柿霜吡哌酸粉雙層緩釋口腔貼膜的制備及評價

宗 鳴 李 森 牛運祺 白玉華 王 寬 李冰潔 孫宏麗

1.哈爾濱醫科大學大慶校區，黑龍江大慶163319；2.大慶人民醫院，黑龍江大慶163316

柿霜吡哌酸粉雙層緩釋口腔貼膜的制備及評價

宗 鳴1李 森1牛運祺2白玉華1王 寬1李冰潔1孫宏麗1

1.哈爾濱醫科大學大慶校區，黑龍江大慶163319；2.大慶人民醫院，黑龍江大慶163316

目的制備柿霜吡哌酸（PPA）粉雙層緩釋口腔貼膜，并對其進行質量評價。方法評價貼膜的膜外觀、體外黏附力、溶解時間和口腔黏附時間，測定貼膜中PPA含量及貼膜的體外釋放度，評價其體外釋藥行為。結果口腔貼膜的體外黏附力為137 g/cm2，溶解時間為22.74min，口腔黏附時間為23.59 min。含量測定結果顯示，PPA量在0.18～0.54mg/mL之間有良好的線性關系（r=0.9965），回收率為100.54%，RSD=0.78%（n=6）。體外釋藥行為符合一級動力學方程。結論柿霜PPA粉雙層緩釋口腔貼膜處方及制備工藝合理可行，質量符合要求。

柿霜；吡哌酸；口腔貼膜；體外釋放；評價

鼻咽癌、喉癌等頭頸部惡性腫瘤在接受放療和化療過程中常出現口腔黏膜糜爛和潰瘍，給患者造成痛苦，甚至影響治療。中醫學認為實邪熱毒侵及人體耗陰傷津，水不制火，邪熱上炎，而致口舌生瘡，放射性損傷屬火熱毒邪[1]。柿霜是柿餅生產后期與儲藏過程中在其表面出現的白色粉狀物，有潤燥、化痰、止咳的作用[2]，吡哌酸（Pipemidic acid，PPA）為喹諾酮類抗菌藥，有較好的抗菌和促進潰瘍愈合的作用。已有研究表明，將柿霜PPA粉聯合用藥用于口瘡、咽喉痛的治療，可治療放射線引起熱盛耗津所致的口腔潰瘍[3]。但藥物制成散劑后，比表面積增大使得一些有效成分不穩定，患者的依從性很差，且使用不太方便，生物利用度較低，難以發揮持久的藥效，需反復多次給藥，目前本處方一直缺乏有效劑型。為克服上述缺點，選擇使用生物黏附制劑直接作用于口腔潰瘍部位是一種有效的方法[4]。本研究以中藥柿霜與西藥PPA為治療藥物，以海藻酸鈉、羧甲基纖維素鈉、殼聚糖為載藥膜材料，乙基纖維素作為空白隔離層，制成一種具有保護層和黏附層的雙層緩釋口腔貼膜劑。殼聚糖還具有生物相容性和降解性良好，有抗菌消炎止血的作用，可促進口腔黏膜的再生、修復和愈合[5]。該劑型具有用藥方便，延長藥物滯留時間，提高生物利用度，減少給藥次數，達到局部治療的優點。本實驗從該劑型膜外觀、體外黏附力、溶解時間和口腔黏附時間四個方面進行考察，采用紫外分光光度法測定有效成分PPA的含量，并對其體外釋藥行為、穩定性進行初步評價。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

電子天平（天津天馬衡基儀器有限公司）；DF-101S型集熱式磁力式加熱攪拌器（河南省予華儀器有限公司）；101-4-BS電熱鼓風干燥箱（海躍進醫療器械廠）；756MC紫外可見分光光度計（上海精密科學儀器有限公司）；RC-6智能藥物溶出儀（天津新天光）；黏附力測定儀（自制）。

1.2 試藥

柿霜（市售）；PPA（山東新華制藥股份有限公司，批號：1104179）；PPA對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100151-199202）；殼聚糖（BIOSHARP）；明膠（北京奧博星生物技術有限責任公司）；卡波姆（青島天力源生物科技有限公司）；乙基纖維素，羧甲基纖維素鈉（CMC-Na），海藻酸鈉，丙三醇均為天津市大茂化學試劑廠產；無水乙醇（沈陽市華東試劑廠）；其余試劑均為分析純；純化水（自制）。

2 方法與結果

2.1 雙層口腔貼膜的制備

在干凈的玻璃板上均勻地涂上吐溫-80與酒精的混和液（1∶2）作脫膜劑，稱取乙基纖維素2.5 g，加入無水乙醇100 mL，充分溶脹溶解。倒入玻板上，自然晾干作為空白隔離層膜備用。

取海藻酸鈉1 g，殼聚糖2 g，CMC-Na 1 g，加適量蒸餾水靜置24 h后，充分溶脹，完全溶解，備用。將柿霜和PPA（5∶1）4 g溶于6mL丙三醇中，混勻，加入備用液中。加蒸餾水至200mL。將載藥層成膜溶液用勻漿流延成膜法鋪于空白隔離層膜上，40℃干燥成膜，啟膜，裁成3 cm×3 cm，紫外燈下滅菌30 min，即得。分別制成批號為20140304、20140305、20140306三批口腔貼膜。

2.2 性狀

三批口腔貼膜均為黃色半透明的雙層薄膜，表面光潔平滑無氣泡，厚度一致，質地柔韌，色澤均勻。

2.3 體外黏附力的測定

用橡皮法測量膜的黏附力，取橡皮（2 cm×3 cm）兩塊，一塊固定于臺面為下橡皮，另塊與托盤天平相連為上橡皮，平衡天平。取與橡皮大小一致的藥膜一張.黏于下橡皮表面（預先用少量蒸餾水將上、下橡皮濕潤），將上橡皮置于膜上，加5 kg重物壓90 s，移去重物，加砝碼，以5 s內上、下橡皮分離為標準，所加砝碼重量即表示膜的黏附力[6]，結果見表1。

表1 口腔貼膜體外黏附力、黏附時間和溶解時間測定結果

2.4 口腔黏附時間的測定[7]

6名健康志愿者，年齡20～40歲。將三批雙層膜黏附層貼于受試者口腔頰部，壓迫30 s，通過唾液自然潤濕后黏附。記錄雙層膜脫落的時間，結果見表1。

2.5 溶解時間的測定[8]

將100 mL蒸餾水放入燒杯中置于電磁攪拌器上，37℃恒溫水浴，攪拌速度30 r/min，將三批測試膜（1 cm×1 cm）放入水浴中并開始計時，記錄膜劑溶解的時間。結果見表1。

2.6 貼膜中PPA含量的測定

2.6.1 標準曲線制備精密稱定PPA對照品0.018 g，加100 mL水制成每毫升含PPA 0.18 mg的對照品溶液。取0.18mg/mL的PPA標準溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL置100 mL量瓶中，加0.04%氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，在273 nm的波長處測定吸光度，用1 cm比色皿測定樣品的吸光度為x，以y（PPA含量）為縱坐標計算出其回歸方程為：y=0.998 36x+0.0043（r=0.9965），結果表明PPA在0.18～0.54 mg/mL之間有良好的線性關系。見圖1。

圖1 吡哌酸溶液標準曲線

2.6.2 供試品溶液制備取口腔貼膜3批（批號：20140304、20140305、20140306），精密稱重，置100m L容量瓶中，加0.04%氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液2mL，置100 mL量瓶中，加0.04%氫氧化鈉溶液至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.6.3 精密度實驗分別精密吸取PPA對照品溶液2 mL，分別于1 d內測定6次吸光度和連續6 d測定吸光度（波長=273 nm)，結果可知日內和日間精密度吸光度平均值均為0.347，RSD值分別為0.20%和0.28%，日內和日間精密度均小于2%，表明含量測定方法具有較高的精密度。

2.6.4 重復性試驗稱取同一批號（批號：20140306）口腔貼膜各5份，精密稱定重量，按“2.6.2”項下制備供試品溶液，在273 nm測定吸光度，試驗結果表明，本方法重復性較好，RSD為1.86%。

2.6.5 回收率實驗精密稱取同一批供試品（批號：20140306）6份，每份約0.15 g。分別加入PPA對照品溶液（1.23mg/mL）3.5、5.5、7.5mL，分別按“2.6.2”方法制得供試品溶液，測定吸光度，每個濃度平行操作2份，計算回收率。結果見表2。

表2 加樣回收率實驗結果

由表2可知，高、中、低三中劑量的溶液回收率均高于98%，RSD小于2%，表明回收率較高，方法可靠。

2.6.6 穩定性試驗取同一批供試品（批號：20140306），按供試品制備方法制備供試品溶液。分別在0、2、6、12、24 h時，測定吸光度。結果RSD為1.05%（n=5），小于2%，表明樣品測定數據在24 h之內是穩定的。

2.6.7 樣品含量測定取本品3批，按供試品含量測定項下操作，在273 nm的波長處測定吸光度，代入回歸方程計算含量。結果見表3，3批樣中含PPA的平均值為4.64%。。

表3 雙層貼膜中吡哌酸含量測定結果

2.7 體外釋放度的測定

按《中國藥典》2010年版二部附錄XC第三法規定膜劑的溶出度[9]，溶出介質為100 mL人工唾液（2.38 g Na2HPO4，0.19 g KH2PO4，0.8 g NaCl溶于1000 mL水），溫度為（37±0.5）℃，轉速為50 r/min。將貼膜（批號：20140306）貼于玻片上，置于人工唾液中。實驗開始后5、10、15、20、25、30、35、45 min各取樣5 m L。同時補充溶出介質5 mL，0.45μm微孔濾膜濾過后測定PPA含量，以藥物的累積釋放百分數（Q）對時間（t）作釋放曲線圖，結果見圖2。用Excel對釋放特性進行模型擬合，分別以零級、一級動力學方程、Higuchi方程、Peppas方程、對釋藥數據進行擬合，求出相關系數（r）。結果顯示，一級方程的相關性最好，回歸方程為：ln（100-Q）=-0.1462x+5.5012（r=0.9962）。表明本實驗研制的膜劑藥物在37℃人口唾液中呈一級釋放。

3 討論

本方法制得的雙層口腔貼膜是新型緩、控釋系統，也是一種有效的口腔黏膜給藥系統。以2.5%乙基纖維素乙醇液為雙層膜的空白隔離層，克服唾液對載藥層的溶解作用，保證藥物單向緩慢釋放。筆者經過前期制備工藝研究，選擇以海藻酸鈉-羧甲基纖維素鈉-殼聚糖（1∶1∶2）制成載藥膜制備成雙層口腔貼膜，有良好的成膜性和黏附性，外觀均勻，光滑，有利于傷口愈合。

該雙層口腔貼膜采用中西藥結合組方，柿霜通過紫外波譜掃描可知，制劑中柿霜多糖與成膜材料在490 nm處有共同的吸收峰，表明柿霜多糖在490 nm處有成膜材料的干擾。有研究表明，柿霜中糖含量占總重量的78.31%，還原糖占58.21%[10-11]。而處方中殼聚糖是天然多糖中唯一的堿性多糖[11]。因此對柿霜多糖進行定性鑒別也易受到成膜材料的干擾，鑒別口腔貼膜中柿霜多糖的專屬性不強，有待進一步研究。而制劑中PPA的含量容易測定，且無成膜材料干擾，通過一系列預實驗，選擇PPA為含量控制的指標成分。結果表明，該處理方法，雜質含量少，通過線性化范圍實驗，精密度實驗，重復性實驗，加樣回收率測定，穩定性考察等，證明本法結果穩定，切實可行。

據研究表明，黏附力在100～150 g/cm2既可保證一定的口腔滯留時間，又不至于產生黏膜損傷，黏附力接近150 g/cm2為佳[12]，本研究對該雙層口腔貼膜進行了初步的質量評價，按海藻酸鈉∶CMC-Na∶殼聚糖（1∶1∶2）制得的載藥膜黏附力適中，不易脫落，質量穩定，具有使用方便、容易給藥、避免首過效應、提高生物利用度、達到局部和全身治療的優點，適合幼兒、老人和吞咽困難患者用藥的一種新型緩、控釋系統，也是一種有效的口腔黏膜給藥系統[13]。其口腔給藥后藥物滲透性、血藥濃度變化和生物利用度有待進一步研究。

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Preparation and evaluation of dried persimmon icing and PPA Bilayer Sustained Release Oral Film s

ZONGMing1LISen1NIU Yunqi2BAIYuhua1WANG Kuan1LIBingjie1SUN Hongli1
1.Harbin Medical University(Daqing),Heilongjiang Province,Daqing 163319,China;2.Daqing People′s Hospital, Heilongjiang Province,Daqing 163316,China

Objective To prepare and evaluate persimmon icing and PPA Bilayer Sustained Release Oral Films. M ethods The formulation of Bilayer Sustained Release Oral Films of film appearance,adhesion,dissolution time and the oral cavity retention time were evaluated.Themethods to determine the in vitro release rate of the oral films and to evaluate its release behavior in vitro were investigated.Results The average adhesion was 137 g/cm2,themean dissolution timewas 22.74 min,the oral cavity retention timewas 23.59 min.The linear range of PPA were 0.18-0.54 mg/mL (r=0.9965).The average recovery rate was 100.54%,RSD=0.78%（n=6）.In-vitro releasewas fitted to first-order kinetic equation.Conclusion The preparation technique of persimmon icing and PPA Bilayer Sustained Release Oral Films is reasonable and practicable.Quality of the films canmeet the requirement.

Dried persimmon icing;Pipemidic acid;Oral films;In vitro release;Evaluation

R283

A

1673-7210（2014）09（c）-0083-04

2014-06-16本文編輯：衛軻）

黑龍江省衛生廳科研課題（編號2011-235）；黑龍江省青年科學基金項目（編號QC2011C099）。

宗鳴（1981-），女，碩士研究生；研究方向：新藥研發。

孫宏麗（1974-），女，博士，教授，博士生導師；研究方向：藥理學。