上頜矢狀擴弓的四環(huán)素熒光積分光密度分析

左艷萍，苑迎嬌，2，劉 昕，劉亞非，尉 靜，趙利霞

(1.河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院口腔正畸科，河北 石家莊 050031；2.皖南醫(yī)學院附屬弋磯山醫(yī)院口腔醫(yī)學中心，安徽 皖南 241001；3.河北醫(yī)科大學研究生學院，河北 石家莊 050017)

1 材料與方法

1.1 動物分組：選擇8周齡健康新西蘭大白兔15只 (由河北省實驗動物中心提供)，體質(zhì)量1.5～1.7kg。單籠喂養(yǎng)觀察1周后，所有動物均進食顆粒狀飼料,自由攝食飲水。將15只處于生長發(fā)育期的新西蘭大白兔隨機分為2組，實驗組8只，對照組7只。實驗組新西蘭大白兔全天戴自制的上頜矢狀擴弓矯治器，對照組不做任何處理，自然生長。

圖1 矢狀擴弓裝置

2 結(jié) 果

實驗組由于矢狀方向擴弓后新骨的沉積，可以在類骨基質(zhì)中看到沿牽張方向排列的高亮度散在的黃綠色熒光帶出現(xiàn)；同時，在血運豐富及骨改建較好的區(qū)域，可以看到數(shù)條寬大熒光帶平行走行(圖2)。說明在擴弓過程中出現(xiàn)了較活躍的成骨活動。而對照組由于自然生長，熒光標記沉積帶較實驗組稀少，可以看到較細窄的黃綠色熒光帶沉積，肉眼見強度及面積均不及實驗組(圖3)。經(jīng)四環(huán)素熒光標記積分光密度值(×106)定量分析可見，矢狀方向擴弓后，實驗組熒光四環(huán)素標記的積分光密度值為0.61±0.16，對照組熒光四環(huán)素標記的積分光密度值為0.34±0.08，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。

圖2 試驗組的四環(huán)素熒光帶

圖3 對照組的四環(huán)素熒光帶

3 討 論

骨動力學參數(shù)標記物四環(huán)素是一種活性熒光物質(zhì)，在波長為365～380nm的紫外光激發(fā)下，發(fā)出光波長為530～540nm的黃綠色熒光。可進入血液循環(huán)與新骨組織中的羥基磷灰石結(jié)合將熒光素標記于礦化活躍的部位[5]。在熒光顯微鏡下，不脫鈣骨組織制片，可以看到骨組織中骨小梁表面出現(xiàn)明顯的四環(huán)素標記帶[6]，以往研究[7]骨改建情況時用四環(huán)素標記大多是通過2次給藥間2條四環(huán)素標記線的距離，反映新骨形成情況及形成速度。但2條標記線間的寬度受切片角度影響較大，本研究用四環(huán)素標記積分光密度觀察，與Coelho等[8]研究新骨形成的方法一致，以反映新骨形成和骨改建的動力學過程，并通過其染色強度(黃綠色熒光)和面積反映新骨形成情況，使骨組織研究更客觀。不脫鈣骨磨片在光顯微鏡下，可見到骨組織中骨小梁表面出現(xiàn)明顯的四環(huán)素熒光標記區(qū)域。加力2周后沿牽張方向平行排列的寬度不同熒光帶，這可能是由于不同時期注射四環(huán)素并隨骨改建過程逐漸沉積形成的，也可能是不同區(qū)域在同一時間的新骨沉積量不一致形成的。研究[9]發(fā)現(xiàn)在機械力作用下成骨細胞增殖能力明顯增加，成骨細胞活躍可加快新骨的形成。本研究中四環(huán)素熒光標記顯微鏡觀察顯示，實驗組上頜骨腭部有大量黃綠色熒光帶沉積，熒光強度較強，面積較大，多平行于牽張方向，而對照組僅有少量黃綠色熒光帶沉積且強度和面積不及實驗組。說明擴弓區(qū)內(nèi)有活躍的新骨形成，是在機械力的作用下由細胞增殖、分化形成的新骨；而對照組沒有施加機械力，由于自然生長，有較弱的成骨現(xiàn)象。

本研究實驗組較對照組的積分光密度值大(積分光密度可反映所測結(jié)構(gòu)的光密度與面積的綜合變化)，表明實驗組的新骨形成明顯強于對照組。機械力刺激是一個在應(yīng)力作用下促進新骨生長的過程，本研究機械力刺激后引起的上頜骨的改建可通過四環(huán)素標記帶直觀地反映出來，上頜骨矢狀方向擴弓后，上頜骨腭部的應(yīng)力增大區(qū)域出現(xiàn)大面積的熒光染色帶，證實此部位的骨組織增生，從而促進上頜骨的生長改建。

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