MyD88、NF－κB及TNF－α在梅毒患者血清中的表達

劉志芳 馬元龍 阿拉騰楚魯 于希軍 賀 偉

MyD88、NF－κB及TNF－α在梅毒患者血清中的表達

劉志芳 馬元龍 阿拉騰楚魯 于希軍 賀 偉

目的: 檢測髓樣分化因子88(MyD88)、核因子－κB(NF－κB)及腫瘤壞死因子－α(TNF－α)在梅毒患者血清中的表達。方法: 采用ELISA方法檢測82例臨床確診的一期及二期梅毒患者與48名正常人血清MyD88、NF－κB和TNF－α水平。結果: 82例梅毒患者血清中MyD88、NF－κB及TNF－α水平均高于正常對照組，兩者比較差異均有顯著性(P＜0.001)。結論: MyD88、NF－κB和TNF－α可能與TP感染機體后的免疫應答有關。

梅毒； 梅毒螺旋體； 髓樣分化因子88； 核因子－κB； 腫瘤壞死因子－α

Toll樣受體(Toll－like recepter，TLR)家族中的TLR2參與了免疫細胞對TP的識別和信號轉導，可通過其跨膜結構將TP膜脂蛋白刺激信號導入細胞內，產生復雜的級聯信號反應，引起相應炎癥介質的釋放，其中髓樣分化因子88(myeloid differentiation factor 88，MyD88)是Toll樣受體超家族的重要成員，是啟動活化核因子－κB(nuclear factor－kapaB，NF－κB)的必要銜接蛋白。1NF－κB作為信號傳導途徑中的樞紐，是一種重要的核轉錄因子，可通過調控TL－1、TL－6、IL－12、IL－8和TNF－α等多種重要因子的表達，在機體的免疫應答、炎癥反應及細胞的生長調控等方面發揮重要作用，其活化也參與細胞增殖和凋亡的過程。2有研究報道TNF－α是TP感染后機體免疫應答的重要炎癥介質，3，4因此本實驗進一步對TNF－α及上游調控因子MyD88、NF－κB進行了研究。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇有典型皮膚損害的未經治療的首診一期梅毒23例及二期梅毒59例，其中男48例，女34例，年齡17～65歲，平均37歲，均無自身免疫性疾病及其它可出現梅毒抗體陽性的疾病。HIV檢測陰性。所有病例均通過梅毒螺旋體乳膠凝集試驗(TPPA)檢測為陽性，RPR(快速血漿反應素環狀卡片試驗)陽性，滴度在1∶8～1∶128。將患者的血清吸入EP管內，－80℃保存待測。二期梅毒表現為手足紅斑21例，軀干玫瑰糠疹樣紅斑20例，銀屑病樣皮疹11例，其他少見皮疹6例。正常對照組48名來自體檢中心，病例組與對照組的年齡和性別分布無統計學差異。

1.2 實驗方法 將標本取出，復溫。采用ELISA法檢測患者及正常對照組血清中MyD88、NF－κB及TNF－α水平。ELISA試劑盒購自美國RB公司，嚴格按說明書操作。主要儀器BIO－BAD680酶標儀、BIO－BAD1575洗板機。

1.3 統計學方法 采用SPSS 19.0軟件對數據進行統計學分析，測得結果用ˉx±s表示，一期梅毒、二期梅毒及正常對照3組間比較采用單因素方差分析(ANOVA)，組內比較用LSD法。

2 結果

見表1。一期、二期梅毒患者中3種因子的含量高于對照組(MyD88:F＝91.334，P＜0.001；NF－κB:F＝84.225，P＜0.001；TNF－α:F＝161.099，P＜0.001)；一期、二期梅毒患者MyD88、NF－κB組間無顯著性差異(P＞0.05)，兩組間TNF－α有顯著性差異(P＜0.001)。

表1 3組血清MyD－88、NF－κB及TNF－α的檢測結果

3 討論

MyD－88是Toll樣受體轉導通路中關鍵的轉接分子，是信號向下游轉導的關鍵靶分子，被稱為萬能銜接蛋白。5TP具有膜脂蛋白，與脂多糖結合蛋白CD14和TLR相互作用。一些糖脂可以導致強烈的直接免疫應答，其他一些可能作為強有力的抗原，誘導適應性免疫反應。6因此推斷，梅毒螺旋體侵入皮膚黏膜后，其膜脂蛋白作為最重要的病原相關分子模式(PAMP)，被單核細胞膜上的TLR2識別，在CD4協同下將信號由胞區外傳至胞漿TLR區域，主要經MyD88途徑活化NF－κB，NF－κB移至細胞核內，并結合啟動子和前炎性基因增強子上的IκK－β位點，開始轉錄過程。7NF－κB作為信號傳導途徑中的樞紐，是一種重要的核轉錄因子，可誘導TL－1、TL－6、IL－12、IL－8和TNF－α等炎癥因子的釋放，8而TNF－α是一種具有介導炎癥、免疫應答和凋亡等多種生物效應的細胞因子，主要由單核－巨噬細胞、淋巴細胞和角質細胞產生，能夠增強中性粒細胞的趨化性，協助炎癥性細胞穿透血管壁，導致炎癥細胞的活化，誘發炎癥反應，促使單核細胞，淋巴細胞聚集形成局部炎癥，利于清除TP，同時造成組織學上典型的血管炎和細胞浸潤。9

有研究報道TNF－α在梅毒的免疫中發揮著重要作用。10本研究結果顯示，一期及二期梅毒患者血清中MyD88，NF－κB及TNF－α水平明顯高于對照組(P＜0.001)，說明MyD88，NF－κB可能在TP感染人體后的信號轉導中起重要作用，在其誘導下產生重要的炎癥因子TNF－α。朱慧蘭等3研究發現，與正常對照組相比，一期、二期和潛伏梅毒患者血清TNF－α水平明顯增高，在一定程度上表明TNF－α是TP感染后機體免疫應答的重要炎癥介質，參與了TP感染后機體的病理反應。曹雙林等4研究認為TNF－α可能與二期梅毒銀屑病樣皮疹的產生有關，但本組樣本未觀察銀屑病樣皮疹與其它類型皮疹之間TNF－α的差異，TNF－α是否與其他類型皮疹的發生有關有待于進一步研究。本研究結果顯示二期梅毒血清中TNF－α水平高于一期梅毒(P＜0.001)，推測可能是由于隨著梅毒病程的進展，梅毒螺旋體由淋巴系統進入血液循環，形成菌血癥散播全身，導致梅毒螺旋體膜脂蛋白刺激信號持續存在，通過MyD88、NF－κB途徑不斷向下游轉導，使其誘導產生的TNF－α在二期梅毒患者血中高表達，而TNF－α在體內的大量釋放可造成機體的多種病理損傷。

1旺盛，張誼芝.TOLL樣受體與梅毒免疫.國外醫學皮膚病學分冊，2005，31(3):139－141.

2 Kaisho T，Akira S.Toll－like receptor function and signaling.J Allergy Clin Immunol，2006，117(5):979－987.

3朱慧蘭，曾志榮，葉興東，等.梅毒患者細胞免疫的研究.中國性病艾滋病防治，2002，8(3):139－141.

4曹雙林，傅玲玲，符梅，等.二期梅毒患者血清白介素6、白介素8及腫瘤壞死因子α測定.中華皮膚科雜志，2001，34(6): 423－424.

5 Jeong E，Lee JY.Intrinsic and extrinsic regulation of innate immunereceptors.Yonset Med J，2011，52(3):379－392.

6周玉平，顧志英，錢伊弘，等.早期梅毒皮損形成機制的研究.中華皮膚科雜志，2006，39(5):254－256.

7 Chang L，Karin M.Mammalian MAP kinase signaling cascades. Nature，2001，410(6824):37－40.

8Eisenbarth SC，Flevell RA.Innate instruction of adaptive immunity revisited:the inflammasome.EMBO Mol Med，2009，1(2): 92－98.

9杜軍興，李文竹.細胞因子與梅毒細胞免疫研究進展.中國現代醫藥雜志，2011，13(2):126－128.

10邱彥龍，李樹華，穆象山，等.腫瘤壞死因子－α的藥理和病理學研究.中國衛生檢驗雜志，2012，19(19):18－21.

(收稿:2013－09－24 修回:2013－10－22)

Expression of M yD－88，NF－κB and TNF－αin the patientswith syphilis

LIU Zhi-fang，MAYuan-long，ALATENGChu-lu，etal.Department ofDermatology，the Affiliated Hospital of InnerMongolia Medicol University，InnerMongolia Hohehot，010050

Objective:Tomeasure the expression of MyD－88，NF－κB and TNF－αin the sera of patients with syphilis.Methods:Eighty－two patients with syphilis and forty eight healthy controls were recruited into the study.The expression of MyD－88，NF－κB and TNF－αweremeasured with ELISA.Results:The levels of MyD88，NF－κB and TNF－αin patients with syphilis were significantly higher than those in healthy controls (P＜0.001).Conclusion:MyD88 and NF－κB may play a part of role in the immune response to treponema pallidum infection.

syphilis；treponema pallidum；MyD88；NF－κB；TNF－α

內蒙古自治區自然科學基金(編號:2010MS1153)

內蒙古醫科大學附屬醫院皮膚性病科，內蒙古呼和浩特，010050