一株解鉀解磷菌株的篩選

王金昌，鄭國華，傅筱沖

(江西省科學院微生物研究所，江西 南昌330096)

化學肥料的長期低效施用，會造成土壤中某些礦質元素的過度積累和土壤理化性質的變化，而且會引起環境污染，影響人類健康。研究人員發現植物根際促生細菌(plant growth promoting rhizohacteria，PGPR)能夠極大的減少這些化學肥料的利用。本實驗分離篩選到一株能解鉀又能解磷的路德維希腸桿菌，并對其促生性能進行試驗。

1 材料與方法

1.1 培養基

鉀細菌分離培養基:葡萄糖10.0 g，Na2HPO40.2 g，MgSO4·7H2O 0.2 g，NaCl 0.2 g，CaSO4· 2H20 0.2 g，CaCO35.0 g，瓊脂15.0 g，鉀長石粉(200目)2.5 g，去離子水1 000 mL，pH 7.2。

有機磷培養基:葡萄糖10 g，NaCl 0.3 g，MgS04·7H2O 0.3 g，MnSO4·4H2O 0.03g，CaCO35 g，瓊脂15～18 g，pH 7.0～7.5，(NH4)2SO40.5 g，KCl 0.3 g，FeSO4·7H2O 0.03 g，酵母膏0.4 g，卵磷脂2 g，蒸餾水1 000 mL，121℃滅菌20 min。

1.2 樣品采集

菜園土壤。

1.3 分離篩選方法

樣品+無菌水，梯度稀釋，涂布在鉀細菌分離培養基平板上，28℃培養，挑取產生明顯溶解圈的單菌落，純化后保存。

1.4 上清液速效鉀測定

準確稱取0.5 g鉀礦粉到95 mL解鉀培養基(無鉀)中，121℃滅菌20 min，待測菌懸液以5%的接種量接入搖瓶菌種，每個菌種做3個平行，同時設無接種對照37℃，160 rpm/min培養25 d，離心培養液，吸取4 mL離心上清液，利用火焰分光光度計法測鉀。

1.5 平板檢測分離到的細菌的解磷能力

用滅菌牙簽挑取菌株的單菌落點植于有機磷平板上，將平板倒置于30℃恒溫箱中培養5 d，觀察菌落生長情況及透明圈產生情況。

1.6 有機磷液體培養中解磷能力測定

待測菌懸液以5%的接種量接種到有機磷液體培養基，置30℃，160 rpm/min振蕩培養5 d后，離心取2 mL上清液，采用K2S2O4消解，磷鉗藍比色法測定上清液磷含量。

1.7 菌種鑒定

細菌16S rDNA鑒定:收集LB培養液中培養的菌體，采用UNIQ-10柱式細菌基因組DNA抽提試劑盒提取細菌的總DNA。……