甘蔗SoNIN1基因結(jié)構(gòu)及其內(nèi)含子信息分析

牛俊奇吳朝興楊麗濤，2李楊瑞，2

（1. 廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院 亞熱帶農(nóng)業(yè)生物資源保護(hù)與利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南寧 530005；2. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院甘蔗研究中心 廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院甘蔗研究所 農(nóng)業(yè)部廣西甘蔗生物技術(shù)與遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 廣西甘蔗遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

廣西作物遺傳改良生物技術(shù)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，南寧 530007）

甘蔗SoNIN1基因結(jié)構(gòu)及其內(nèi)含子信息分析

牛俊奇1吳朝興1楊麗濤1，2李楊瑞1，2

（1. 廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院 亞熱帶農(nóng)業(yè)生物資源保護(hù)與利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南寧 530005；2. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院甘蔗研究中心 廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院甘蔗研究所 農(nóng)業(yè)部廣西甘蔗生物技術(shù)與遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 廣西甘蔗遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

廣西作物遺傳改良生物技術(shù)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，南寧 530007）

根據(jù)前期克隆得到的SoNIN1基因的全長(zhǎng)cDNA和部分啟動(dòng)子序列設(shè)計(jì)引物，應(yīng)用PCR技術(shù)從甘蔗葉片gDNA中克隆SoNIN1基因，并利用生物信息學(xué)方法分析基因的結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明，SoNIN1基因的DNA序列長(zhǎng)4 938 bp，包含6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子，GenBank登錄號(hào)KF563902。在該基因5'非翻譯區(qū)存在一個(gè)268 bp 內(nèi)含子序列，同時(shí)5個(gè)內(nèi)含子序列中含有與低溫、干旱和激素等脅迫響應(yīng)相關(guān)的作用元件，這些可能對(duì)SoNIN1基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)起調(diào)控作用。依據(jù)SoNIN1蛋白聚類(lèi)和外顯子-內(nèi)含子基因結(jié)構(gòu)可以將植物NINs分為兩類(lèi)。

甘蔗 中性/堿性轉(zhuǎn)化酶 外顯子 內(nèi)含子 信息分析

中性/堿性轉(zhuǎn)化酶（Alkaline/Neutral Invertase）是轉(zhuǎn)化酶家族成員之一，在調(diào)節(jié)植物的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中起作用。它是一種胞質(zhì)酶，最適pH值在7.0-8.0左右，以蔗糖為底物，能不可逆地把蔗糖分解為葡萄糖和果糖，用于細(xì)胞能量代謝［1］。而在酸性轉(zhuǎn)化酶和蔗糖合成酶（分解方向）活性較低的植物組織中，中性/堿性轉(zhuǎn)化酶能分解蔗糖，為三羧酸循環(huán)提供底物，因此被視為“維持酶”［2］。其酶活性極不穩(wěn)定，在提取過(guò)程中容易喪失活力，導(dǎo)致純化該類(lèi)酶存在很大難度。已經(jīng)純化出來(lái)的中性或堿性轉(zhuǎn)

化酶主要以八聚體和四聚體兩種形式存在［3］。

內(nèi)含子是真核生物基因的重要組成部分，它在基因剪接過(guò)程中可以區(qū)分外顯子起標(biāo)點(diǎn)符號(hào)作用，而外顯子-內(nèi)含子連接區(qū)高度保守性和特異性的堿基序列是真核生物基因斷裂的重要特征 。通過(guò)選擇剪接，一個(gè)基因可以產(chǎn)生不同的成熟mRNA，再翻譯成功能各異的蛋白質(zhì)。這種調(diào)控機(jī)制可使某些基因在不同細(xì)胞組織中或是在發(fā)育的不同階段產(chǎn)生特定的蛋白質(zhì)，以滿足生物體代謝的需求［4-6］。近年來(lái)，內(nèi)含子對(duì)真核生物基因和植物基因表達(dá)影響越來(lái)越受到人們的重視［7，8］。因此，本研究在前期克隆得到SoNIN1基因的全長(zhǎng)cDNA和部分啟動(dòng)子序列，并分析了該基因在不同組織和環(huán)境脅迫下基因表達(dá)情況的基礎(chǔ)上，利用PCR克隆獲得SoNIN1基因的全長(zhǎng)DNA序列，通過(guò)生物信息學(xué)分析該基因結(jié)構(gòu)和內(nèi)含子序列，旨在為進(jìn)一步闡述甘蔗SoNIN1基因參與植物生長(zhǎng)發(fā)育和對(duì)逆境脅迫下的響應(yīng)機(jī)制提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

新型植物基因組DNA提取試劑盒（康為試劑Nuclean PlantGen DNA Kit）；λ-Hind III digest DNA Marker、LA Taq酶、pMD18-T vector和T4 DNA連接酶購(gòu)自TaKaRa寶生物工程（大連）公司有限公司。引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。

1.2 方法

1.2.1 RNA和DNA提取 以甘蔗品種GT28葉片為材料提取總RNA，RNA提取采用天根Trizol-A+提取液，提取過(guò)程參照TRIzol試劑盒說(shuō)明書(shū)。甘蔗基因組DNA提取過(guò)程參照DNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。利用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)總RNA和DNA完整性，利用Thermo Scientific NaNoDrop 2000c檢測(cè)總RNA濃度及純度。反轉(zhuǎn)錄按照ReverAid First Strand cDNA Synthesis Kit試劑盒說(shuō)明書(shū)反轉(zhuǎn)錄成cDNA第一鏈。

1.2.2 甘蔗SoNIN1編碼區(qū)DNA序列克隆 參照SoNIN1的cDNA序列（GenBank登錄號(hào)：JX109944）和啟動(dòng)子序列（GenBank登錄號(hào)：KC854419）［9］在基因編碼區(qū)序列兩側(cè)分別設(shè)計(jì)兩條上游引物NIF71：5'-ACTCCGGTTTTGCCCTCCATTG-3'、NIF81：5'-TTCTTGCTGGGTTGCTCTGATTAG-3'。以及兩條下游引物NIR71：5'-TTGATGGAACTTGCTGCGAGAAC-3'和NIR81：5'-CCATAATAACAGCATCCCACAGCA-3'。以甘蔗基因組DNA為模板，擴(kuò)增體系為25 μL：LA Taq酶0.25 μL、10×LA Taq Buffer II 2.5 μL、10 mmol/L dNTPs 1.5 μL、10 mmol/L上下游引物各1 μL，模板DNA 1 μL、ddH2O 17.75 μL。PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性1 min；98℃變性10 s，68℃退火5 min，30個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)膠回收純化后，經(jīng)T4 DNA連接酶連接到pMD18-T上，轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞E. coli DH5α，經(jīng)M13通用引物PCR菌液檢測(cè)和質(zhì)粒檢測(cè)后，把含有目的片段的菌液送深圳華大基因研究院測(cè)序。SoNIN1基因編碼區(qū)引物設(shè)計(jì)和擴(kuò)增體系參照牛俊奇等［9］方法。

1.2.3 序列分析 利用MEGA6構(gòu)建NIN蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)；利用Gene Structure Draw（www.compgen. uni-muenster.de/tools/strdraw）分析外顯子-內(nèi)含子基因結(jié)構(gòu)；利用Alignment Exon Intron Structure（www. compgen.uni-muenster.de/tools/alignexin）分析基因外顯子進(jìn)化關(guān)系；利用http：//hits.isb-sib.ch/cgibin/motif_scan分析SoNIN1蛋白的活性位點(diǎn)；利用 PlantCARE（http：//bioinformatics.psb.ugent.be/ webtools/plantcare/html）和PLACE（http：//www.dna. affrc.go.jp/PLACE/signalup.html）分析SoNIN1基因內(nèi)含子順式作用元件。

2 結(jié)果

2.1 DNA和RNA瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)

利用DNA試劑盒提取的甘蔗基因組DNA經(jīng)0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果（圖1-A）顯示電泳條帶單一，平直，清晰，點(diǎn)樣孔干凈。經(jīng)紫外分光光度計(jì)檢測(cè)其OD260/OD230為1.92，濃度為900 ng/μL，說(shuō)明所提取的DNA質(zhì)量和濃度均符合試驗(yàn)的要求。利用試劑盒提取的RNA經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)圖，產(chǎn)生3條清晰的條帶：28S、18S和5S RNA，無(wú)DNA污染，OD260/OD230為1.92，說(shuō)明所提取的RNA完整性好、純度高、完全可滿足cDNA逆轉(zhuǎn)錄的要求（圖1-B）。

2.2 SoNIN1基因 DNA序列克隆與序列分析

對(duì)設(shè)計(jì)的6條引物（兩條上、下游引物和一對(duì)編碼區(qū)引物）隨機(jī)組合，分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果（圖

2-A）顯示只有引物對(duì)NIF71和NIR71 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在5 000 bp左右處有單一、清晰的電泳條帶。以cDNA為模板，用編碼區(qū)引物擴(kuò)增結(jié)果如圖2-B所示。測(cè)序結(jié)果顯示擴(kuò)增出來(lái)DNA序列長(zhǎng)4 938 bp，編碼603 aa，與SoNIN1編碼區(qū)cDNA推導(dǎo)氨基酸序列同源性為100%，說(shuō)明克隆的序列是SoNIN1基因的DNA序列。該基因已在 DDBJ/EMBL/GenBank 基因數(shù)據(jù)庫(kù)注冊(cè)，注冊(cè)號(hào)為KF563902。

圖1 DNA（A）和RNA（B）瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果

圖2 SoNIN1 基因的DNA序列（A）和編碼區(qū)cDNA（B）擴(kuò)增結(jié)果

將SoNIN1基因DNA序列與其cDNA（編碼區(qū)）序列進(jìn)行比對(duì)分析，結(jié)果顯示該基因含有6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子，外顯子大小分別為582、164、212、494、49和256 bp，內(nèi)含子大小分別為1 374、89、1 146、90和214 bp，外顯子與內(nèi)含子的交界符合GT-AG法則（即內(nèi)含子具有5'-GT...AG-3'特征）。基因5'UTR（Untranslated Regions）有192 bp，3' UTR有23 bp，序列中A+T含量58.46%，G+C含量為占41.54%。利用Vector NTI 11.0 里的conting 軟件將SoNIN1基因DNA序列與其啟動(dòng)子（KC854419）序列進(jìn)行拼接，拼接結(jié)果長(zhǎng)5 920 bp。該拼接結(jié)果與基因的全長(zhǎng)cDNA進(jìn)行比對(duì)，并利用Gene Structure Draw程序構(gòu)建內(nèi)含子-外顯子基因結(jié)構(gòu)圖（圖3）。結(jié)果顯示在起始密碼子ATG之前49 bp之前有一個(gè)268 bp的非轉(zhuǎn)錄區(qū)，該區(qū)域含有干旱脅迫響應(yīng)元件（MBS）、赤霉素響應(yīng)元件（P-box）、胚乳特異性響應(yīng)元件（Skn-1_motif）以及2個(gè)CAAT-box，該序列可能在增強(qiáng)基因轉(zhuǎn)錄方面起作用。

2.3 內(nèi)含子作用元件預(yù)測(cè)

用PlantCARE和PLACE在線預(yù)測(cè)SoNIN1基因內(nèi)含子順式作用元件，結(jié)果顯示基因內(nèi)含子1具有ABA響應(yīng)元件（ABRE）、厭氧響應(yīng)元件（ARE）、ABA和VP1響應(yīng)元件（CE3）、茉莉酸響應(yīng)元件（CGTCA-motif），低溫誘導(dǎo)響應(yīng)元件（LTR）、干旱脅迫響應(yīng)元件（MBS）、4個(gè)分生組織特異性響應(yīng)元件、脅迫防御響應(yīng)元件（TC-rich repeats）、光誘導(dǎo)根特異性表達(dá)響應(yīng)元件和光響應(yīng)元件。此外還具有14個(gè)CAAT-box 和27個(gè)TATA-box。同時(shí)，在內(nèi)含子1中有一段233 bp（位于868-1 101 bp之間）的核苷酸序列，該序列與玉米、高粱、薏米和甘蔗葉綠體基因組中的細(xì)胞色素B（petB）基因的反向互補(bǔ)序列同源性達(dá)98%，而該序列能否抑制petB基因的表達(dá)，還有待于進(jìn)一步的研究。內(nèi)含子3具有4個(gè)CAAT-box、ABA響應(yīng)元件、厭氧誘導(dǎo)響應(yīng)元件、分生組織特異性響應(yīng)元件和光響應(yīng)元件。內(nèi)含子5具有厭氧響應(yīng)元件、干旱誘導(dǎo)的MBY結(jié)合位點(diǎn)，胚乳特異表達(dá)響應(yīng)元件，脅迫防御響應(yīng)元件。而內(nèi)含子2和4都具有TATA-box和CAAT-box。

2.4 構(gòu)建植物NIN蛋白系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)

根據(jù)在基因數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索到的擬南芥（3個(gè)）、水稻（8個(gè)）和玉米（6個(gè)）NIN基因相應(yīng)DNA、cDNA和氨基酸序列，利用MEGA6.0軟件構(gòu)建NIN蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，并利用Gene Structure Draw分析基因外顯子-內(nèi)含子結(jié)構(gòu)。結(jié)果（圖4）表明，植物NIN蛋白可以分為兩類(lèi)：I 類(lèi)和II類(lèi)。其中，I類(lèi)中基因結(jié)構(gòu)主要有4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子組成，只有擬南芥（AT4G09510）有5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子組成，甘蔗SoNIIN2［10］屬于I 類(lèi)。II類(lèi)中基因結(jié)構(gòu)都有6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子組成。SoNIN1蛋白首先與玉米（GRMZM2G040843）聚類(lèi)，其次與黑

麥草（CAM32308）和水稻（Os02g32730）聚類(lèi)，再次與擬南芥（AT5G22510和AT1G56560）聚類(lèi)，最后與水稻（Os01g22900）聚類(lèi)。雖然甘蔗SoNIN1蛋白與玉米（GRMZM2G040843）NIN親緣關(guān)系很近，但二者內(nèi)含子序列大小相差很大，尤其是第3個(gè)內(nèi)含子，甘蔗的為1 146 bp，而玉米的達(dá)6 235 bp。

圖3 SoNIN1基因結(jié)構(gòu)圖

圖4 SoNIN1蛋白質(zhì)與其他20個(gè)不同來(lái)源的中性/堿性轉(zhuǎn)化酶的進(jìn)化關(guān)系分析

2.5 II類(lèi)NIN基因內(nèi)含子-外顯子結(jié)構(gòu)分析

甘蔗NIN1蛋白與玉米（GRMZM2G040843）、水 稻（Os02g32730）、 黑 麥 草（AM489692）、 水稻（Os04g33490）、擬南芥（AT5G22510）和擬南芥（AT1G56560）氨基酸序列的同源性分別為96%、90%、86%、79%、67%和62%。利用Alignment Exon Intron Structure分析植物II 類(lèi)NIN基因內(nèi)含子-外顯子結(jié)構(gòu)，結(jié)果（圖5）表明進(jìn)化距離較近的基因之間外顯子-內(nèi)含子結(jié)構(gòu)差異小，內(nèi)含子插入位置僅在外顯子末端個(gè)別氨基酸序列處不同。而在進(jìn)化距離相對(duì)較遠(yuǎn)的NIN基因結(jié)構(gòu)中，內(nèi)含子插入位置變化較大，如水稻的Os02g32730和Os04g33490。

3 討論

本研究采用98℃變性10 s，68℃退火-延伸5 min，30個(gè)循環(huán)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，即二溫式PCR技術(shù)。該方法優(yōu)點(diǎn)是退火溫度比常規(guī)PCR高，擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性強(qiáng)，目的條帶清晰。同時(shí)擴(kuò)增程序簡(jiǎn)單，耗時(shí)短［11］。缺點(diǎn)是對(duì)引物要求高，不但要求G+C含量在40%-60%之間，而且引物退火溫度要在65-70℃之間，而利用Taq酶最佳溫度為68℃。從甘蔗

中克隆到的SoNIN1 DNA序列，外顯子和內(nèi)含子之間的交界完全符合的GT-AG法則，且在SoNINI蛋白與其他來(lái)原的進(jìn)化關(guān)系中所示植物的NIN基因內(nèi)含子都符合這一特征。甘蔗SoNIN1基因結(jié)構(gòu)含有6個(gè)外顯子，5個(gè)內(nèi)含子，第2個(gè)為164 bp，而植物酸性轉(zhuǎn)化酶基因第2個(gè)內(nèi)含子大部分都是9 bp，編碼DPN 3個(gè)氨基酸，它是呋喃果糖酶基序（NDPNG/A）的一部分［12］，而SoNIN1推導(dǎo)的這3個(gè)多肽位于第1個(gè)內(nèi)含子內(nèi)。而在小麥（CAL26914）、木薯（AFH77958）和水稻（BAG89564）的NINI基因中已經(jīng)不含DPN序列，因此推測(cè)DPN并不是某些植物中性/堿性轉(zhuǎn)化酶必需酶活性位點(diǎn)。

圖5 NINs基因內(nèi)含子-外顯子結(jié)構(gòu)圖

啟動(dòng)子是基因表達(dá)所必需的重要的DNA信號(hào)序列，是細(xì)胞內(nèi)控制基因轉(zhuǎn)錄與表達(dá)的時(shí)空特異性的重要因子，是基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的中心［13］。基因表達(dá)不僅需要5'側(cè)翼啟動(dòng)子序列，而且也需要內(nèi)含子的參與［14，15］。基因中不同的內(nèi)含子在啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮的作用不同，通常第一個(gè)內(nèi)含子對(duì)基因啟動(dòng)表達(dá)貢獻(xiàn)最大［16］。內(nèi)含子能誘導(dǎo)啟動(dòng)子啟動(dòng)活性和啟動(dòng)內(nèi)含子含有的響應(yīng)作用元件［17］。內(nèi)含子中存在一些類(lèi)似增強(qiáng)子或其他順式作用調(diào)控元件，能提高基因表達(dá)，但內(nèi)含子在基因表達(dá)中具有位置效應(yīng)和方向依賴性［18］。有研究表明內(nèi)含子中部序列在基因表達(dá)調(diào)控中起重要作用［19］。高轉(zhuǎn)錄基因內(nèi)含子中存在一些潛在的正調(diào)控位點(diǎn)，這些內(nèi)含子非常靠近基因上游區(qū)，甚至位于5'-UTR區(qū)，其中內(nèi)含子可能參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控，并可能與上游轉(zhuǎn)錄調(diào)控有協(xié)同調(diào)節(jié)作用［20，21］。在甘蔗SoNIN1基因5'-UTR含有一個(gè)的內(nèi)含子，而有研究表明基因5'-UTR中存在的內(nèi)含子能誘導(dǎo)基因的表達(dá)模式［22］。而有些內(nèi)含子序列對(duì)基因表達(dá)起負(fù)調(diào)控作用，如內(nèi)含子中的NRSE 序列參與介導(dǎo)了其對(duì)CART基因的轉(zhuǎn)錄負(fù)調(diào)控作用［23］。剪切后的內(nèi)含子與相應(yīng)編碼序列也存在相互作用，在mRNA輸出和基因表達(dá)調(diào)控過(guò)程中也起到非常重要的作用［24］。

從NIN蛋白系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)和外顯子-內(nèi)含子基因結(jié)構(gòu)上，本研究將植物中性/堿性轉(zhuǎn)化酶分為兩個(gè)亞類(lèi)群，在同一亞群內(nèi)部不同物種間內(nèi)含子序列的長(zhǎng)度存在極大差異。內(nèi)含子序列中的各類(lèi)可移動(dòng)單元，可以加速蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的進(jìn)化及加大蛋白質(zhì)的變異性，內(nèi)含子已經(jīng)成為提高轉(zhuǎn)基因生物基因表達(dá)的重要元件［25］。本研究從甘蔗中克隆到SoNIN1基因的全長(zhǎng)DNA序列，并利用生物學(xué)方法分析了SoNIN1基因的系統(tǒng)進(jìn)化、外顯子-內(nèi)含子基因結(jié)構(gòu)，這不僅有利于從分子層面了解NIN基因的進(jìn)化和基因結(jié)構(gòu)，而且為今后分離、純化甘蔗NIN蛋白和進(jìn)行功能研究提供理論基礎(chǔ)。

4 結(jié)論

克隆獲得SoNIN1基因的DNA序列，全長(zhǎng)4 938 bp，由6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子組成。在翻譯起始密碼子ATG前49 bp存在一個(gè)268 bp的內(nèi)含子

序列，內(nèi)含子1和內(nèi)含子3含有多個(gè)順式作用元件，可能在啟動(dòng)或誘導(dǎo)SoNIN1基因表達(dá)中起作用。植物中性/堿性轉(zhuǎn)化酶可以分為兩個(gè)亞類(lèi)，I類(lèi)基因結(jié)構(gòu)主要是4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子組成，少數(shù)為5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子組成，而II類(lèi)是6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子組成。

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（責(zé)任編輯 馬鑫）

Analysis of Genomic Structure and Introns of SoNIN1 Gene from Sugarcane

Niu Junqi1Wu Chaoxing1Yang Litao1，2Li Yangrui1，2
（1. Agricultural College，Guangxi University / State Key Laoratory of Conservation and Utilization of Subtropical Agro-bioresources，Nanning 530005；2. Sugarcane Research Center，Chinese Academy of Agricultural Sciences / Sugarcane Research Center，Guangxi Academy of Agricltural Sciences / Key Laboratory of Sugarcane Biotechnology and Genetic Improvement（Guangxi），Ministry of Agriculture / Guangxi Key Laboratory of Sugarcane Genetic Improvement / Guangxi Crop Genetic Improvement and Biotechnology Lab，Nanning 530007）

According to the full length cDNA and part of the promoter sequences of the SoNIN1 gene we designed primers，amplified the SoNIN1 gene form gDNA of sugarcane leaves by PCR, and analyzed the gene structure of SoNIN1 by using bioinformatics methods. The results showed that the DNA sequence of the SoNIN1 gene is 4 938 bp, containing six exons and five introns, GenBank accession number KF563902. 5’UTRs of the SoNIN1 gene contain 268 bp introns, and five introns contain low temperature, drought, and hormonal stress response related cisacting elements, which may play a role in transcription and expression regulation of SoNIN1 gene. According to phylogenetic analysis and exonintron gene structure, the NIN proteins can be classified into 2 classes’ type I and type II.

Sugarcane Alkaline/neutral invertase Exon Intron Information analysis

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2014.12.024

2014-05-26

國(guó)家“863”計(jì)劃課題（2013AA102604），廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2011GXNSFF018002，2013NXNSFAA019073），國(guó)家國(guó)際合作項(xiàng)目（2009DFA30820，2013DFA31600），廣西八桂學(xué)者和特聘專(zhuān)家專(zhuān)項(xiàng)經(jīng)費(fèi)

牛俊奇，男，博士研究生，研究方向：甘蔗生理和分子生物學(xué)；E-mail：niujunqi3218@163.com

楊麗濤，女，博士，教授，研究方向：甘蔗生理生化和病蟲(chóng)害；E-mail：liyr@gxu.edu.cn

李楊瑞，男，博士，教授，研究方向：甘蔗育種和生物固氮；E-mail：liyr@gxaas.net