血塞通對大鼠腦缺血再灌注損傷保護的觀察
2014-03-20 23:41:31蔣佩琴等
中國醫學創新 2014年7期
蔣佩琴等
【摘要】 目的：探討血塞通注射液對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用。方法：SD大鼠150只，雌雄不拘，采用Pulsinelli方法建立大鼠急性全腦缺血/再灌注型；按照隨機數字表法分為三組，分別為假手術組，腦缺血再灌注組即對照組和血塞通組，分別于再灌注后3、6、12、24和48 h 5個時間點處死大鼠取出腦組織，每組10只。血塞通組于再灌注時給予血塞通注射液（5 mg/100 g）腹腔內注射后，其他組給予等容量的生理鹽水（0.5 mL/kg）腹腔內注射后，均每間隔6 h等量注射；檢測用于腦組織勻漿液的超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）。結果：腦缺血再灌注期間，體內SOD減少，MDA增多，對照組與假手術組比較差異均有統計學意義（P<0.01），提示在腦缺血再灌注期間氧自由基大量生成而清除減少。而血塞通組與對照組相比較，SOD增多，MDA減少，兩組比較差異均有統計學意義（P<0.05）。結論：血塞通注射液對于大鼠腦缺血再灌注損傷具有保護作用，可減少氧自由基的產生。
【關鍵詞】 腦缺血再灌注損傷； 神經保護； 血塞通
心肺復蘇后腦復蘇的本質就是一個全腦缺血/再灌注的過程，這一過程必然存在再灌注損傷，如何減少腦缺血/再灌注損傷，提高心肺腦復蘇成功率，減少后遺癥成為醫學上面臨的難題。腦缺血/再灌注發病機制復雜[1-2]。盡管對腦缺血再灌注損傷機制的研究在不斷深入和發展，但是腦缺血再灌注損傷各種機制的樞紐點/交匯點尚不明確，治療尚缺乏有效的藥物，現已成為當今世界醫學界研究的重點，有待于更深入地研究[3]。本試驗選用中成藥血塞通對大鼠全腦缺血/再灌注后超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的影響來探討血塞通對腦復蘇的保護作用。
1 資料與方法
1.1 試劑 血塞通注射液，由西安力邦制藥有限公司購買；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）試劑盒由南京建成生物工程研究所購買。
1.2 實驗動物分組 健康SD大鼠150只，雌雄不拘，體質量250～300 g，按照隨機數字表法分為三組，分別為假手術組，腦缺血再灌注組即對照組和血塞通組，每組50例。每組按再灌注的時間又分為3、6、12、24和48 h共5個觀察時間點，每個時間點10只大鼠。
1.3 動物模型制備 采用Pulsinelli四血管阻塞的方法建立急性全腦缺血再灌注損傷模型，Pulsinelli大鼠全腦缺血四血管模型是研究多種缺血性腦疾病經典模型之一[4]。以25%氨基甲酸乙酯，4 mL/kg的劑量腹腔注射麻醉，在大鼠頸部背側切開皮膚，假手術組大鼠只分離第一頸椎兩側橫突孔，不阻塞雙側椎動脈，分離雙側頸總動脈不夾閉；對照組和血塞通組阻塞雙側椎動脈并分別用無創動脈夾夾閉雙側頸總動脈10 min，然后松開動脈夾形成再灌注，血塞通組于再灌注時給予血塞通注射液（5 mg/100 g）腹腔內注射后，每間隔6 h給予等量注射；假手術、對照組給予等容量的生理鹽水（0.5 mL/kg）腹腔內注射后，每間隔6 h等量注射；大鼠實驗中保持體溫（37±0.5）℃，未昏迷或缺血后有癲癇、抽搐等并發癥均放棄。
1.4 標本采集 所有大鼠分別于再灌注3、6、12、24和48 h 5個時間點，快速斷頭處死，剝取腦組織。用于腦組織勻漿液的SOD、MDA測定：于視交叉前緣處及向前延伸8 min處各做一冠狀切面，取兩切面間的右側腦組織用于制作勻漿液。所有腦組織勻漿液標本集中統一用黃嘌呤氧化酶法測定SOD；用硫代巴比妥酸法測定MDA，嚴格按試劑盒操作步驟完成。
1.5 統計學處理 采用SPSS 12.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗，計數資料采用 字2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。
2 結果
缺血再灌注后對照組的腦組織勻漿液SOD活性明顯低于假手術組，MDA濃度顯著高于假手術組，兩組比較差異均有統計學意義（P<0.01）。血栓通組SOD活性明顯明顯高于對照組，MDA濃度顯著低于對照組，兩組比較差異均有統計學意義（P<0.05）。見表1和表2。
3 討論
在腦缺血再灌注的病理過程中，自由基生成增多[5]。實驗研究已經證實自由基水平明顯升高，能引起細胞膜的結構和功能更大的損傷，造成腦組織損傷[6]。蓄積在體內的氧自由基容易攻擊含有磷脂成分的生物膜，同時還能破壞酶的活性[7]。生物膜的磷脂與自由基反應而生成MDA。MDA是脂質過氧化的終末產物，細胞中MDA量的多少能反映體內的脂質過氧化的程度，間接反應細胞受自由基攻擊的嚴重程度和細胞損傷的程度[8]。因此，通過檢測機體內MDA的含量可以估計血清中氧自由基水平和脂質過氧化反應的強弱。機體內部同時存在分解清除自由基的抗氧化酶，其中SOD是體內特異性歧化超氧陰離子自由基的抗氧化酶，他的作用是將氧自由基歧化，生成氧氣和過氧化氫，從而阻斷毒性更強的羥自由基的產生。SOD活力的高低可反映機體清除氧自由基的能力[9]。
隨著對腦缺血再灌注研究不斷深入，尋求更理想的治療藥物迫在眉睫，我國研究人員發現，中藥對治療腦缺血亦有很好的效果[10-11]。中藥在腦缺血治療中越來越引起人們重視，具有巨大的開發潛力。血塞通為我國傳統名貴中藥三七的提取物，主要成分為三七總皂苷，通常能抑制血小板和紅細胞過度聚集，提高紅細胞變形能力，降低血液黏稠度，能溶解血栓，使缺血部位再灌注，減輕缺血所致的病理損害[12-14]。本研究顯示，腦缺血再灌注期間，體內SOD減少，MDA增多，對照組與假手術組比較差異均有統計學意義（P<0.01）。提示在腦缺血再灌注期間氧自由基大量生成而清除減少。而血塞通組與對照組相比較，SOD增多，MDA減少，兩組比較差異均有統計學意義（P<0.05）。表明血塞通注射液可以有效地保護內源性SOD活性，提高機體清除氧自由基的能力，減輕機體內的脂質過氧化的程度。因此，血塞通注射液在腦缺血再灌注損傷過程中具有一定的保護作用。endprint
參考文獻
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[14]景虎賢.血塞通聯合低分子肝素鈉治療進展性腦梗死68例 [J].中國現代醫生，2010，48（20）：114-115.
（收稿日期：2013-11-21） （本文編輯：黃新珍）endprint
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（收稿日期：2013-11-21） （本文編輯：黃新珍）endprint
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