中華圓田螺抗氧化-代謝酶系統對轉cry1Ab/Ac基因抗蟲水稻的響應

譚樹華，劉雨芳,*，孫遠東，肖璐，李菲，桂芳艷，劉文海，戈峰

1. 湖南科技大學生命科學學院 園藝作物病蟲害治理湖南省重點實驗室，湘潭411201 2. 中國科學院動物研究所，北京100101

水稻是受害蟲侵襲最為嚴重的糧食作物，選育抗蟲水稻是防治害蟲最經濟有效的方法。目前,應用于植物抗蟲性改良的外源基因主要是編碼蘇云金芽孢桿菌(Bacillusthringiensis)殺蟲晶體蛋白基因(Bt基因)，已獲得的轉Bt抗蟲植物有水稻、玉米、棉花、番茄等50 多種，其中轉Bt棉花在我國已大面積種植[1]。已有大量研究報道轉Bt水稻對靶標害蟲有顯著的殺蟲效果[2-5]，對土壤微生物組成及酶活性[6]、稻田節肢動物群落多樣性[7,8]、非靶標生物[9,10]沒有明顯影響。轉cry1Ab/cry1Ac融合Bt基因水稻華恢 1號(HH1)作為首批獲得農業部批準安全證書(農基安證字(2009)第072號)的轉基因水稻品種，對其生態安全性評價雖已有初步研究：如HH1對二化螟有較強致死力[11]、對白符跳(Folsomiacandida)存活率和繁殖率[12]與根際土壤微生物數量和種類沒有明顯影響[13]。這些均無例外地集中在轉Bt水稻對靶標害蟲殺蟲有效性與對土壤生物、節肢動物的安全性評價，尚未涉及水環境中的生物安全影響評價，不利于從整體全面評價其生態安全。

中華圓田螺(Cipangopaludinacathayensis)俗稱田螺，是淡水腹足類中的優勢種群，也是南方稻田中常見的底棲軟體動物，分布廣、生長迅速、食物類型多樣，能以各種藻類、水生植物、浮游植物、水體有機碎屑為食，也食輪蟲、微生物、水蚤、劍蚤等浮游動物。它能積累用常規方法檢測不出的底泥或水中污染物,是多種污染物的生物積累者, 是環境監測的理想生物種類[14,15]。它們在水中移動性小, 可以真實地反映周圍底泥的實際污染狀況[16]，是一種理想的底泥重金屬毒性和生物可給性指示生物[17]。據報道，田螺肝胰臟CAT活性的變化可作為間接檢測環境的污染程度的指標[18]。因此，本實驗以中華圓田螺為對象，探討轉基因水稻對水生環境中軟體動物抗氧化-代謝酶系統的影響，旨為轉基因水稻對水生生態系統的影響研究積累數據，為轉基因水稻的全面生態風險評價提供科學依據。

1 材料和方法(Materials and methods)

1.1 實驗材料與試驗設計

水稻品種：供試轉Bt基因水稻品種為轉cry1Ab/Ac復合基因抗蟲水稻恢復系華恢1號(HH1)，以其親本非轉基因品種明恢63(MH63)為對照，稻種均由華中農業大學生命科學技術學院相關實驗室提供。

田間種植設計：于2012年6月至9月單季種植于湖南湘潭的項目實驗基地內，手工單本移栽，試驗田1 530 m2,間隔為 9個小區，每小區面積170 m2,并隨機相間分成3組，每組3小區(3次重復)。其中1組種植華恢1號(HH1)，全生育期不施任何化學殺蟲劑；另外2組均種植非轉基因水稻明恢63，其中1組全生育期不施任何化學殺蟲劑，為陰性對照(MH63)，另1組稻田則按當地生產用藥習慣噴施農藥作為陽性對照(MH63C)。水肥管理相同且均按常規生產操作。

MH63C組施藥：全生育期施藥3次，7月2日施用阿維菌素、紋曲清與吡蟲啉；7月21日施用阿維菌素2%、水胺硫磷35%、甲硫乙唑醇27%、曹達5 s與吡蚜酮25%；8月12日施用阿維菌素2%、丙溴辛硫磷25%、速虱靈30%與噻嗪酮25%。施用方法均按說明常規混合施用。

指示動物：以中華圓田螺為實驗檢測指示動物，均采自湘鄉市東郊鄉稻田及相鄰水溝，挑選螺齡相近、體重約2.5 g的健康個體于室內馴養后用于實驗。在稻田平整后水稻移栽前，每小區稻田中以對角線法設置樣方池3個(長×寬=50 cm ×100 cm)，樣方間距約8 m，將池內泥清空置入尼龍紗網框后，再將泥回填并使紗網高出水面上20 cm防逃。水稻移栽后每樣方池中接入田螺20只，水稻收割前10 d全部撿出回收，用于室內生理生化指標測定。

1.2 田螺組織勻漿液制備

將回收的田螺每組隨機取5只，解剖取其肝臟和鰓，用0.86% 預冷生理鹽水分別制成10%的肝、鰓組織勻漿液，檢測各處理組田螺肝、鰓中的超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、酸性磷酸酶(ACP)、谷胱甘肽-S轉移酶(GST)、還原型谷胱甘肽(GSH)與谷胱甘肽過氧化酶(GSH-PX)活性。

1.3 檢測方法

SOD 用鄰苯三酚自氧化法[19]測定,CAT 活性用紫外分光光度法[20]測定,ACP用對硝基酚磷酸法[20]測定，SOD、CAT與ACP的酶活性單位均為U·mg-1pro。GST 活力用CDNB 比色法[21]測定，GSH含量、GSH-PX 活性用南京建成生物公司相應試劑盒測定。酶液蛋白質含量以牛血清蛋白為標準物,考馬斯亮藍法測定[22],單位為mg·mL-1。

1.4 數據處理

實驗數據分析用SPSS17.0統計軟件完成，采用單因素方差分析(ANOVA)、S-N-K、LSD 法進行多重比較檢驗與差異顯著性分析。

2 結果(Results)

2.1 中華圓田螺的SOD響應

分別生長在Bt稻華恢1號(HH1)、非Bt稻明恢63(MH63)及施藥的非Bt稻明恢63(MH63C)3類稻田生境中的中華圓田螺肝臟與鰓SOD活性如圖1所示。HH1生境與MH63C生境中中華圓田螺肝臟SOD活性明顯高于MH63生境，且以HH1生境中SOD活性最高。與對照MH63稻田生境相比，其SOD活性為HH1組極顯著高于MH63組(p<0.01)，MH63C組顯著高于MH63組(p<0.05)；其中HH1組SOD活性較MH63組增加了111.95%、MH63C組較MH63組增加了41.40%，但HH1組僅稍高于MH63C組，差異不顯著(p>0.05)。

與肝臟SOD活性表現不同，鰓SOD活性MH63C組略高于HH1組與MH63組，但MH63組和MH63C組、HH1和MH63C組以及HH1組與MH63組間均無顯著差異(p>0.05)。

2.2 中華圓田螺的CAT響應

3種稻田生境中中華圓田螺CAT活性關系見圖2。其中鰓CAT活性太低，未能檢出。HH1與MH63C生境中中華圓田螺肝臟中SOD活性均極顯著高于MH63生境(p<0.01)，且以HH1生境中CAT活性最高，MH63C組次之，但HH1與MH63C組之間CAT活性差異不顯著。與對照MH63稻田生境相比，HH1和MH63C生境組肝臟CAT活性分別提高了2.513倍和1.357倍。

圖1 不同稻田生境中中華圓田螺SOD活性比較注：** p<0. 01, 下同。Fig. 1 Comparision the activities of SOD of Cipangopaludina cathayensis in different rice fields Note: ** p<0. 01, Same for below

圖2 不同稻田生境中中華圓田螺CAT活性比較Fig. 2 Comparision the activities of CAT of Cipangopaludina cathayensis in 3 different rice fields

2.3 中華圓田螺的GSH-Px響應

田螺肝臟中GSH-Px活性以HH1組最高，MH63組次之，MH63C組最低，但經多重比較與差異顯著性分析，彼此之間均未出現顯著差異(p>0.05)；鰓中GSH-Px活性以MH63C組最高，HH1最低，且MH63C組極顯著高于HH1和MH63組(p<0. 01)，而HH1與MH63之間GSH-Px活性差異不顯著(p>0.05)(圖3)。

2.4 中華圓田螺的GSH響應

GSH含量比較如圖4所示，HH1和MH63C生境中田螺肝臟GSH含量略高于MH63組，但均無顯著差異(p>0.05)。與對照組MH63比較，MH63C組田螺鰓GSH含量是MH63組的GSH含量的1.69倍，差異顯著(p<0.05)，而HH1組田螺鰓GSH含量略低于MH63C組，略高于MH63組，但均無顯著差異。

圖3 不同稻田生境中中華圓田螺肝臟GSH-Px活性Fig. 3 The activities of GSH-Px of Cipangopaludina cathayensis in 3 different rice fields

圖4 不同稻田中中華圓田螺GSH含量注：*p<0. 05Fig. 4 The GSH content of Cipangopaludina cathayensis in 3 different rice fields Note: * p<0. 05

2.5 中華圓田螺的ACP響應

HH1生境中田螺肝臟ACP活性均極顯著高于MH63和MH63C組(p<0.01)。HH1生境組肝臟ACP活性較MH63和MH63C生境組分別提高了112.4%和98.8%，而MH63C和MH63組活性則差異不明顯。鰓ACP活性以MH63C組最高，HH1次之，對照MH63生境組最低，但3種生境中田螺鰓ACP活性差異不顯著(p>0.05)(圖5)。

圖5 不同稻田中中華圓田螺ACP活性Fig. 5 The activities of ACP of Cipangopaludina cathayensis in 3 different rice fields

2.6 中華圓田螺的GST活性響應

MH63C生境中田螺肝臟GST活性最高，極顯著高于MH63和HH1生境組(p<0.01)，其中MH63C組較MH63組GST活性提高了66.16%，而HH1和MH63組間活性差異不顯著(p>0.05)。與肝臟GST活性表現相似，鰓GST活性以MH63C組最高，MH63C組鰓GST活性分別是HH1組與對照MH63組活性的1.7倍與2.02倍，差異極顯著(p<0.01)；HH1組鰓GST活性略高于MH63組，但無顯著差異(p>0.05)(圖6)。

圖6 不同稻田中中華圓田螺GST活性Fig. 6 The activities of GST of Cipangopaludina cathayensis in 3 different rice fields

3 討論(Discussion)

GSH和GST在生物的解毒代謝中發揮重要作用，GSH為GSH-Px和GST 的特有底物，GST催化GSH與一些化學物質和親電子化合物結合, 生成無毒性或毒性小的GSH 硫結合物；同時能催化有機過氧化物還原成相應的醇,與硒谷胱甘肽過氧化物酶(Se-GPx)協同作用起抗氧化作用，從而減少這些物質與細胞內生物大分子結合的可能性，減少有害物質對組織的損傷[24]。熊燕飛等[25]報道轉Bt基因雜交水稻汕優63配制的飼料對昆明種雄性小白鼠體內的保護酶和解毒酶活性影響不明顯,轉基因水稻對昆明種雄性小白鼠的生理代謝無明顯副作用。本實驗中生長在HH1和MH63稻田生境中的中華圓田螺肝組織勻漿液中GSH含量和GST酶活性差異不顯著，表明中華圓田螺通過提升抗氧化酶活性對多余的氧自由基進行有效清除，因而解毒代謝相關酶GST活性和GSH含量變化不明顯，說明HH1號產生的Bt毒蛋白對田螺沒有明顯的毒副作用。

ACP是巨噬細胞溶酶體的標志酶，與機體物質代謝關系密切，它通過催化磷蛋白中磷酯鍵的水解，直接參與磷酸基團的轉移和代謝，在免疫反應中發揮重要作用，并可被外源物質誘導[26]。俞超等[27]報道轉Bt基因水稻在種子萌發和幼苗抗逆性以及水稻的生長能力等方面都要優于原親本，其淀粉酶和過氧化氫酶含量及根系活力均高于對照秀水11。HH1稻田生境中中華圓田螺肝臟ACP酶活性顯著高于MH63稻田生境對照組，表明HH1號稻田生境中中華圓田螺DNA、蛋白質和脂質代謝能力明顯增強，與其抗氧化能力顯著提高相類似，可能與肝臟作為主要的解毒器官和脂肪代謝場所，其抗氧化酶和代謝酶類活性通常較高有關。與肝臟組織勻漿液中所測的各類酶活性情況不同，HH1號生境中中華圓田螺鰓組織勻漿液中所測的各類酶活性與對照組MH63生境比較，均無顯著差異，說明HH1對中華圓田螺鰓組織沒有明顯毒副作用。

施用殺蟲劑明顯激活中華圓田螺肝臟和鰓中抗氧化酶系統和解毒代謝酶活性，MH63C組田螺解毒代謝酶活性明顯高于HH1組，說明Bt毒蛋白對田螺的影響明顯弱于殺蟲劑產生的脅迫作用。采用轉Bt基因水稻防治害蟲對環境生物的毒性影響更小。與Bt水稻對稻田節肢動物群落的影響明顯弱于化學殺蟲劑的研究相似[28]。MH63C和MH63生境中田螺ACP活性并未表現出明顯差異，則與農藥作為強毒性化學物質主要產生毒性作用，因而主要影響解毒代謝酶有關。

轉Bt基因作物的大部分 Bt 毒素可通過根系分泌物、花粉飄落及作物殘體釋放到農田土壤中[29]，Bt毒蛋白質分子所帶電荷或極性基團，會借助于靜電引力吸附到土壤表面上相應的陽離子或陰離子基團上，這種結合態仍有較強的殺蟲活性并能抵抗土壤微生物的降解[30]，土壤中的水稻植株殘體內的Cry1Ab可持續作用于土壤微生物、土壤動物與土壤酶等[31-34]。同時，轉Bt作物中Bt殺蟲蛋白的表達及在環境中的降解存在時空動態[35]，因而在其周圍環境傳遞過程中也可能存在時空動態。在后續研究中可綜合考慮，以便為更全面充分地評價轉Bt基因水稻的安全性提供更多信息。

參考文獻：

[1] 周霞, 程家安, 胡陽, 等. 轉Bt基因水稻克螟稻對黑尾葉蟬種群增長的影響[J]. 中國水稻科學, 2005, 19(1): 74-78

Zhou X, Cheng J A, Hu Y, et al. Effects of transgenic Bt rice on the population development ofNephotettixcincticeps[J]. Chinese Journal of Rice Science, 2005, 19(1): 74-78 (in Chinese)

[2] 劉雨芳, 王鋒, 尤民生, 等. 轉基因水稻及其雜交后代對稻縱卷葉螟的田間抗性檢測[J]. 中國農業科學, 2005, 38(4): 725-729

Liu Y F, Wang F, You M S, et al. Resistance of cry1Ac + SCK transgenic rice and its filial generation to the rice leaf rollerCnaphalocrocismedinalis[J]. Scientia Agricultura Sinica, 2005, 38(4): 725-729 (in Chinese)

[3] 張巍, 張志罡, 付秀芹, 等. 轉Bt基因水稻對稻縱卷葉螟幼蟲體內三種保護酶活性的影響[J]. 昆蟲學報, 2008, 51(10): 1022-1027

Zhang W, Zhang Z G, Fu X Q, et al. Effects of transgenic Bt rice on the activities of three protective enzymes in larvae of the rice leaffolder,Cnaphalocrocismedinalis(Lepidoptera: Pyralidae) [J]. Acta Entomologica Sinica, 2008, 51(10): 1022-1027 (in Chinese)

[4] Ye G Y, Shu Q Y, Yao H W, et al. Field evaluation of resistance of transgenic rice containing a synthetic cryAb gene fromBacillusthuringiensisBerliner to two stem borers [J]. Journal of Economic Entomology, 2001, 94: 271-276

[5] Khanna H K, Raina S K. EliteIndicatransgenic rice plants expressing modified Cry1Ac endotoxin ofBacillusthuringiensisshow enhanced resistance to yellow stem borer (Scirpophagaincertulas) [J]. Transgenic Research, 2002, 11: 411-423

[6] Liu W, Hao L H, Wu W, et al. Transgenic Bt rice does not affect enzyme activities and microbial composition in the rhizosphere during crop development [J]. Soil Biology Biochemistry, 2008, 40(2): 475-486

[7] Bai Y Y, Yan R H, Ye G Y, et al. Field response of aboveground non-target arthropod community to transgenic Bt-Cry1Ab rice plant residues in postharvest seasons [J]. Transgenic Research, 2012, 21: 1023-1032

[8] 劉雨芳, 賀玲, 汪瓊, 等. 轉cry1Ac/sck基因抗蟲水稻對稻田寄生蜂群落影響的評價[J]. 昆蟲學報，2006，49(6): 955-962

Liu Y F, He L, Wang Q, et al. Evaluation of the effects of insect-resistant cry1Ac/scktransgenic rice on the parasitoid communities in paddy fields [J]. Acta Entomologica Sinica, 2006, 49(6): 955-962 (in Chinese)

[9] 高明清,侯守鵬,蒲德強,等.田間轉Bt基因水稻上稻飛虱卵量、孵化率及天敵作用[J].昆蟲學報, 2011, 54(4):467-476

Gao M Q, Hou S P, Pu D Q, et al. Effects of Bt rice on the number and hatch rate of planthopper eggs and their attack by natural enemies in paddy fields [J]. Acta Entomologica Sinica, 2011, 54(4): 467-476 (in Chinese)

[10] 劉雨芳, 賀玲, 汪瓊, 等. 轉cry1Ac/sck基因抗蟲水稻對稻田主要非靶標害蟲的田間影響評價[J]. 中國農業科學, 2007, 40(6): 1181-1189

Liu Y F, He L, Wang Q, et al. Effects of and ecological safety insect-resistantCry1Ac/scktransgenic rice on key non-target pests in paddy fields [J]. Scientia Agricultura Sinica, 2007, 40(6): 1181-1189 (in Chinese)

[11] Li Y Z, Sui H, Chen F J, et al. Effects of insect-resistant transgenic Bt rice with a fused Cry1Ab+Cry1Ac gene on population dynamics of the stem borers,ChilosuppressalisandSesamiainferens, occurring in paddy field [J]. Acta Ecologica Sinica, 2012, 32(6): 1783-1789

[12] Yuan Y Y, Xiao N W, Ge F, et al. Laboratory assessment of the impacts of transgenic Bt rice on the ecological fitness of the soil non-target arthropod,Folsomiacandida(Collembola: Isotomidae) [J]. Transgenic Research, 2013, 22: 791-803

[13] 徐林, 黃啟星, 左嬌, 等. 南繁條件下轉基因水稻對根際土壤微生物的影響[J]. 生物安全學報, 2012, 21(1): 61-66

Xu L, Huang Q X, Zou J, et al. Study of the effects of transgenic rice to the rhizosphere microorganisms in the Plant Breeding Base of Hainan [J]. China journal of biosafety 2012, 21(1): 61-66 (in Chinese)

[14] Livingstone P R. Accumulation of heavy metals in invertebrates and its ecological aspects [J]. Comparative Biochemistry & Physiology, 1991, 100: 151-155.

[15] Burbidge F J, Jacey D J, Webb J, et al. A comparison between particulate (elemental) zinc and soluble zinc(ZnCl2) uptake and effects in the mussel,Mytilusedulis[J]. Archives of Environmental Contamination. Toxicology, 1994, 26: 446-472

[16] Walsh K, Dunstan R H, Murdoch R N, et al. Bioaccumulation of pollutants and changes in population parameters in the Gastropod MollusAustocochleaConstrica[J]. Archives of Environmental Contamination. Toxicology, 1994, 26: 367-373

[17] 郭明新, 林玉環. 用中華圓田螺作為底泥重金屬毒性和生物可給性的指示生物[J]. 環境與開發, 1997, 12(2): 8-11

Guo M X, Lin R H. River SnailCipangopaludinacathayensisas an indicator for toxicity and bioavailability of heavy metals in sediment [J]. Environment and Development, 1997, 12(2): 8-11 (in Chinese)

[18] 雷艷麗, 尹文政, 張玉, 等. 鎘和汞對中華圓田螺過氧化氫酶活性的影響[J]. 內江師范學院學報, 2012, 27(4): 37-40

Lei Y L, Yin W Z M, Zhang Y, et al. Effect of cadmium and mercury on catalase activity of the mudsnail [J]. Journal of Neijiang Normal University, 2012, 27(4): 37-40 (in Chinese)

[19] 鄒國林, 桂興芬, 鐘曉凌, 等. 一種SOD的測活方法—鄰苯三酚自氧化法的改進[J]. 生物化學與生物物理進展, 1985, 13(4): 71-73

Zou G L, Gui X F, Zhong X L, et al. Determination method of SOD pyrogllol autoxidation improvement [J]. Progress in Biochemistry and Biophysics, 1986, 13(4): 71-73 (in Chinese)

[20] 蔣傳葵.工具酶活性測定[M]. 上海, 上海科學技術出版社, 1985, 36-37, 62-64

[21] Luca-Abbott S B D, Richardson B J, McClellan K E, et al. Field validation of antioxidant enzyme biomarkers in mussels (Pernaviridis) and clams (Ruditapesphilip- pinarum) transplanted in Hong Kong coastal waters [J]. Marine Environment Research, 2005, 51: 694-707

[22] Bradford M M. A rapid and sensitive method for the quantification of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding [J]. Analytical Biochemistry, 1976, 72: 248-254

[23] 張巍, 張志罡, 付秀芹, 等. 轉Bt基因水稻對稻縱卷葉螟幼蟲體內三種保護酶活性的影響[J]. 昆蟲學報, 2008, 51(10): 1022-1027

Zhang W, Zhang Z G, Fu X Q, et al. Effects of transgenic Bt rice on the activities of three protective enzymes in larvae of the rice leaffolder,Cnaphalocrocismedinalis(Lepidoptera: Pyralidae) [J]. Acta Entomologica Sinica, 2008, 51(10): 1022-1027 (in Chinese)

[24] 程元愷. 谷胱甘肽的解毒作用與毒性代謝物[J]. 生物化學與生物物理進展, 1994, 21(5): 395-399

Chen Y K. Detoxication and toxic metabolite of glutathione [J]. Progress in biochemistry and Biophysics, 1994, 21(5): 395-399

[25] 艾春香, 陳立僑, 溫小波, 等. 轉Bt基因水稻對雄性小白鼠體內酶活性的影響[J]. 湖北農業科學, 2011, 50(24): 5200-5205

Xiong Y F, Qin T C, Chen C, et al. Effects of transgenic Bt rice on the activities of protective enzymes and detoxification enzymes in Kunming male mouse [J]. Hubei Agricultural Sciences. 2011, 50(24): 5200-5205 (in Chinese)

[26] 艾春香, 陳立僑, 溫小波, 等. VE對河蟹血清和組織中超氧化物歧化酶及磷酸酶活性的影響.臺灣海峽, 2002，21(4): 431-438

Ai C X, Chen L Q, Wen X B, et al. Effect of vitamin E on SOD, ALP and ACP activities of Chinese mitten-handed crab,Eriocheirsinensis[J]. Journal of Oceanography in Taiwan Strait, 2003, 22(1): 24-31 (in Chinese)

[27] 俞超, 張吉, 葉生晅, 等. Bt轉基因水稻生理生化特性研究初報[J]. 江蘇農業科學, 2008, 4: 31-33

Yu C, Zhang J, Ye S H, et al. A preliminary study on the physiological and biochemical characteristics of Bt rice [J]. Jiangsu Agricultural Sciences, 2008, 4: 31-33 (in Chinese)

[28] 劉志誠, 葉恭銀, 胡萃. 抗蟲轉基因水稻和化學殺蟲劑對稻田節肢動物群落的影響[J]. 應用生態學報, 2004, 15(12): 2309-2314

Liu Z C, Ye G Y, Hu C, et al. Effects ofBacillusthuringiensistransgenic rice and chemical insecticides on arthropod communities in paddy-fields [J]. Chinese Journal of Applied Ecology, 2004, 15(12): 2309-2314 (in Chinese)

[29] James R. Utilizing a social ethic toward the environment in assessing genetically engineered insect-resistance in trees. Agriculture and Human Values, 1997, 14(3): 237-249

[30] Saxena D, Flores S, Stotzky G. Vertical movement in soil of insecticidal Cry1Ab protein fromBacillusthuringiensis[J]. Soil Biology Biochemistry, 2002, 34: 111-120

[31] 白耀宇, 蔣明星, 程家安, 等.轉Bt基因水稻Cry1Ab殺蟲蛋白在水稻土中的降解.中國水稻科學, 2004, 18(3):255-261

Bai Y Y, Jiang M X, Cheng J A, et al. Degradation of Cry1Ab toxin protein expressed by Bt transgenic rice in paddy soils. Chinese Journal Rice Science, 2004, 18(3): 255-261 (in Chinese)

[32] 劉立軍, 黃毅, 段妍慧, 等. 轉基因水稻表達的Bt蛋白對擬環紋豹蛛(PardosaPsoudoannulata)生長發育的影響[J]. 激光生物學報, 2011, 20(1): 45-49

Liu L J, Huang Y, duan Y H, et al. Effects of Bt protein expressed by transgenic rice on the development of wolf spider (Parddsapseudoannulata) [J]. Acta Laser Biology Sinica, 2011, 20(1): 45-49 (in Chinese)

[33] 祝向鈺, 李志毅, 常亮, 等. 轉Bt水稻土壤跳蟲群落組成及其數量變化[J]. 生態學報, 2012, 32(11): 3546-3554

Zhu X Y, Li Z Y, Chang L, et al. Community structure and abundance dynamics of soil collembolans in transgenic Bt rice paddy fields [J]. Acta Ecologica Sinica, 2012, 32(11): 3546-3554 (in Chinese)

[34] 李修強, 陳法軍, 劉滿強, 等. 轉基因水稻Bt汕優 63 種植兩年對土壤線蟲群落的影響[J]. 應用生態學報, 2012, 23(11): 3065-3071

Li X Q, Chen F J, Liu M Q, et al. Effects of two years planting transgenic Bt rice (BtSY63) on soil nematode community [J]. Chinese Journal of Applied Ecology, 2012, 23(11): 3065-3071 (in Chinese)

[35] 白耀宇, 蔣明星, 程家安. Bt水稻Cry1Ab殺蟲蛋白表達的時間動態及其在水稻土中的降解[J]. 生態學報, 2005, 25(7): 1583-1590

Temporal expression patterns of Cry1Ab insecticidal protein in Bt rice plants and its degradation in paddy soils [J]. Acta Ecologica Sinica, 2005, 25(7): 1583-1590 (in Chinese)