eRF3b片段對Con A誘導的急性肝損傷的保護性作用研究

劉志鵬，員美娜，梁 辰，劉斯靜，吳曉雪，劉殿武*(.河北醫科大學公共衛生學院流行病與衛生統計學教研室，河北 石家莊 05007；2.內蒙古自治區呼和浩特市食品化妝品監督管理所學校食堂食品安全監管科，內蒙古 呼和浩特 0000；.河北醫科大學公共衛生學院社會醫學與衛生事業管理教研室，河北 石家莊05007；.河北醫科大學期刊社，河北 石家莊 05007)

·研究快報·

eRF3b片段對Con A誘導的急性肝損傷的保護性作用研究

劉志鵬1,2，員美娜3，梁 辰1，劉斯靜4，吳曉雪1，劉殿武1*
(1.河北醫科大學公共衛生學院流行病與衛生統計學教研室，河北 石家莊 050017；2.內蒙古自治區呼和浩特市食品化妝品監督管理所學校食堂食品安全監管科，內蒙古 呼和浩特 010010；3.河北醫科大學公共衛生學院社會醫學與衛生事業管理教研室，河北 石家莊050017；4.河北醫科大學期刊社，河北 石家莊 050017)

肝炎,自身免疫性；伴刀豆球蛋白A；eRF3b片段

肝臟疾病是一類嚴重的公共衛生問題，很多原因均可導致肝臟發生病變，長期肝損傷將最終發展為肝衰竭[1]。伴刀豆球蛋白A(concanavalin A,Con A)誘導的急性肝損傷模型是一個較理想的T細胞介導的肝炎小鼠模型，常用來模擬人病毒性和自身免疫性肝病[2]。本課題組早期利用弱陽離子磁珠純化和基質輔助激光解析離子化飛行時間質譜分析尋找肝硬化和肝癌潛在的早期血清生物學標志物的過程中，分離得到一個相對分子質量為4 210 000的多肽[3]，進一步分析顯示該多肽為真核肽鏈釋放因子3b(eukaryotic peptiae chain release factor GTP-bind subunit,eRF3b)的一個36個氨基酸片段，其在慢性肝炎患者中表達水平高于肝硬化和肝癌患者。本研究觀察人工合成的該eRF3b片段對Con A誘導的小鼠急性肝損傷的預防及治療作用，旨在為臨床治療肝病提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 動物來源及分組：本研究使用6～8周齡雄性Balb/c小鼠124只，購于河北省實驗動物中心。本研究共分為4部分實驗，分別為預防性給藥實驗、預防性給藥生存分析實驗、治療性給藥實驗、治療性給藥生存分析實驗，將小鼠隨機分為14組。其中，預防性給藥實驗4組，分別為正常組、模型組、陽性組及多肽組，每組8只小鼠；預防性給藥生存分析實驗3組，分別為模型組、陽性組及多肽組，每組10只小鼠；治療性給藥實驗4組，分別為正常組、模型組、陽性組及多肽組，每組8只小鼠；治療性給藥生存分析實驗3組，分別為模型組、陽性組及多肽組，每組10只小鼠。

1.2 處理方式

1.2.1 預防性給藥實驗：模型組、陽性組及多肽組小鼠分別給予生理鹽水0.25mL、地塞米松500μg/kg或eRF3b片段150μg/kg，1h后均給予12mg/kg Con A。正常組小鼠2次均給予生理鹽水0.25mL。Con A注射12h后處死小鼠，采集血清用全自動生化分析儀檢測各組血清丙氨酸轉氨酶(alanine aminotransferase，ALT)和天冬氨酸轉氨酶(aspartate aminotransferase，AST)水平；分離肝組織，石蠟包埋后進行HE染色。

1.2.2 預防性給藥生存分析實驗：模型組、陽性組及多肽組分別注射生理鹽水0.25mL、地塞米松500μg/kg及eRF3b 150μg/kg片段，1h后均給予致死劑量25mg/kg Con A，觀察各組小鼠Con A注射后72h內的生存情況，進行生存分析。

1.2.3 治療性給藥實驗：模型組、陽性組及多肽組小鼠均給予12mg/kg Con A，0.5h后分別給予生理鹽水0.25mL、地塞米松500μg/kg或eRF3b片段150μg/kg。正常組小鼠2次均給予生理鹽水0.25mL。檢測Con A注射12h后各組血清ALT和AST水平，肝組織進行HE染色。

1.2.4 治療性給藥生存分析實驗：模型組、陽性組及多肽組小鼠均給予致死劑量25mg/kg Con A，0.5h后分別給予生理鹽水0.25mL、地塞米松500μg/kg及eRF3b片段150μg/kg，觀察各組小鼠Con A注射后72h內的死亡情況，進行生存分析。

1.3 統計學方法：應用SPSS13.0進行統計學分析。多組均數比較采用Kruskal-WailH檢驗，組間兩兩比較采用LSD檢驗；生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-rank檢驗。P<0.05差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 eRF3b片段預防性給藥對Con A所致肝損傷的作用：Con A注射12h后，模型組小鼠血清ALT和AST水平均顯著高于正常組(P<0.01)；陽性組和多肽組血清ALT和AST水平均顯著低于模型組(P<0.01)；多肽組ALT水平高于陽性組(P=0.043)，AST水平與陽性組差異無統計學意義(P=0.768)。HE染色結果顯示，正常組小鼠肝組織結構清晰、有序排列，模型組小鼠肝組織中出現大片狀壞死區域及淋巴細胞浸潤，其余各組中均未見明顯壞死區域。

2.2 eRF3b片段預防性給藥對給予致死劑量Con A小鼠生存率的影響：模型組、陽性組及多肽組小鼠Con A注射后72h生存率分別為20%、80%和70%，中位生存時間分別為11、72和72h。多肽組和陽性組小鼠生存率均顯著高于模型組(P<0.01)，生存時間顯著延長；而多肽組與陽性組之間差異無統計學意義(P=0.668)。

2.3 eRF3b片段治療性給藥對Con A所致肝損傷的作用：Con A注射12h后，模型組小鼠血清ALT和AST水平均顯著高于正常組(P<0.01)；陽性組和多肽組小鼠血清ALT及AST水平均顯著低于模型組(P<0.01)；多肽組ALT和AST水平與陽性組相比差異均無統計學意義(P=0.898、0.840)。HE染色顯示，多肽組和陽性組小鼠肝組織中均未見明顯壞死區域。

2.4 eRF3b片段治療性給藥對給予致死劑量Con A小鼠生存率的影響：模型組、陽性組及多肽組小鼠Con A注射后72h生存率分別為20%、60%和50%，中位生存時間分別為13、72和58h。與模型組相比，eRF3b片段和地塞米松顯著提高了致死劑量Con A誘導小鼠的生存率(P=0.026、0.011)，延長了生存時間；而陽性組與多肽組之間差異無統計學意義(P=0.792)。

3 討 論

有研究[4]顯示，Con A所誘導肝損傷主要表現為血清ALT和AST水平顯著升高，肝組織出現廣泛壞死和凋亡。本研究中，與正常組相比Con A模型組血清轉氨酶水平顯著升高，且肝組織中出現典型肝壞死表現和淋巴細胞浸潤，結果與文獻報道一致。實驗顯示，eRF3b片段預防性及治療性給藥均顯著降低血清ALT和AST水平，同時肝損傷明顯減輕。說明eRF3b片段可有效預防和治療Con A所致肝損傷。進一步研究顯示，eRF3b片段預防性及治療性給藥均顯著提高經致死劑量Con A處理小鼠的生存率、延長生存時間。因此，有充分理由認為該eRF3b片段對Con A所誘導肝炎有較好的預防和治療作用。

[1] WANG C,NIE H,LI K,et al.Curcumin inhibits HMGB1 releasing and attenuates concanavalin A-induced hepatitis in mice[J].Eur J Pharmacol,2012,697(1/3):152-157.

[2] SHAO X,QIAN Y,XU C,et al.The protective effect of intrasplenic transplantation of Ad-IL-18BP/IL-4 gene-modified fetal hepatocytes on Con A-induced hepatitis in mice[J].PLoS One,2013,8(3):e58836.

[3] 李曼,賈媛,員美娜,等.真核肽鏈釋放因子eRF3b在人肝組織及體外肝細胞中的表達[J].河北醫科大學學報,2012,33(9):1091-1092.

[4] VOLAREVIC V,MITROVIC M,MILOVANOVIC M,et al.Protective role of IL-33/ST2 axis in Con A-induced hepatitis[J].J Hepatol,2012,56(1):26-33.

(本文編輯：許卓文)

2014-10-15；

2014-10-30

河北省衛生廳適用技術跟蹤項目(GL2012059)；河北省衛生廳醫學科學研究重點課題(20110041)

劉志鵬(1985-),男,內蒙古烏蘭察布人，內蒙古自治區呼和浩特市食品化妝品監督管理所醫師，醫學碩士，從事肝病分子流行病學研究。

*通訊作者。E-mail:liudw56@tom.com

R575.1

B

1007-3205(2014)12-1458-02

10.3969/j.issn.1007-3205.2014.12.035