趨化因子受體CXCR4與食管鱗癌生物學(xué)行為的臨床研究

任艷艷

（濰坊護(hù)理職業(yè)學(xué)院，山東 青州 262500）

趨化因子受體CXCR4與食管鱗癌生物學(xué)行為的臨床研究

任艷艷

（濰坊護(hù)理職業(yè)學(xué)院，山東 青州 262500）

目的 探討趨化因子受體CXCR4與食管鱗癌生物學(xué)行為的關(guān)系。方法 對(duì)37例食管鱗癌患者實(shí)施趨化因子受體CXCR4 mRNA與蛋白相對(duì)表達(dá)量測(cè)定，并探討其與食管鱗癌的生物學(xué)行為關(guān)系。結(jié)果 趨化因子受體CXCR4 mRNA與蛋白相對(duì)表達(dá)量，與侵及外膜、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)及TNM分期有關(guān)。結(jié)論 檢測(cè)CXCR4對(duì)預(yù)測(cè)食管鱗癌的侵襲、轉(zhuǎn)移有重要的臨床價(jià)值。

食管鱗癌；趨化因子受體CXCR4；檢測(cè)

趨化因子受體是指一種介導(dǎo)趨化因子行使功能的GTP蛋白偶聯(lián)的跨膜受體。研究發(fā)現(xiàn)，CXC類趨化因子受體CXCR4的配體CXCL12多表達(dá)于乳腺癌的特異轉(zhuǎn)移部位，如肺、肝臟等，與患者腫瘤生長(zhǎng)狀態(tài)有關(guān)，可影響腫瘤的侵襲、生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移狀態(tài)[1]。但關(guān)于這類型趨化因子受體在食管鱗癌方面的報(bào)告并不多見，本研究基于這一背景，簡(jiǎn)要分析了兩者間的生物學(xué)行為，旨在為臨床觀察提供幫助。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2010—2013年收治的食管鱗癌患者37例，所有患者均行手術(shù)切術(shù)腫瘤，其中男21例、女16例；年齡38～74歲，平均(54.5±8.3)歲。所有患者在行食管鱗癌切除手術(shù)之前均經(jīng)過化療或放療治療。收集37例患者的癌組織及癌旁組織，所有收集物均經(jīng)病理學(xué)檢查確定為食管鱗癌。TNM病理分期為Ⅱa、Ⅱb及Ⅲ期。在實(shí)施手術(shù)后0.5 h內(nèi)采集樣本，在最短時(shí)間內(nèi)將樣本放置于液氮中保存，液氮保存1 h后迅速轉(zhuǎn)移至-80℃冷柜中保存。

表1 CXCR4蛋白表達(dá)與食管鱗癌病理參數(shù)關(guān)系

1.2 方法

1.2.1 CXCR4 mRNA相對(duì)表達(dá)量的測(cè)定 取冰凍樣本0.1 g并用Trizol試劑勻漿。提取出樣本組織總RNA，將MMLV通過逆轉(zhuǎn)錄酶使之成為cDNA，使用試劑盒PCR將CXCR4擴(kuò)增，同時(shí)還可將β-actin擴(kuò)增使之成為內(nèi)參照。PCR產(chǎn)物放置于2%瓊脂凝膠上電泳，實(shí)施EB染色操作，通過凝膠成像分析系統(tǒng)對(duì)所得到的圖像進(jìn)行研究，相對(duì)量的表達(dá)采用實(shí)驗(yàn)得到的吸光度與β-actin密度之間的比值來表示[2]。

1.2.2 CXCR4蛋白相對(duì)表達(dá)量的測(cè)定 取少許樣本組織，將其加入到0.5 mL勻漿液中實(shí)施勻漿操作，采用BCA法對(duì)樣本蛋白進(jìn)行定量測(cè)定。將獲得的蛋白采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行電泳分離，并通過電轉(zhuǎn)儀將分離出的蛋白轉(zhuǎn)印在硝酸纖維素膜上。將5%脫脂奶粉靜置5 h(需處于封閉狀態(tài)，避免與空氣過多接觸)，加入到CXCR4一抗，在4℃環(huán)境中孵育一整晚，利用TBST多次洗膜后將二抗加入其中，在正常溫度(室溫)下孵育2 h。之后染色20 min，利用凝膠成像分析系統(tǒng)了解條帶的吸光度，同時(shí)將內(nèi)參照選為β-actin。相對(duì)量的表達(dá)采用電泳條帶密度與相對(duì)內(nèi)參密度之間的比值來表示[3]。

2 結(jié)果

CXCR4蛋白表達(dá)與食管鱗癌病理參數(shù)關(guān)系研究見表1。本研究選取腫瘤大小、分化程度、侵及外膜、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)及TNM分期對(duì)其相關(guān)參數(shù)展開研究，了解這些因素下相對(duì)表達(dá)量的差異性。

3 討論

趨化因子受體CXCR4可在多種實(shí)體腫瘤中表達(dá)，許多研究已證實(shí)CXCL12/CXCR4軸在腫瘤的遷移、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后中具有重要作用，對(duì)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的作用主要包括以下幾方面。①CXCL12/CXCR4軸可以調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖與凋亡：CXCL12/CXCR4軸多以自分泌刺激腫瘤及間質(zhì)細(xì)胞，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖。②CXCL12/CXCR4軸可以促進(jìn)腫瘤血管的生成：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)能將多種骨髓細(xì)胞從骨髓募集到外周血，CXCL12能捕獲血液循環(huán)中骨髓血管生成前體細(xì)胞的某些亞型，如RBCCs，并將其準(zhǔn)確定位到正在生長(zhǎng)的血管周圍，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞芽生；CXCR4與VEGF還可以通過相互上調(diào)對(duì)方在內(nèi)皮細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞上的表達(dá)來促進(jìn)腫瘤血管的生成[4-5]。

由于食管鱗癌早期癥狀不明顯，就診時(shí)多偏中、晚期，雖然目前以手術(shù)為主的綜合治療取得了較好的療效，但復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移仍是制約延長(zhǎng)生存期和降低病死率的主要原因。本研究初步證實(shí)，趨化因子受體CXCR4表達(dá)與食管鱗癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移相關(guān)，但其確切作用機(jī)制尚需進(jìn)一步深入研究。鑒于目前對(duì)胸中段食管癌尚無公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)手術(shù)方式，Ivor-Lewis手術(shù)和主動(dòng)脈弓上水平吻合術(shù)均可作為對(duì)胸中段食管鱗癌治療的候選手術(shù)方式。由于采取該兩種手術(shù)方式治療的患者，即使實(shí)現(xiàn)了完全切除，長(zhǎng)期生存期腫瘤復(fù)發(fā)率較高，有必要對(duì)有選擇的食管鱗癌患者采用有針對(duì)性的手術(shù)后輔助治療措施。

[1] 宋亮．趨化因子受體CXCR4、CCR7與食管鱗癌生物學(xué)行為的臨床研究[D]．濟(jì)南：山東大學(xué)，2012．

[2] 尹東，劉靜，賈詠存，等．口腔鱗癌中趨化因子受體CXCR4和CCR7表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系[J]．口腔醫(yī)學(xué)，2013(1)：8-12．

[3] 陳鋼．趨化因子受體CCR7、CXCR4與肺癌器官轉(zhuǎn)移關(guān)系的臨床研究[D]．濟(jì)南：山東大學(xué)，2010．

[4] 宋亮，王洲．趨化因子受體CXCR4和CCR7及其配體與食管癌轉(zhuǎn)移相關(guān)性的研究進(jìn)展[J]．中華腫瘤防治雜志，2010(20)：1694-1699．

[5] 吉茹．CXCR4、CCR7及其配體在乳腺癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶組織芯片中的表達(dá)及意義[D]．天津：天津醫(yī)科大學(xué)，2010．

1672-7185（2014）15-0072-02

10.3969/j.issn.1672-7185.2014.15.042

2014-06-12）

R735.1

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