胰島素測定前標本的處理方法比較

呂 萍

（遼寧省沈陽醫學院附屬第二醫院輸血科，110002）

·特別提示·

胰島素測定前標本的處理方法比較

呂 萍

（遼寧省沈陽醫學院附屬第二醫院輸血科，110002）

目的 討論和評價在樣品從門診運送到檢測實驗室時，如何維持血清和血漿中胰島素的穩定性。方法 從20名體檢者抽取靜脈血，立即處理或室溫下儲存24 h。比較乙二胺四乙酸（EDTA）或氟化鈉（NaF）對胰島素測定結果的影響。結果 EDTA抗凝標本的胰島素在室溫下24 h內是穩定的。如果樣品未使用添加劑或NaF，則胰島素濃度顯著降低。結論 如果從門診運送到檢測實驗室的待測胰島素樣品能在24 h內處理，則不需要血漿的離心及凍存。

胰島素；乙二胺四乙酸；氟化鈉；測定

循環血胰島素測定通常適用于胰島素瘤的診斷（表現為低血糖時可測量的胰島素）、胰島素瘤患者的隨訪（包括術中監測）、1型糖尿病剩余胰島素分泌的鑒定、胰腺移植手術后的監測。胰島素測定作為一種研究工具，對于診斷以高胰島素血癥為特征的2型糖尿病和代謝綜合征具有極其重要的意義[1]。現在愈來愈多的證據表明，以空腹或耐糖測試后胰島素和血糖測定為基礎的胰島素耐受測定，有助于提高潛在的2型糖尿病或心血管疾病患者的診斷和治療[2]。在臨床實踐中，為了保持血液中胰島素的穩定性，需要醫護人員立即將樣本離心，快速將凍結的血清或者血漿轉移至檢測實驗室。本研究旨在比較不同抗凝劑處理及不同時間對血液胰島素測定結果的影響。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選取正常體檢者20例。其中，男12名例、女8例；年齡31～45歲。其中10名在注射75 g葡萄糖2 h后取樣。把每一個體的樣本分別放入6只采樣管：兩支為乙二胺四乙酸（EDTA）管（上海科華，容積2.0 mL，終濃度為1.5～2.0 mg K2-EDTA/mL全血）；兩支管為無添加劑的血清標本（江蘇康健，容積4.5 mL)；兩支添加氟化鈉（NaF），作為糖酵解抑制因子和草酸鉀的抗凝劑（上海科華，容積2.7 mL，終濃度為2.0～3.0 mg NaF/mL全血）。

1.2 主要儀器及試劑 胰島素測定采用化學發光法，使用美國貝克曼公司生產的AccESS全自動微粒子化學發光免疫分析儀及配套試劑。血糖測定采用己糖激酶法，使用日本產HITACHI 7170S全自動生化分析儀及配套試劑。

1.3 血糖和胰島素測定 在每一樣本組中，針對每種采樣管，取其中一支管于10 min內離心，取上清，并立即凍存；其余未被離心的樣本管（1支為EDTA，1支為血清，1支為NaF）在室溫下（22～24℃）貯存24 h后離心，分離血清或血漿，分析前貯存在-20℃下，所有的樣本在融化后分為兩批進行胰島素和葡萄糖測定。分析需在取樣10 d內進行，所有樣本均做雙管測定，取平均值。

1.4 統計分析 對于分析前處理獲得的不同類型的胰島素和葡萄糖樣品，采用SPSS 11.5統計學軟件進行分析，測定結果做配對秩和檢驗，并進行相關性分析，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

就先前確定的標準，在含EDTA樣本中，對室溫下貯存24 h的胰島素測定，結果沒有顯著性影響（P=0.35）。值得注意的是，在這種貯存條件下，添加了氟化鹽和沒有添加劑樣本的結果分析分別為P＜0.000 1 和P=0.000 9，見表1。 在胰島素測定的結果上，立即處理含EDTA的樣本和在室溫下貯存了24 h后的樣本具有相關性（r=0.998)。見圖1。依照相關回歸分析，結果對比顯示如下等式：貯存在室溫24 h的EDTA樣本=立即處理的EDTA樣本×0.96＋2.1 pmol/L（斜率95%可信區間：0.92～0.97；截距95%可信區間：2.8～6.3 pmol/L）。

貯存了24 h的無添加劑的樣本和僅含EDTA的樣本葡萄糖的濃度顯著下降。見表2。含氟化物的樣本葡萄糖的結果下降適中，但具有統計學意義，貯存在室溫下24 h后大約下降了10%（P＜0.000 1），貯存了24 h含氟化物的樣本中可見明顯的溶血現象。

圖1 含EDTA樣本即刻處理與放置室溫24 h后處理的胰島素測定結果相關性（pmol/L）

3 討論

我們的研究顯示，EDTA作為檢測分析的穩定物，已被普遍應用在自動化測試中，加入EDTA后內源性胰島素實際在血液樣本中較穩定。在胰島素測定的結果上，立即處理含EDTA的樣本和在室溫下貯存了24 h后的樣本是一致的。兩者間的變異性主要是分析方法不同的批間變異。沒有添加劑的樣品管中，在室溫下貯存了24 h的胰島素測定結果下降輕微但有統計學意義。紅細胞內含有胰島素降解酶，EDTA能與IDE的輔基金屬離子生成穩定的絡合物而影響胰島素降解酶的活性，使胰島素避免循環中不確定蛋白水解酶和依賴于鈣的胰島素酶的水解[3-4]。在含有氟化物的樣本中胰島素濃度顯著下降，可能是因為這些樣本中出現溶血而向血清中釋放了大量的紅細胞胰島素降解酶[5-6]。

由于近年來胰島素檢測大多采用發光免疫分析法，試劑、儀器成本較高，且胰島素測定非急診項目，故大多數醫院不是24 h開機檢測此項目。另外，實際工作中，常有各種原因需要保存標本以備復查。因此，我們的研究結果對門診患者處置時尤其具有重要的實際意義。根據我們的結果，如果確信是在24 h內取的樣品，現在似乎有充分的理由使用常規的運輸系統運送未經處理的需測量胰島素的樣品。基于顏色改變測溫的不可逆溫度控制條帶可另外被用來排除運送期間意外的熱損傷。盡管葡萄糖測量的樣品試管中包含氟化物鹽，我們發現對室溫24 h內存儲的血清葡萄糖測定結果影響輕微，但有重要統計學意義；這在解釋葡萄糖測定結果中被考慮并且強調血清或者毛細血管中葡萄糖濃度的現場即時分析有重要性。

迄今為止，已發表的數據表明胰島素測量對潛在的代謝綜合征和2型糖尿病患者有重要作用。肥胖和胰島素抵抗都是心血管疾病的強大的預測器，但是任何肥胖程度的胰島素抵抗又加重了冠心病和2型糖尿病的風險。識別誰最有胰島素抵抗及誰最能受益于減肥可能是重要的。這些人可能是今后特異治療策略的目標。以后更大領域和長期研究能最終闡明通過胰島素測定的不同設置來分析個體胰島素敏感度的實際意義。

[1] Isomaa B. A major health hazard: the metabolic syndrome[J]. Life Sci, 2003, 73(19): 2395-2411.

[2] Ferrannini E, Muscelli E, Stern MP, et al. Differential impact of insulin and obesity on cardiovascular risk factors in nondiabetic subjects[J]. Int J Obes Relat Metab Disord, 1996, 20(1): 7-14.

[3] 李偉雄，周靜．溶血對血清胰島素測定的影響及應對措施[J]．中國熱帶醫學，2006，6(8)：1475-1476．

[4] 池勝英，張文輝，陶志華．溶血對血清胰島素測定的影響[J]．現代中西醫結合雜志，2003，12(19)：2092-2093．

表1 室溫儲存24 h后樣品中胰島素測定濃度（pmol/L）

表2 室溫儲存24 h后樣品中葡萄糖測定濃度（mmol/L）

[5] 夏鳳城，汪寅章．氟化鈉對放免分析血漿胰島素的影響[J]．軍醫進修學院學報，1996，17(4)：274-276．

[6] 郭永鐵．不同濃度的EDTA-K3對胰島素測定干擾的實驗研究[J]．醫學檢驗，2010，25(16)：20．

1672-7185（2014）12-0004-03

10.3969/j.issn.1672-7185.2014.12.003

2014-03-10）

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