安宮止血顆粒的質量標準研究

王 坤， 謝強勝

（山東省食品藥品檢驗所， 山東 濟南 250101）

安宮止血顆粒的質量標準研究

王 坤， 謝強勝

（山東省食品藥品檢驗所， 山東 濟南 250101）

目的 完善安宮止血顆粒 (益母草、 馬齒莧) 的質量標準， 以控制藥品質量。 方法 修訂原標準中益母草薄層色譜法鑒別， 增加馬齒莧的薄層色譜鑒別； 采用 HPLC-ELSD法測定鹽酸水蘇堿， Venusil HILIC色譜柱， 流動相為乙腈-0.2%冰醋酸 (80 ∶20) ， 體積流量 1.0 mL/min， 漂移管溫度為 90 ℃。 結果 定性鑒別方法專屬性強、 特征斑點清晰。 鹽酸水蘇堿進樣量在 1.275 ～10.20 μg范圍內， 積分值的自然對數與進樣量的自然對數線性關系良好， r= 0.999 5， 平均回收率 99.52%， RSD為 1.26%。 結論 本方法操作簡單， 結果準確， 能夠有效地控制安宮止血顆粒的質量。

安宮止血顆粒； HPLC-ELSD； 鹽酸水蘇堿

安宮止血顆粒為山東東阿阿膠股份有限公司獨家生產品種。由益母草、馬齒莧二味中藥材經過提取，濃縮至稠膏，干燥，粉碎，過篩，制成中藥顆粒劑。為了更好地控制藥品質量，提高質量標準，在原標準的基礎上修訂了薄層色譜法對益母草的鑒別， 增 加 了 馬 齒 莧 的 TLC定 性 鑒 別， 并 采 用HPLC-ELSD法， 測定益母草中鹽酸水蘇堿的量，方法簡單，靈敏，重復性好。

1 儀器與試藥

Agilent1200 高 效 液 相 色 譜 儀， Mettler AE240電子天平。 乙腈、 甲醇為色譜純 (天津康科德)，無水乙醇、乙酸乙酯為分析純 (國藥集團化學試劑有限公司)， 薄層色譜硅膠 G預制板 (青島海洋化工廠分廠)，鹽酸水蘇堿 (購自中國藥品生物制品檢定所， 供含量測定用， 批號 110712-200508)，馬齒莧對照藥材 (企業提供)。 安宮止血顆粒由山東東阿股份有限公司生產， 規格為 4g/袋； 安宮止血顆粒缺益母草陰性對照、缺馬齒莧陰性對照均由山東東阿股份有限公司提供。

2 方法與結果

2.1 益母草薄層鑒別 原標準中益母草薄層鑒別項下供試品溶液制備繁瑣［1］， 展開時間較長， 本實驗對其進行驗證并進行修改。取本品 1 g或 1.5 g(加糖型)， 研細，加 70%乙醇 25 mL， 超聲 30 min， 取出， 放冷， 濾過， 濾液蒸干， 殘渣加甲醇1 m L使溶解，作為供試品溶液。 另取鹽酸水蘇堿對照品， 加乙醇制成每1 mL含5 mg的溶液， 作為對照品溶液。 照薄層色譜法［1］試驗， 吸取上述兩種溶液各 10 μL， 分別點于同一硅膠 G薄層板上，以丙酮-無水乙醇-鹽酸 (10 ∶6 ∶1) 為展開劑， 展開， 取出，晾干， 在 105 ℃加熱 15 min，放冷， 噴以稀碘化鉍鉀試液-三氯化鐵試液 (10 ∶1) 混合溶液至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置 上， 顯相同 顏色的 熒光斑 點［2-3］， 陰性對照無干擾。 見圖1。

圖1 益母草的薄層色譜鑒別圖Fig.1 TLC chromatogram of Leonuri Herba

2.2 馬 齒 莧 的 薄 層 鑒 別［4-7］取 本 品 4 g或 5 g (加糖型)， 研細，加稀鹽酸 3 mL與乙醇 25 mL，超聲處理 30 min， 濾過， 濾液蒸干， 殘渣加甲醇 2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取馬齒莧對照藥材 2 g， 同法制成對 照 藥材溶液［8］。 照薄層色譜法［1］試驗， 吸取上述兩種溶液各 2 μL， 分別點于同一硅膠 G薄層板上， 以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5 ∶3 ∶1 ∶1) 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以 0.2%茚三酮乙醇溶液，在 105 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品藥材相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾。見圖2。

2.3 鹽酸水蘇堿的測定［9-14］

2.3.1 色譜條件與系統適用性試驗 以丙基酰胺鍵合硅膠為填充劑； 乙腈-0.2%冰醋酸溶液 (80 ∶20) 為流動相； 蒸發光散射檢測器檢測； 柱溫35 ℃，體積流量 1.0 mL/min。 理論板數按鹽酸水蘇堿峰計算為 15 192。 色譜圖見圖 3。

圖2 馬齒莧的薄層色譜鑒別圖Fig.2 TLC chrom atogram of Portulacae Herba

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸水蘇堿12.75 mg， 至 25 mL量瓶，加 70%乙醇定容， 搖勻， 即得 0.51 mg/mL的對照品溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 取裝量差異項下本品，研細， 取約 0.5 g(加糖型 0.75 g)， 精密稱定， 置具塞錐形瓶中， 精密加入70%乙醇25 mL， 稱定質量， 超 聲 處 理 ( 功 率 300 W， 頻 率 40 kHz) 45 min， 取出， 放冷， 再稱定質量， 用 70%乙醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3.4 陰性溶液的制備 取不加益母草的空白樣品按照 “2.3.3” 項下方法， 制成溶液， 即得。

2.3.5 線性關系的考察 分別精密吸取鹽酸水蘇堿對照品溶液 2.5、 5、 10、 15、20 μL， 注入液相色譜儀，測其峰面積，以峰面積的自然對數為縱坐標，對照品進樣量的自然對數為橫坐標，計算，結果回歸方程為 y=1.213 6x+7.217 3， r=0.999 5。鹽酸水蘇堿進樣量在 1.275 ～10.200 μg范圍內，進樣量自然對數與峰面積積分值自然對數呈良好的線性關系。

圖3 鹽酸水蘇堿 HPLC色譜圖Fig.3 HPLC chromatograms of stachydrine hyd rochloride

2.3.6 精密度試驗 精密吸取上述對照品溶液 10μL， 連續進樣 6 次， 測得峰面積積分值。 峰面積積分值自然對數的 RSD為 0.029%， 說明儀器精密度良好。

2.3.7 穩定性試驗 取同一批樣品按 “2.3.3”項方法制備， 分別于配制后 0、 2、 4、 6、 12 h， 精密吸取10 μL， 注入液相色譜儀， 測定峰面積， 計算峰面積積分值的自然對數及其平均值。結果鹽酸水蘇堿 RSD為 0.039%。 表明樣品在 12 h 內基本穩定。

2.3.8 重 復 性 試 驗 取 同 一 批 樣 品 ( 批 號110401)6 份，按 “2.3.3”項方法制備 6 份。 精密吸取10 μL，注入液相色譜儀， 計算，結果鹽酸水蘇堿平均含有量為 72.6 mg/袋， RSD為 1.02%。

2.3.9 加樣回收率試驗 取同一批樣品 (批號110401)6 份各 0.25 g， 精密稱定，置于具塞錐形瓶中， 分別加入對照品溶液 (鹽酸水蘇堿 1.06 mg/mL)5 m L， 再精密加入70%乙醇 20 mL， 稱定質量， 超聲處理 (功率 300 W， 頻率 40 kHz)45 min， 放冷，再稱定質量，用 70%乙醇溶液補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。精密吸取 10 μL， 注入液相色譜儀， 進行測定， 計算回收率。結果見表1。

表 1 回收率試驗結果 （n=6）Tab.1 Results of recovery tests（n=6）

2.3.10 樣品測定 分別精密吸取對照品溶液 5 μL、 10 μL與供試品溶液 10 μL， 注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法對數方程計算，即得。結果見表2。

表2 鹽酸水蘇堿測定結果Tab.2 Results of the determ ination for astragaloside

3 討論

3.1 提取溶劑、 提 取方式 及取樣量考察［15-16］本實驗用甲醇、 70%乙醇、 50%乙醇作為溶媒， 超聲處理 45 min， 對安宮止血顆粒中鹽酸水蘇堿的提取率進行考察， 結果 70%乙醇提取得率高于甲醇和50%乙醇， 而且 50%乙醇提取時雜質峰較多且提取樣品不易濾過， 因此確定提取溶劑 70%乙醇。

3.2 TLC鑒別條件考察 對益母草、 馬齒莧薄層鑒別進行耐用性試驗，對不同溫濕度與不同薄層板按上述方法進行展開，均取得良好展開效果且陰性樣品無干擾，因而益母草、馬齒莧薄層色譜鑒別按上述檢測方法適用范圍廣。

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Quality standard for Angong Zhixue G ranules

WANG Kun， XIE Qiang-sheng
(Shandong Provincial Institute for Food and Drug Control， Jinan 250101， China)

Angong Zhixue Granules； HPLC-ELSD；stachydrine hydrochloride

927.2

:A

:1001-1528(2014)02-0318-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.02.022

2013-03-07

王 坤 (1971—)， 男， 副主任藥師， 主要從事藥物檢驗研究。 Tel:(0531)81216510

［17］ 焦 燕， 王英鋒， 劉鎖蘭.LC-MS/MS 法同時測定不同產地半枝蓮中野黃芩苷和芹菜素含量［J］.藥物分析雜志，2009， 29(9):1451-1453.