紫外分光光度法測定沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物總含量

劉洋洋，楊 云，林 波，黃俊卿

(1.中國醫學科學院&北京協和醫學院 藥用植物研究所海南分所 海南省南藥資源保護與開發重點實驗室，海南 萬寧 571533；2.中國醫學科學院&北京協和醫學院 藥用植物研究所，北京 100193)

沉香是瑞香科沉香屬植物白木香[Aquilariasinensis(Lour.) Spreng]含有樹脂的木材，具有行氣止痛、溫中止嘔、納氣平喘的功效[1]，臨床使用廣泛，是傳統名貴中藥。近年來，大量研究表明沉香倍半萜和2-(2-苯乙基)色酮類化合物是沉香的主要成分，從沉香中已分離鑒定了63個2-(2-苯乙基)色酮類化合物[2-3]。除沉香外，迄今僅從禾本科白茅(Imperatacylindrica)[4]、白羊草(Bothriochloaischaemum)[5]和葫蘆科甜瓜(CucumismeloL.var.reticulatus)[6]中分離得到過2-(2-苯乙基)色酮類化合物，該類化合物具有不同程度的抗過敏和神經保護等活性[4]，是沉香品質評價的重要指標性成分[7-8]。

戚樹源等[9]建立了測定6,7-二甲基-2-(2-苯乙基)色酮和6-甲氧基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮含量的HPLC方法，并分析了白木香感染黃綠墨耳菌(Menanotusflavovirens)3 d后2個2-(2-苯乙基)色酮化合物的含量變化。何夢玲等[10]建立了測定6,7-二甲氧基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮、6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮、6-甲氧基-2-[2-(3′-甲氧基)苯乙基]色酮類和6-甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮等4種2-(2-苯乙基)色酮類化合物含量的LC-MS方法，并對黃綠墨耳菌提取液誘導的白木香根懸浮培養細胞中2-(2-苯乙基)色酮類化合物含量進行分析。陳亞等[11]建立了測定沉香藥材中6-羥基-2-[2-(4′-甲氧基苯乙基)]色酮和6-羥基-2-(2-苯乙基)色酮含量的HPLC方法，并對3批沉香樣品進行分析。Okudera等[12]建立了測定沉香藥材中AH3、AH4、AH5、AH6等4個2-(2-苯乙基)色酮類化合物含量的HPLC方法。

2-(2-苯乙基)色酮類化合物是沉香在形成過程中產生的一類化合物[13]，且其含量在不同品質等級的沉香藥材中存在差異[7-8]。現有報道[9-12]關于沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物含量測定的方法都是針對某個或數個2-(2-苯乙基)色酮類化合物建立的，難以測定或比較不同沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物的總含量。而目前關于沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物總含量的測定方法尚未見報道。因此，作者建立了一種測定沉香中2-(2-苯乙基)色酮類化合物總含量的紫外分光光度法，并將其應用于沉香藥材的品質評價。

1 實驗

1.1 材料

沉香樣品的特征及來源信息見表1。其中野生沉香藥材于2012年4月購于海南省沉香國際博覽會，經中國醫學科學院藥用植物研究所魏建和研究員鑒定為瑞香科植物白木香[Aquilariasinensis(Lour.) Spreng]含有樹脂的木材。憑證樣本保存于中國醫學科學院藥用植物研究所海南分所南藥化學實驗室沉香標本庫。

表1 沉香樣品信息表

1.2 試劑與儀器

6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮(含量>99%),自制；甲醇、石油醚(30～60 ℃)、乙醚均為國產分析純。

UV-2550型紫外分光光度計，日本島津公司；AR1140/C型電子天平，美國奧豪斯公司；SK8200H6型超聲波提取器，上海科導超聲儀器有限公司；HH-6型水浴鍋，常州國華電器有限公司；N-1100型旋轉蒸發儀，日本東京理化器械株式會社。

1.3 方法

1.3.1 溶液的制備

對照品溶液：精密稱取6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮1.5240 mg，用甲醇溶解，定容至100 mL，即得2-(2-苯乙基)色酮類化合物對照品溶液。

供試品溶液：沉香藥材粉碎過4號篩，取沉香粉末20 mg，精密稱定，置索氏提取器中。加入70 mL石油醚，置于65 ℃水浴中回流提取3 h除去色素；再加入100 mL乙醚于50 ℃水浴中回流提取6 h。回收溶劑，濃縮物用甲醇溶解并定容至10 mL，即得供試品溶液。

1.3.2 測定波長的選擇

采用紫外分光光度計在200～400 nm范圍內分別對2-(2-苯乙基)色酮類化合物對照品溶液和供試品溶液進行全波長掃描，選擇適宜的測定波長。

1.3.3 線性關系考察

精密稱取一定量6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮，加甲醇溶解并稀釋成質量濃度(mg·L-1)為1.5625、3.125、6.250、9.375、12.500、15.625的溶液。以甲醇為空白，采用紫外分光光度計于230 nm處測定各溶液的吸光值，考察線性關系。

1.3.4 方法學考察

1)精密稱取沉香藥材E粉末樣品6份制成供試品溶液，編號1#～6#。平行測定，考察方法的重復性。

2)取1#供試品溶液，于230 nm處連續測定6次，考察方法的精密度。

3)取1#供試品溶液，于230 nm處測定吸光值，每隔30 min測定1次，連續測定11次，考察樣品的穩定性。

1.4 回收率實驗

分別取1 mL上述1#～6#供試品溶液，各加入1 mL對照品溶液(0.0152 mg·mL-1)，測定吸光值，計算回收率。

1.5 樣品測定

取不同沉香藥材粉末樣品約20 mg，精密稱定，制成供試品溶液，測定吸光值，根據回歸方程計算不同沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物總含量。

2 結果與討論

2.1 測定波長

2-(2-苯乙基)色酮類化合物對照品溶液和供試品溶液的紫外掃描光譜見圖1。

由圖1可知，2-(2-苯乙基)色酮類化合物對照品溶液和供試品溶液在230 nm附近均有較強吸收。因此，可將230 nm作為沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物紫外分光光度法的測定波長。

2.2 線性關系

以6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮溶液的質量濃度(y)為橫坐標、吸光值(x)為縱坐標作圖，擬合線性回歸方程為：y=0.096x+0.043(R=0.9984，n=6)。表明，6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮溶液在1.5625～15.625 mg·L-1范圍內，其吸光值與質量濃度具有良好的線性關系。

圖1 2-(2-苯乙基)色酮類化合物對照品溶液(a)和供試品溶液(b)的紫外掃描光譜Fig.1 UV Spectra of 2-(2-phenylethyl) chromones reference solution(a) and sample solution(b)

2.3 重復性

實驗發現，2-(2-苯乙基)色酮類化合物在1#～6#樣品中的質量分數分別為1.55%、1.58%、1.63%、1.55%、1.61%和1.60%，平均值為1.59%，RSD為2.06%，表明方法的重復性良好。

2.4 精密度

精密度實驗發現，連續測定6次的吸光值RSD為0.53%，表明方法精密度良好。

2.5 穩定性

穩定性實驗發現，連續測定11次的RSD值為1.08 %，表明樣品在5 h內穩定性良好。

2.6 回收率實驗結果(表2)

表2 加樣回收率測定結果(n=6)

2.7 樣品測定結果(表3)

由表3可知，編號為E、D、C的野生沉香藥材(品質等級分別為一級、二級、三級)中2-(2-苯乙基)色酮類化合物的總含量分別為1.59%、1.30%和0.98%，2-(2-苯乙基)色酮類化合物的總含量高低與其品質等級順序相同；編號為F的“通體香”沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物的總含量為2.73%，高于一級野生沉香藥材；編號為A采用“火烙法”在白木香樹上生產的沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物的總含量為1.12%，介于二級和三級野生沉香藥材之間；編號為B采用“接菌法”在白木香樹上生產的沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物的總含量為0.83%，低于三級野生沉香藥材。表明，采用“通體結香技術”在白木香樹上生產的沉香藥材品質高于一級野生沉香藥材，遠高于采用“接菌法”和“火烙法”在白木香樹上生產的沉香藥材。

表3 不同沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物 總含量的測定結果(n=3)

2.8 討論

2-(2-苯乙基)色酮類化合物都具有2-(2-苯乙基)色酮母核結構，作者前期對沉香藥材中6個2-(2-苯乙基)色酮類化合物{6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮、6,8-二羥基-2-(2-苯乙基)色酮、6,8-二羥基-2-[2-(3′-甲氧基-4′-羥基苯乙基)]色酮、6-羥基-2-(2-苯乙基)色酮、6,7-二甲氧基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮、7-羥基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]}進行紫外全波長掃描，發現6個2-(2-苯乙基)色酮類化合物在230 nm附近均具有較強的紫外吸收。在此，對沉香藥材色酮提取液和沉香藥材中主要的2-(2-苯乙基)色酮類化合物——6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮進行紫外全波長掃描，結果表明，沉香藥材色酮提取液與色酮類化合物對照品溶液在230 nm附近均有較大吸收，因此，將230 nm作為紫外分光光度法的測定波長。

3 結論

根據2-(2-苯乙基)色酮類化合物都具有2-(2-苯乙基)色酮母核結構且其在230 nm波長下具有較強吸收的特點，建立了測定沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物總含量的紫外分光光度法。方法學考察結果表明，該方法測定沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物的總含量重復性好，在5 h內穩定性良好，其加樣回收率為101.24%(RSD=2.25%)，具有操作簡便、快速、準確度高、用樣少的特點，可用于沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物總含量測定，以及對不同沉香藥材進行品質評價。

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