密環菌多糖對小鼠急性肝損傷的保護作用

沈明花，金梅花

（延邊大學基礎醫學院，吉林延吉133000）

密環菌多糖對小鼠急性肝損傷的保護作用

沈明花，金梅花

（延邊大學基礎醫學院，吉林延吉133000）

研究密環菌多糖對D-氨基半乳糖致肝細胞損傷的影響。D-氨基半乳糖誘導小鼠急性肝損傷，比色法測定血清丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉移酶（AST）、白蛋白（Alb）、谷胱甘肽S轉移酶（GST）活力和肝組織超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活性以及丙二醛（MDA）含量。密環菌多糖抑制急性肝損傷小鼠ALT、AST和GST活性的升高，并提高SOD、GSH-Px活力和ALB，同時顯著降低MDA含量。密環菌多糖具有一定的肝保護作用，其機制可能與抗氧化作用有關。

密環菌多糖；D-氨基半乳糖；保肝

密環菌（Armillariella mellea），又名榛蘑，屬擔子菌亞門、白蘑科、蜜環菌屬，主要分布于我國的吉林、黑龍江、四川、云南等地。作為一種食藥兼用的真菌，它具有舒風活絡、強筋壯骨、明目的功效，民間常被用于治療癲癇、腰腿疼痛、佝僂病等。隨著對蜜環菌的生物活性的深入研究，相繼出現了密環菌的抗炎[1]、抗氧化[2]、抗腫瘤[3]、溶栓[4]、免疫調節[5]等報道。但有關密環菌的肝保護作用的研究甚少。本研究利用D-氨基半乳糖致肝損傷模型，探討密環菌多糖的肝保護作用，并初步探討其機理。

1 材料與試劑

1.1 藥材與試劑

野生密環菌采自吉林省長白山地區。D-氨基半乳糖購置Sigma公司；聯苯雙酯滴丸（DDB）：北京協和藥廠；ALT、AST、ALB、MDA、GSH-PX、SOD、GST、蛋白質測定試劑盒購于南京建成科技有限公司。

1.2 實驗動物

昆明種小鼠，18 g～22 g，雌雄各半，由延邊大學醫學院動物科提供。

1.3 儀器

722型分光光度計：上海精密科學儀器有限公司；RT-2100型酶標儀：深圳雷杜公司；SHZ-2000型雙配套循環水式多用真空泵：河南省鞏義市英峪予華儀器廠；DGF30型電熱鼓風干燥箱：南京實驗儀器廠；5308型全自動離心機：Sigma公司產品。

2 方法

2.1 密環菌多糖

水提醇沉法提取多糖，其得率為2.2%。

2.2 實驗動物分組及處理

將60只小鼠隨機分為6組，設正常組、模型組、聯苯雙酯組、用藥低、中、高劑量組（50、100、200mg/kg）。每日灌胃給藥1次，連續7d，聯苯雙酯組為150mg/kg體質量；用藥組灌胃劑量分別為50、100、200mg/kg；正常組和模型組灌等量的生理鹽水。末次給藥1 h后，除正常組小鼠腹腔注射等體積生理鹽水外，其余各組按500mg/kg體質量腹腔注射D-GalN，造成肝損害模型。禁食，不禁水條件下，20 h后摘眼球取血，分離血清測轉氨酶、GST、白蛋白，取肝臟測定各種抗氧化指標。

2.3 測定方法

均按試劑盒說明書操作。

2.4 統計學處理

用SPSS統計軟件處理，數據以均數±標準差（x·s）表示，組間均數比較行單因素方差分析。

3 結果

3.1 密環菌多糖對ALT、AST、GST及Alb的影響

由表1可知，模型組AST、ALT和GST活性均顯著高于正常組，而ALB含量顯著低于正常組，表明肝損傷模型制備成功。聯苯雙酯組和中、高劑量用藥組對D-GalN誘發的肝損傷小鼠ALT、AST及GST活性的升高均有明顯的降低作用，并顯著提高血清白蛋白水平。

表1 榛蘑多糖對ALT、AST、GST及Alb的影響Table1 Effect of Armillariella mellea polysaccharides on serum ALT，AST，GST and albumin

3.2 密環菌多糖對SOD、GSH-Px及MDA的影響

結果見表2。模型組與正常組比較，肝組織SOD和GSH-Px活性顯著降低，而MDA含量顯著高于正常組。聯苯雙酯組和各劑量用藥組SOD和GSH-Px活性高于模型組，而MDA含量顯著低于模型組。

表2 榛蘑多糖對SOD、GSH-Px及MDA的影響Table2 Effect of Armillariella mellea polysaccharides on SOD，GSH-PX and MDA

4 討論

肝炎是由病毒、藥物、酒精等多種因素引起的以肝細胞損傷為主的病理變化過程。D-GalN引起的動物肝損傷在病理學改變和生化指標的變化均與人類病毒性肝炎極為相似[6]，因此它所致的肝損傷模型是公認的實驗動物模型。D-GalN致肝損傷的機制較復雜。其一，它作為肝細胞磷酸尿苷的干擾劑，使磷酸尿苷耗竭，導致糖原、核酸、蛋白質等物質代謝發生障礙，引起肝細胞損傷甚至壞死。當D-GalN進入體內誘發肝細胞損傷或壞死時，酶迅速釋放入血，故檢測血清中的ALT、AST和GST活性可反映肝細胞的損傷程度。實驗結果顯示，密環菌多糖對D-GalN所致的血清ALT、AST和GST活性的升高有抑制作用，并提高肝合成白蛋白的能力。這就提示密環菌拮抗D-GalN誘導的肝細胞的損傷，提高肝功能，具有保肝作用。D-GalN引起細胞損傷的另一機制是由于自由基及其啟動的脂質過氧化連鎖反應[7]。本實驗模型組SOD、GSH-Px活性明顯下降，而MDA含量顯著高于正常組，這就說明D-GalN引起自由基的增多和脂質過氧化作用加強，導致機體抗氧化酶的消耗和脂質過氧化產物的增多。以不同的劑量處理密環菌多糖后肝組織SOD、GSH-Px活性明顯升高，MDA含量顯著降低，說明密環菌多糖有抗氧化作用。我們報道過榛蘑多糖的抗氧化作用，它可清除清除·OH和DPPH自由基，提高肝組織SOD、GSH-Px、CAT活性并抑制肝組織MDA的生成[8]，這與本實驗結果一致。至于本實驗中密環菌多糖的量效關系不明顯的問題，可解釋為有可能所設定的藥物的濃度范圍過小而引起的。雖然密環菌多糖的量效關系不明顯，但中、高劑量組的保肝作用和抗氧化能力達到或超過陽性對照組聯苯雙酯的水平。

此外，我們曾研究過密環菌多糖對CCl4所致小鼠急性肝損傷具有保護作用[9]。CCl4誘導的肝損傷小鼠以榛蘑多糖灌胃時，可降低由CCl4所致的血清ALT和AST活性的升高，并提高肝組織GSH-Px活性和GSH含量，同時抑制MDA的生成。D-GalN和CCI4均可作為肝損傷誘導劑，它們的作用機制雖然不同，但以密環菌多糖處理時發現具有類同的效果，即保肝作用。再結合密環菌多糖的抗脂質過氧化作用，我們初步認為此種抗氧化作用有可能作為密環菌多糖保肝機制之一。

[1]Wu SJ,Tsai J Y,Lai M N,et al.Armillariella mellea shows anti-inflammatory activity by inhibiting the expression of NO,iNOS,COX-2 and cytokines in THP-1 cells[J].Am J Chin Med,2007,35(3): 507-516

[2]Ng L T,Wu S J,Tsai JY,et al.Antioxidant activities of cultured Armillariella mellea[J].Prikl Biokhim Mikrobiol,2007,43(4):495-500

[3]Sang Beom Kim,Gun Woo Lee,Hye Young Kim,et al.Inhibitive Effect of Mouse Sarcoma180 by Crude Polysaccharide Extracted from Fruiting Body of Ammillaria mettea[J].The Korean Journal of Mycology,2006,34(2):98-104

[4]Lee SY,Kim JS,Kim JE,et al.Purification and characterization of fibrinolytic enzyme from cultured mycelia of Armillaria mellea[J]. Protein Expr Purif,2005,43(1):10-17

[5]Sun Y,Liang H,Zhang X,et al.Structural elucidation and immunological activity of a polysaccharide from the fruiting body of Armillaria mellea[J].Bioresour Technol,2009,100(5):1860-1863

[6]KEPPLER D,LESCH R,REUTTER W,et al.Experimental hepatitis induced by D-galactosamine[J].Exp Mol Pathol,1968(9):279-290

[7]魏靜元,張馨木,趙榮梅,等．抑肽酶對D-氨基半乳糖大鼠急性肝損傷的保護作用[J].分子科學學報,2007,23(3):194-197

[8]沈明花,崔海丹,王欣彤.榛蘑多糖的抗氧化作用研究[J].食品科技,2010,35(5):77-79

[9]崔海丹,沈明花.榛蘑多糖對小鼠急性肝損傷的保護作用[J]食品科技,2011,36(10):170-172

Protective Effects of Armillariella mellea Polysaccharides on Injured Liver Induced by D-galactosamine

SHEN Ming-hua，JIN Mei-hua
（Medical College，Yanbian University，Yanji133000，Jilin，China）

To investigate the protective effects of polysaccharides from Armillariella mellea on injured liver induced by D-galactosamine（D-GalN）.D-GalN was used to induce the liver injury in mice.The levels of ALT，AST，albumin and GST in serum，the activities of SOD，GSH-Px and MDA in liver homogenates were investigated using the colorimetric method.Armillariella mellea polysaccharides could reduce the elevated ALT，AST and GST，increase albumin content in serum of mice with liver injury，inhance the activities of SOD，GSHPx，and decrease the elevated MDA concentration in liver.Armillariella mellea polysaccharides have the protective effects on the acute chemical liver injury in mice.The effects may be due to its antioxidant activity.

Armillariella mellea polysaccharides；D-GalN；hepatoprotective

10.3969/j.issn.1005-6521.2014.03.025

2012-10-22

國家自然科學基金資助項目（No.30760150）

沈明花（1970—），女（朝鮮），副教授，博士，食用菌生物活性研究。