀。

3.2 死亡情況 12 h后出現陸續死亡，第1組全部死亡，第2組死亡率7只，第3組死亡3只，第4組死亡1只，第5組全部存活。對照組小鼠沒有出現死亡。取攻毒死亡小鼠心、肝、脾、肺、腸系膜淋巴結等在麥康凱平板上劃線培養，涂片染色，鏡檢，均發現所接種細菌。

3.3 剖檢觀察 剖檢注射兔大腸桿菌O123的小鼠小腸黏膜水腫、變薄，有出血點，其他臟器未見明顯眼觀病變（見中插彩版圖1）。

3.4 組織病理學觀察 十二指腸廣泛充血、出血，腸上皮細胞變形和壞死，絨毛變短、脫落，腸腔內有大量脫落的上皮細胞，基底膜下層水腫（見中插彩版圖2）。

4 討論

2011年，李基棕[2]做了豬場環境大腸桿菌對小鼠的致病性研究，發現，小鼠出現精神委靡、拉稀、眼簾黏連、消瘦、被毛蓬亂等臨床癥狀，致死率達51.3%，其中來源于污水和空氣的樣本菌株對小鼠的致死率最高達66.7%。剖檢因攻毒死亡小鼠發現，肝臟腫大、邊緣呈暗紫色、脾臟腫大、十二指腸水腫等病變。病理組織學觀察可見，肺臟出現毛細血管充血、肺氣腫及肺泡間隔增寬，心肌纖維排列紊亂、斷裂，肝細胞腫大、變性及肝竇出血，十二指腸腸絨毛脫落等病變，上皮細胞變性壞死。說明，豬場環境大腸桿菌對小鼠致病性較強，以小鼠建立動物模型研究其致病機制對大腸桿菌病的診斷和防治具有重要意義。

本試驗以兔源大腸桿菌對昆明系小鼠攻毒結果，發現除十二指腸出現病變外，其余各器官均出現明顯病理變化，說明兔源大腸桿菌O123適合用于腹瀉模型的制作。

圖1 小鼠剖檢

圖2 十二指腸組織

5 結論

兔源大腸桿菌以腹腔注射0.5mLO123可用于制作小鼠腹瀉模型。

[1]歐德淵，李詩舉，王群輝，等.高致病性豬藍耳病的病理學觀察[J].貴州畜牧獸醫，2008，32（6）：3-4.

[2]李基棕，周碧君，王開功，等.豬場環境大腸桿菌對小白鼠的致病性研究[J].貴州農業科學，2011，6（39）：147-149.